全 文 ：#研究论文#
ƒ型 !‹ 型居群的铁皮石斛µ⁄‘„ Œ×≥区序列差异
及 ≥‘°现象的研究
丁小余t ou o王峥涛t o徐珞珊t o徐 红t o周开亚u o施国新u
k t q中国药科大学 生药学研究室 o江苏 南京 utssv{ ~
u q南京师范大学 生命科学学院 o江苏 南京 utss|zl
≈摘要  目的 }研究铁皮石斛主产区 ƒ型和 ‹ 型居群 µ⁄‘„ Œ×≥碱基序列的差异 ∀方法 }运用 °≤ • 直接测序
法对广西 !贵州 !云南铁皮石斛主要居群的 µ⁄‘„ Œ×≥区k包括 Œ×≥t ox q{≥ µ⁄‘„ oŒ×≥ul碱基序列进行了序列测定 ∀
结果 }在铁皮石斛各居群中 oƒ型居群与 ‹ 型居群植株的 µ⁄‘„ Œ×≥区碱基序列有 u个位点差异 o且变异分别发生
在 Œ×≥t区及 x q{≥区内 ∀研究表明 }铁皮石斛居群内部µ⁄‘„ Œ×≥区的差异与植物生活型的差异呈一定的相关性 o
‹ 型居群的铁皮石斛是 ƒ型的变种 ∀在 ƒ型与 ‹ 型居群间 o其 x q{≥ µ⁄‘„区存在单核苷酸多态k≥‘°l现象 ∀首次
报道了铁皮石斛 Œ×≥区的碱基序列 oŒ×≥区总长度为 yvw ¥³o其中 Œ×≥t为 uvt ¥³ox q{≥为 tyv ¥³oŒ×≥u为 uws ¥³∀
结论 }µ⁄‘„ Œ×≥区碱基序列的比较分析进一步证明铁皮石斛 ƒ型居群与 ‹ 型居群间具有显著的差异性 ∀
≈关键词  铁皮石斛 ~µ⁄‘„ Œ×≥区 ~⁄‘„序列 ~单核苷酸多态k≥‘°l ~居群差异
≈中图分类号  • u{u qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsu2ss{x2sx
铁皮石斛以其味甘 !质重 !柔韧 !具粘性等优良
品质被人们加工成铁皮枫斗 o视为药材珍品 o以每公
斤 tsss ∗ vsss美元的价格被销往国外 ∀usss年版
5中国药典6规定铁皮石斛在烘软干燥后可加工成耳
环石斛即铁皮枫斗 ∀
关于铁皮石斛具有居群差异的情况 o作者在/铁
皮石斛形态结构的居群差异0一文中已初步加以论
述k另文发表l ∀作者已根据铁皮石斛主产区各代表
性居群植株的性状及形态结构特征 o结合铁皮枫斗
加工的实际情况 o将铁皮石斛居群划分为 ƒ 型k枫
斗型l和 ‹ 型k非枫斗型l两种类型 o初步揭示了 ƒ
型和 ‹ 型铁皮石斛形态结构的居群差异 ∀
ƒ型和 ‹ 型铁皮石斛居群间是否也存在 ⁄‘„
序列上的差异 ‚近年来 oµ⁄‘„ Œ×≥ 区以进化速率
快且与植物生活型呈相关性 o不仅用于近缘属间 !属
内系统发育及亲源关系的研究≈u ∗ w oy oz otu  o还被用于
种内居群间的差异性研究≈t ox  ∀为此 o本文选择了
≈收稿日期  usst2sw2tz
≈基金项目  国家自然科学基金资助课题kvstzttwwl
≈作者通讯  电话 }ksuxlyuztyxt ∞2°¤¬¯}§¬±ª¬¼±­ƒ uyv q±¨ ·
铁皮石斛µ⁄‘„ Œ×≥区进行序列测定 o试图通过比
较不同居群植株µ⁄‘„ Œ×≥区的 ⁄‘„序列差异 o并
结合铁皮石斛形态结构居群差异的研究结果 o进一
步阐明枫斗型铁皮石斛居群 !非枫斗型铁皮石斛居
群的差异 ∀
1 材料
实验所用的铁皮石斛 ∆ενδροβιυ µ οφφιχιναλε
Ž¬°∏µ¤ ·¨¬ª²采自我国铁皮石斛主产区 }云南 !广
西 !贵州等省的原始森林 o现被整丛栽种于中国药科
大学温室及实验室以便及时取材和观察 o有关实验
材料的详细情况请参见表 t ∀
表 t 铁皮石斛居群样本采集地点及样本数
居群名称 居群类型 采集地点 个体数量 样本编号
西林居群 ƒ 广西西林 u t|||s{tx
广南居群 ƒ 云南广南 u t|||s{tt
三都居群 ƒ 贵州三都 u ussss{s{
天峨居群 ƒ 广西天峨 u ussss{sy
环江居群 ‹ 广西环江 u ussss{sw
融江居群 ‹ 广西融江 u ussss{ts
2 ⁄‘„序列测定方法
2 q1 总 ⁄‘„提取
取各居群样品新鲜的叶片或茎 s qt ªo或采用硅
#x{#
第 uz卷第 u期
ussu年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qu
ƒ ¥¨qoussu
胶干燥材料 o用无菌水冲洗干净 o在液氮中研成粉
末 ∀根据 ±Œ„Š∞‘试剂盒的使用指南进行总 ⁄‘„
提取 ∀
2 q2 °≤ • 扩增
根据 ∞°°¤±∏¨¯等≈{ 对兰科植物 Œ×≥ 区的研
究 o设计了一对石斛属 Œ×≥区的扩增引物 °t o°u o序
列如下 }
°t为 x. 2≤ Š× „„≤ „„ŠŠ× × × ≤ ≤ Š× „ŠŠ× Š„„≤2v. o位
于 t{≥上 ~
°u 为 x. 2× × „× × Š„× „× Š≤ × × „„„≤ × ≤ „Š≤ ŠŠŠ2v. o
位于 uy≥上 ∀
°≤ • 扩增反应在 vs ˏ的体系中完成 o反应液
含 ts °°²¯ #pt ×µ¬¶2‹≤¯o³‹ { qv oxs °°²¯ #pt
Ž≤¯ot qx °°²¯ #pt  ª≤ u¯ os qt h ×µ¬·²± ÷2tss o
Ταθ酶 t˜ ow种 §‘×°各 txs °°²¯#p t ou个引物
各 ts ³ o⁄‘„模板约 tss ±ª∀反应在 °× ≤ uss型
°≤ • 仪上进行 o循环参数为 |x ε 预变性 w °¬±o然
后经 |x ε 变性 t °¬±oxu ε 退火 wx ¶ozu ε 延伸 u
°¬±o共 vs 个循环后 ozu ε 延伸 z °¬± 补齐 o以
§§‹u’代替模板 ⁄‘„作空白对照 ∀
2 q3 °≤ • 产物纯化
°≤ • 产物用 • ¬½¤µ§或 • ¤·¶²±试剂盒纯化 o按
试剂盒操作指南进行 ∀
2 q4 ⁄‘„序列测定
用 …¬ª⁄¼¨ × 测序试剂盒进行测序反应 o测序反
应的参数为 }¬¬ t ˏo纯化后的 ⁄‘„片段 tx ∗ wx
±ªo°µ¬° µ¨t qy ³°²¯ o¥∏©©¨µt qu ˏo§§‹u’ 适量 ∀
测序反应条件为 }|x ε 预变性 x °¬±o|x ε vs ¶oxs
ε us ¶oys ε w °¬±o共 vx个循环 ∀扩增产物纯化
后用 ts Λ¯ ×≥• 溶解 o热循环仪上变性 u °¬±o移入
全自动测序专用管 ∀用 „…Œ vts全自动测序仪进行
序列测定 ∀
3 结果
3 q1 铁皮石斛各居群的 µ⁄‘„ Œ×≥碱基序列的大
小
铁皮石斛各居群的 Œ×≥序列起始端的决定 o均
参考了 Š ±¨¥¤±®中与石斛属相近的兰科其它属的
Œ×≥序列以及水稻的 Œ×≥序列 ∀ ƒ 型居群k包括西
林居群 !广南居群 !三都居群 !天峨居群l的 Œ×≥ 区
k包括 Œ×≥t ox q{≥ oŒ×≥ul⁄‘„ 序列已为 Š ±¨ …¤±®
收载 o序号为 „ƒvttzzy ∀ ‹ 型居群的 Œ×≥ 区正在
登陆中 ∀Œ×≥全序列如下 ot{≥片段 !uy≥片段已被
删除 }
Œ×≥t ψ
西林居群 ×≤Š„Š„≤≤Š„„≤„≤≤„„≤Š„Š≤„„× × × × Š× Š„„≤≤≤Š× × „„„„„„„Š≤ŠŠ≤ŠŠ≤×≤× × Š≤× Š≤× Š„Š„× „„„„×≤≤„≤× ŠŠ„Š×≤„×≤Š≤≤×≤„×
广南居群 ×≤Š„Š„≤≤Š„„≤„≤≤„„≤Š„Š≤„„× × × × Š× Š„„≤≤≤Š× × „„„„„„„Š≤ŠŠ≤ŠŠ≤×≤× × Š≤× Š≤× Š„Š„× „„„„×≤≤„≤× ŠŠ„Š×≤„×≤Š≤≤×≤„×
三都居群 ×≤Š„Š„≤≤Š„„≤„≤≤„„≤Š„Š≤„„× × × × Š× Š„„≤≤≤Š× × „„„„„„„Š≤ŠŠ≤ŠŠ≤×≤× × Š≤× Š≤× Š„Š„× „„„„×≤≤„≤× ŠŠ„Š×≤„×≤Š≤≤×≤„×
天峨居群 ×≤Š„Š„≤≤Š„„≤„≤≤„„≤Š„Š≤„„× × × × Š× Š„„≤≤≤Š× × „„„„„„„Š≤ŠŠ≤ŠŠ≤×≤× × Š≤× Š≤× Š„Š„× „„„„×≤≤„≤× ŠŠ„Š×≤„×≤Š≤≤×≤„×
环江居群 ×≤Š„Š„≤≤Š„„≤„≤≤„„≤Š„Š≤„„× × × × Š× Š„„≤≤≤Š× × „„„„„„„Š≤ŠŠ≤ŠŠ≤×≤× × Š≤× Š≤× Š„Š„× „„„„×≤≤„≤× ŠŠ„Š×≤„×≤Š≤≤×≤„×
融水居群 ×≤Š„Š„≤≤Š„„≤„≤≤„„≤Š„Š≤„„× × × × Š× Š„„≤≤≤Š× × „„„„„„„Š≤ŠŠ≤ŠŠ≤×≤× × Š≤× Š≤× Š„Š„× „„„„×≤≤„≤× ŠŠ„Š×≤„×≤Š≤≤×≤„×
西林居群 ≤≤≤≤× ≤× „× ŠŠŠŠ×Š×ŠŠ„≤Š×Š„× Š„„ŠŠ„× ŠŠ„׊„„≤≤≤× „„„„×≤ŠŠ≤Š≤„Š≤Š× „Š≤Š≤≤„„ŠŠŠ„„×≤× × Š„„„≤„≤„„Š≤≤≤„× „„× Š
广南居群 ≤≤≤≤× ≤× „× ŠŠŠŠ×Š×ŠŠ„≤Š×Š„× Š„„ŠŠ„× ŠŠ„׊„„≤≤≤× „„„„×≤ŠŠ≤Š≤„Š≤Š× „Š≤Š≤≤„„ŠŠŠ„„×≤× × Š„„„≤„≤„„Š≤≤≤„× „„× Š
三都居群 ≤≤≤≤× ≤× „× ŠŠŠŠ×Š×ŠŠ„≤Š×Š„× Š„„ŠŠ„× ŠŠ„׊„„≤≤≤× „„„„×≤ŠŠ≤Š≤„Š≤Š× „Š≤Š≤≤„„ŠŠŠ„„×≤× × Š„„„≤„≤„„Š≤≤≤„× „„× Š
天峨居群 ≤≤≤≤× ≤× „× ŠŠŠŠ×Š×ŠŠ„≤Š×Š„× Š„„ŠŠ„× ŠŠ„׊„„≤≤≤× „„„„×≤ŠŠ≤Š≤„Š≤Š× „Š≤Š≤≤„„ŠŠŠ„„×≤× × Š„„„≤„≤„„Š≤≤≤„× „„× Š
环江居群 ≤≤≤≤× ≤× „× ŠŠŠŠ×Š×ŠŠ„≤Š×Š„× Š„„ŠŠ„× ŠŠ„׊„„≤≤≤× „„„„×≤ŠŠ≤Š≤„Š≤Š× „Š≤Š≤≤„„ŠŠŠ„„„≤× × Š„„„≤„≤„„Š≤≤≤„× „„× Š
融水居群 ≤≤≤≤× ≤× „× ŠŠŠŠ×Š×ŠŠ„≤Š×Š„× Š„„ŠŠ„× ŠŠ„׊„„≤≤≤× „„„„×≤ŠŠ≤Š≤„Š≤Š× „Š≤Š≤≤„„ŠŠŠ„„„≤× × Š„„„≤„≤„„Š≤≤≤„× „„× Š
x q{¶ψ
西林居群 ŠŠ×× × × Š× ŠŠŠ„׊ŠŠŠ×Š×× Š×≤Š≤„≤Š≤≤„× „×≤Š„× × Š„≤„≤Š„≤×≤×≤ŠŠ≤„„× ŠŠ„× „×≤×≤ŠŠ≤×≤×≤Š≤„×≤Š„× Š„„Š„Š≤Š≤„Š≤Š
广南居群 ŠŠ×× × × Š× ŠŠŠ„׊ŠŠŠ×Š×× Š×≤Š≤„≤Š≤≤„× „×≤Š„× × Š„≤„≤Š„≤×≤×≤ŠŠ≤„„× ŠŠ„× „×≤×≤ŠŠ≤×≤×≤Š≤„×≤Š„× Š„„Š„Š≤Š≤„Š≤Š
三都居群 ŠŠ×× × × Š× ŠŠŠ„׊ŠŠŠ×Š×× Š×≤Š≤„≤Š≤≤„× „×≤Š„× × Š„≤„≤Š„≤×≤×≤ŠŠ≤„„× ŠŠ„× „×≤×≤ŠŠ≤×≤×≤Š≤„×≤Š„× Š„„Š„Š≤Š≤„Š≤Š
天峨居群 ŠŠ×× × × Š× ŠŠŠ„׊ŠŠŠ×Š×× Š×≤Š≤„≤Š≤≤„× „×≤Š„× × Š„≤„≤Š„≤×≤×≤ŠŠ≤„„× ŠŠ„× „×≤×≤ŠŠ≤×≤×≤Š≤„×≤Š„× Š„„Š„Š≤Š≤„Š≤Š
环江居群 ŠŠ×× × × Š× ŠŠŠ„׊ŠŠŠ×Š×× Š×≤Š≤„≤Š≤≤„× „×≤Š„× × Š„≤„× Š„≤×≤×≤ŠŠ≤„„× ŠŠ„× „×≤×≤ŠŠ≤×≤×≤Š≤„×≤Š„× Š„„Š„Š≤Š≤„Š≤Š
融水居群 ŠŠ×× × × Š× ŠŠŠ„׊ŠŠŠ×Š×× Š×≤Š≤„≤Š≤≤„× „×≤Š„× × Š„≤„× Š„≤×≤×≤ŠŠ≤„„× ŠŠ„× „×≤×≤ŠŠ≤×≤×≤Š≤„×≤Š„× Š„„Š„Š≤Š≤„Š≤Š
西林居群 „„„× Š≤Š„× „× Š× ŠŠ×Š≤Š„„× × Š≤„Š„„×≤≤≤Š≤Š„„≤≤„×≤Š„Š×≤× × × Š„„≤Š≤„„Š× × Š≤Š≤≤≤„„ŠŠ≤≤„„≤≤ŠŠ≤× „„ŠŠŠ≤„≤Š×≤≤Š
广南居群 „„„× Š≤Š„× „× Š× ŠŠ×Š≤Š„„× × Š≤„Š„„×≤≤≤Š≤Š„„≤≤„×≤Š„Š×≤× × × Š„„≤Š≤„„Š× × Š≤Š≤≤≤„„ŠŠ≤≤„„≤≤ŠŠ≤× „„ŠŠŠ≤„≤Š×≤≤Š
三都居群 „„„× Š≤Š„× „× Š× ŠŠ×Š≤Š„„× × Š≤„Š„„×≤≤≤Š≤Š„„≤≤„×≤Š„Š×≤× × × Š„„≤Š≤„„Š× × Š≤Š≤≤≤„„ŠŠ≤≤„„≤≤ŠŠ≤× „„ŠŠŠ≤„≤Š×≤≤Š
天峨居群 „„„× Š≤Š„× „× Š× ŠŠ×Š≤Š„„× × Š≤„Š„„×≤≤≤Š≤Š„„≤≤„×≤Š„Š×≤× × × Š„„≤Š≤„„Š× × Š≤Š≤≤≤„„ŠŠ≤≤„„≤≤ŠŠ≤× „„ŠŠŠ≤„≤Š×≤≤Š
环江居群 „„„× Š≤Š„× „× Š× ŠŠ×Š≤Š„„× × Š≤„Š„„×≤≤≤Š≤Š„„≤≤„×≤Š„Š×≤× × × Š„„≤Š≤„„Š× × Š≤Š≤≤≤„„ŠŠ≤≤„„≤≤ŠŠ≤× „„ŠŠŠ≤„≤Š×≤≤Š
融水居群 „„„× Š≤Š„× „× Š× ŠŠ×Š≤Š„„× × Š≤„Š„„×≤≤≤Š≤Š„„≤≤„×≤Š„Š×≤× × × Š„„≤Š≤„„Š× × Š≤Š≤≤≤„„ŠŠ≤≤„„≤≤ŠŠ≤× „„ŠŠŠ≤„≤Š×≤≤Š
#y{#
第 uz卷第 u期
ussu年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qu
ƒ ¥¨qoussu
Œ×≥u ψ
西林居群 ≤≤× ŠŠŠ≤Š×≤„„Š≤„× × × × „×≤×≤×≤≤Š× Š≤≤× „„×≤× ≤≤≤„×≤≤„× ŠŠ„× Š× Š× × „≤× „„ŠŠ≤×≤ŠŠ„׊׊≤„× ŠŠ× ŠŠ≤×≤≤×≤Š× Š≤≤≤≤≤
广南居群 ≤≤× ŠŠŠ≤Š×≤„„Š≤„× × × × „×≤×≤×≤≤Š× Š≤≤× „„×≤× ≤≤≤„×≤≤„× ŠŠ„× Š× Š× × „≤× „„ŠŠ≤×≤ŠŠ„׊׊≤„× ŠŠ× ŠŠ≤×≤≤×≤Š× Š≤≤≤≤≤
三都居群 ≤≤× ŠŠŠ≤Š×≤„„Š≤„× × × × „×≤×≤×≤≤Š× Š≤≤× „„×≤× ≤≤≤„×≤≤„× ŠŠ„× Š× Š× × „≤× „„ŠŠ≤×≤ŠŠ„׊׊≤„× ŠŠ× ŠŠ≤×≤≤×≤Š× Š≤≤≤≤≤
天峨居群 ≤≤× ŠŠŠ≤Š×≤„„Š≤„× × × × „×≤×≤×≤≤Š× Š≤≤× „„×≤× ≤≤≤„×≤≤„× ŠŠ„× Š× Š× × „≤× „„ŠŠ≤×≤ŠŠ„׊׊≤„× ŠŠ× ŠŠ≤×≤≤×≤Š× Š≤≤≤≤≤
环江居群 ≤≤× ŠŠŠ≤Š×≤„„Š≤„× × × × „×≤×≤×≤≤Š× Š≤≤× „„×≤× ≤≤≤„×≤≤„× ŠŠ„× Š× Š× × „≤× „„ŠŠ≤×≤ŠŠ„׊׊≤„× ŠŠ× ŠŠ≤×≤≤×≤Š× Š≤≤≤≤≤
融水居群 ≤≤× ŠŠŠ≤Š×≤„„Š≤„× × × × „×≤×≤×≤≤Š× Š≤≤× „„×≤× ≤≤≤„×≤≤„× ŠŠ„× Š× Š× × „≤× „„ŠŠ≤×≤ŠŠ„׊׊≤„× ŠŠ× ŠŠ≤×≤≤×≤Š× Š≤≤≤≤≤
西林居群 × × ŠŠ×Š≤ŠŠ≤ŠŠŠ≤× Š„„ŠŠŠ≤ŠŠŠ×≤„×≤× × ≤×≤Š× × ŠŠ× × Š≤≤„„≤„„× „„ŠŠŠŠ×ŠŠ„× × „„„„„„ŠŠ≤≤× „× Š≤× „× × Š× Š„× „„Š≤Š≤Š≤
广南居群 × × ŠŠ×Š≤ŠŠ≤ŠŠŠ≤× Š„„ŠŠŠ≤ŠŠŠ×≤„×≤× × ≤×≤Š× × ŠŠ× × Š≤≤„„≤„„× „„ŠŠŠŠ×ŠŠ„× × „„„„„„ŠŠ≤≤× „× Š≤× „× × Š× Š„× „„Š≤Š≤Š≤
三都居群 × × ŠŠ×Š≤ŠŠ≤ŠŠŠ≤× Š„„ŠŠŠ≤ŠŠŠ×≤„×≤× × ≤×≤Š× × ŠŠ× × Š≤≤„„≤„„× „„ŠŠŠŠ×ŠŠ„× × „„„„„„ŠŠ≤≤× „× Š≤× „× × Š× Š„× „„Š≤Š≤Š≤
天峨居群 × × ŠŠ×Š≤ŠŠ≤ŠŠŠ≤× Š„„ŠŠŠ≤ŠŠŠ×≤„×≤× × ≤×≤Š× × ŠŠ× × Š≤≤„„≤„„× „„ŠŠŠŠ×ŠŠ„× × „„„„„„ŠŠ≤≤× „× Š≤× „× × Š× Š„× „„Š≤Š≤Š≤
环江居群 × × ŠŠ×Š≤ŠŠ≤ŠŠŠ≤× Š„„ŠŠŠ≤ŠŠŠ×≤„×≤× × ≤×≤Š× × ŠŠ× × Š≤≤„„≤„„× „„ŠŠŠŠ×ŠŠ„× × „„„„„„ŠŠ≤≤× „× Š≤× „× × Š× Š„× „„Š≤Š≤Š≤
融水居群 × × ŠŠ×Š≤ŠŠ≤ŠŠŠ≤× Š„„ŠŠŠ≤ŠŠŠ×≤„×≤× × ≤×≤Š× × ŠŠ× × Š≤≤„„≤„„× „„ŠŠŠŠ×ŠŠ„× × „„„„„„ŠŠ≤≤× „× Š≤× „× × Š× Š„× „„Š≤Š≤Š≤
西林居群 ≤≤Š„Š„Š„׊„„×≤„× „≤× × × × × „ŠŠ× Š„×≤≤≤„„×≤„× Š≤Š≤× „„×≤≤„× ŠŠ„׊Š≤Š× „×≤ Š
广南居群 ≤≤Š„Š„Š„׊„„×≤„× „≤× × × × × „ŠŠ× Š„×≤≤≤„„×≤„× Š≤Š≤× „„×≤≤„× ŠŠ„׊Š≤Š× „×≤ Š
三都居群 ≤≤Š„Š„Š„׊„„×≤„× „≤× × × × × „ŠŠ× Š„×≤≤≤„„×≤„× Š≤Š≤× „„×≤≤„× ŠŠ„׊Š≤Š× „×≤ Š
天峨居群 ≤≤Š„Š„Š„׊„„×≤„× „≤× × × × × „ŠŠ× Š„×≤≤≤„„×≤„× Š≤Š≤× „„×≤≤„× ŠŠ„׊Š≤Š× „×≤ Š
环江居群 ≤≤Š„Š„Š„׊„„×≤„× „≤× × × × × „ŠŠ× Š„×≤≤≤„„×≤„× Š≤Š≤× „„×≤≤„× ŠŠ„׊Š≤Š× „×≤ Š
融水居群 ≤≤Š„Š„Š„׊„„×≤„× „≤× × × × × „ŠŠ× Š„×≤≤≤„„×≤„× Š≤Š≤× „„×≤≤„× ŠŠ„׊Š≤Š× „×≤ Š
3 q2 铁皮石斛各居群 Œ×≥t oŒ×≥u的 Š≤ 百分比及
Œ×≥区的总长度
铁皮石斛各居群 Œ×≥t区的大小均为 uvt ¥³o
Š≤ 百分比为 xt qs{ h ~Œ×≥u区的大小均为 uws ¥³o
Š≤ 百分比为 xs qut h ~x q{≥区长度 tyv ¥³oŒ×≥区
全序列总长度kŒ×≥t oŒ×≥u ox q{≥l为 yvw ¥³∀
3 q3 ƒ型与 ‹ 型铁皮石斛居群间µ⁄‘„ Œ×≥碱基
序列的差异
从以上铁皮石斛 y个居群类型的µ⁄‘„ Œ×≥序
列中 o我们发现属于 ƒ 型居群的西林居群 !广南居
群 !三都居群 !天峨居群均具有相同的碱基序列 o属
于 ‹ 型居群的环江居群 !融江居群也具有相同的碱
基序列 ∀但是 oƒ 型与 ‹ 型居群植株的 Œ×≥ 区域
k含 x q{≥l内有两个碱基位点的差异k黑框部位l ∀
第一个碱基变异位点发生在 Œ×≥t区的第 ty{个碱
基位点k自 x.端起l oƒ型居群该位点的碱基为 × o而
‹型居群的为 „ ∀第二个碱基变异位点发生在
x q{≥区的第 w个碱基位点 oƒ型居群的碱基为 ≤ o而
‹ 型居群的为 × ∀
4 讨论
近年来 o由于µ• ‘„的结构与功能十分保守 o被
称为生物体内的/活化石0≈z  o因此 µ• ‘„ 的基因 )
µ⁄‘„的结构已被广泛研究 ∀在µ⁄‘„中 oŒ×≥区的
进化速率较快 o被广泛用于研究科内 !属内种间及
居群间的分子系统演化关系及物种鉴别 ≈u ∗ w oy ∗ { ott  o
但没有关于石斛属µ⁄‘„ Œ×≥序列及居群差异的报
道 ∀本文共测定了我国云南 !广西 !贵州铁皮石斛 y
个居群 tu个样品的 Œ×≥及 x q{≥ µ⁄‘„ 序列 o所测
定的碱基序列在 ƒ型或 ‹ 型居群内部没有差异 o但
在 ƒ型和 ‹ 型居群间却有着显著而又稳定的差别 ∀
在 ƒ型与 ‹ 型居群之间 oŒ×≥区域有两个碱基位点
的差异 ∀第一个碱基变异位点发生在 Œ×≥t区的第
ty{个碱基位点k自 x. 端起l oƒ 型居群该位点的碱
基为 × o而 ‹ 型居群的为 „ ∀第二个碱基变异位点
发生在相对保守的 x q{≥区第 w个碱基位点k自 x.
端起l oƒ型居群该位点的碱基为 ≤ o而 ‹ 型居群的
为 × ∀前人曾报道过关于同种植物居群间的 µ⁄‘„
Œ×≥序列具有 u个或 u个以上碱基位点差异的多态
性情况≈x oy  o只是前人报道的变异位点均在 Œ×≥t或
Œ×≥u范围内 o不在 x q{≥区域内 ∀鉴于铁皮石斛µ⁄2
‘„ 碱基序列居群差异的变异一个发生在 Œ×≥t内 o
另一个发生在 x q{≥内 o说明铁皮石斛 ƒ 型和 ‹ 型
居群间µ⁄‘„ Œ×≥t所受环境选择的压力较大 o且因
x q{≥区内尚存有一个变异位点 o与前人所研究的其
他植物有所不同≈x oy  ∀由于本文运用 µ⁄‘„ Œ×≥区
的碱基序列并不在于揭示各铁皮石斛各居群间的差
异 o而是为了寻找 ƒ型和 ‹ 型居群间差异的分子标
记 o因此 ƒ型和 ‹ 型居群间存在的 µ⁄‘„ Œ×≥区碱
基序列差别为鉴别枫斗型铁皮石斛居群和非枫斗型
铁皮石斛居群提供了可靠的分子标记 ∀
在/铁皮石斛形态结构的居群差异0一文中 o作
者已根据自然居群的形态结构差异 !生活表现型差
#z{#
第 uz卷第 u期
ussu年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qu
ƒ ¥¨qoussu
异以及枫斗加工的具体情况 o将云南 !广西 !贵州的
铁皮石斛划分为 ƒ型居群和 ‹ 型居群 o得出 ƒ型居
群的植株容易被烘软加工成铁皮枫斗 o而 ‹ 型居群
的植株不能被烘软加工成枫斗的结论 ∀从本文的研
究中我们可以看出 o隶属于 ƒ 型居群的自然居群
k包括西林居群 !广南居群 !三都居群 !天峨居群l均
具有相同的 µ⁄‘„ Œ×≥序列 o而隶属于 ‹ 型居群的
自然居群k环江居群 !融水居群l也具有相同的
µ⁄‘„ Œ×≥序列 o但 ƒ 型居群和 ‹ 型居群间的 Œ×≥
区却存在着一定的差异 o说明铁皮石斛的 µ⁄‘„
Œ×≥序列 ) 生活型性状特征 ) 居群类型三者之间存
在着一定的相关性 ∀
关于同种植物不同居群的µ⁄‘„ Œ×≥区的变异
发生在保守区较强的 x q{≥区域的情况 o还未见前人
报道 ∀然而 o前人在研究动物及人类的个体差异时 o
却发现极少数个体在保守区域存在着单个核苷酸位
点的变异 o称为单核苷酸多态k≥‘°l o出现 ≥‘°现
象的同种生物的个体间往往存在着显著的遗传变
异 o并且这种变异常伴随着某些特征或疾病症状的
出现≈tv otw  ∀作者认为保守区域 x q{≥区的单个碱基
变异 o极可能由于 ‹ 型居群的铁皮石斛曾经与其它
近缘种间有过基因交流 o于是造成 x q{≥区域产生了
个别位点的变异 ∀这种变异在 ‹ 型与 ƒ 型植株的
高度 !茎的硬度 !茎的下皮层 !维管束的密度等形态
学性状方面均有所表现 o特别是花的颜色有较大的
变化k已另文发表l o证明在植物中产生 ≥‘°现象同
样也伴随着性状的显著变化 ∀根据形态学特征 o作
者已能推断 ‹ 型居群的铁皮石斛已达到了变种水
平 o以上的 ⁄‘„分子证据则再次验证了这种推断 ∀
≈参考文献 
≈t  顾 京 o惠东威 q野生大豆与栽培大豆 µ⁄‘„ Œ×≥ 区的研究 q
植物学报 ot||w ovy }zx| q
≈u  惠东威 o陈受宜 q利用 µ• ‘„ 基因构建的大豆属 tu个种的种
系关系 q中国科学k…辑l ot||z ouz }vuz q
≈v  汪小全 o李振宇 qµ⁄‘„片段的序列分析在苦苣苔亚科系统学
研究中的应用 q植物分类学报 qt||{ ovy }|z q
≈w  王建波 o张文驹 o陈家宽 q核 µ⁄‘„ 的 Œ×≥序列在被子植物系
统与进化研究中的应用 q植物分类学报 ot||| ovzkwl }wsz q
≈x  蔡金娜 o周开亚 o徐珞珊 o等 q不同居群蛇床的 µ⁄‘„ Œ×≥序列
分析 q药学学报 ousss ovxktl q
≈y  宋葆华 o陈之端 o汪小全 q中国苋属 ±µ⁄‘„ 的 Œ×≥序列分析及
其系统学意义 q植物学报 ousss owukttl }tt{w q
≈z  万海清 o梁明山 o许介眉 q分子生物学手段在植物系统与进化研
究中的应用 q植物学通报 ot||{ otxkwl }{ q
≈{  ∞°°¤±∏¨¯° ⁄²∏½¨ µ¼ o„¯¨ ¦  °µ¬§ª¨ ²± o ·¨¤¯ q  ²¯ ¦¨∏¯¤µ°¼¯ ²2
ª¨ ±¨ ·¬¦¶²© ⁄¬¶¨¤¨ k ’µ¦«¬§¤¦¨¤¨ l } „ ≤²±·µ¬¥∏·¬²± ©µ²° ‘∏¦¯ ¤¨µ
•¬¥²¶²°¤¯ Œ×≥ ≥¨´ ∏¨ ±¦¨ q „ ° µ¨¬¦¤± ²∏µ±¤¯ ²© …²·¤±¼ ot||| o{y
kyl }{{z q
≈|  ‘¨ ¼¯ ¤±§ • o  ∞ ˜µ¥¤·¶¦«q °«¼¯ ²ª¨ ±¼ ²© ≥∏¥©¤°¬¯¼ ∞³¬§¨ ±2
§µ²¬§¨ ¤¨ k’µ¦«¬§¤¦¨¤¨ l Œ±©¨ µµ¨§©µ²° ±§«ƒ ≤«¯²µ²³¯¤¶·Š ±¨¨ ≥ 2¨
∏´¨ ±¦¨¶q „ ° µ¨¬¦¤± ²∏µ±¤¯ ²© …²·¤±¼ ot||y o{v }tt|x q
≈ts  ≠∏®¤º¤ × oŽ  ≤¤° µ¨²± o  • ≤«¤¶¨ q ≤«¯²µ²³¯¤¶·⁄‘„ °«¼2
²¯ª¨ ±¼ ²© ≥∏¥·µ¬¥¨ ⁄¨ ±§µ²¥¬±¤¨ k ’µ¦«¬§¤¦¨¤¨ l }Œ±¶¬ª«·¶©µ²° ¤
≤²°¥¬±¨ § „±¤¯¼¶¬¶…¤¶¨§²±µ¥¦⁄‘„ ≥¨´ ∏¨ ±¦¨¶¤±§ • ¶¨·µ¬¦·¬²±
≥¬·¨ ∂¤µ¬¤·¬²±q²∏µ±¤¯ ²© °¯ ¤±·• ¶¨¨¤µ¦«ot||y ots| }ty| q
≈tt  ≤¤° µ¨²± Ž o  • ≤«¤¶¨ o •  • «¬··¨± o ·¨¤¯ q„ °«¼¯ ²ª¨ ±¨ ·¬¦
„±¤¯¼¶¬¶²©·«¨ ’¦«¬§¤¦¨¤¨ } ∞√¬§¨ ±¦¨ ©µ²° µ¥¦ ‘∏¦¯ ²¨·¬§¨ ≥ 2¨
∏´¨ ±¦¨¶q „ ° µ¨¬¦¤± ²∏µ±¤¯ ²© …²·¤±¼ ot||| o{y }us{ q
≈tu  „¬±²∏¦«¨  o…¤¼ µ¨• q ’±·«¨ ’µ¬ª¬±¶²©·«¨ × ·¨µ¤³¯²¬§…µ²°∏¶
≥³¨ ¦¬¨¶k≥ ¦¨·¬²± …µ²°∏¶o°²¤¦¨¤¨ l }Œ±¶¬ª«·¶©µ²° Œ±·¨µ±¤¯ ×µ¤±2
¶¦µ¬¥¨ §≥³¤¦¨µ≥¨´ ∏¨ ±¦¨¶²© ‘∏¦¯ ¤¨µ •¬¥²¶²°¤¯ ⁄‘„ q Š ±¨²°¨o
t||z ozvs q
≈tv  ≥ ¶¨·¬ƒ o„¥¥²··Š • o • ¬¨o¨·¤¯ q „ ≤²°°²± °²¯¼°²µ³«¬¶° „¶2
¶²¦¬¤·¨§ º¬·« „±·¬¥¬²·¬¦2Œ±§∏¦¨§ ≤¤µ§¬¤¦ „µµ«¼·«°¬¤q °µ²¦ ‘¤·¯
„¦¤§≥¦¬˜≥„ ousss o|zkt|l }tsytv q
≈tw  Ž∏«±¨ µ  Žo…¨ µ¨¯¬° o ≠¤°¤·²o¨·¤¯ q ˜¶¨©∏¯±¨ ¶¶²©≥¬±ª¯¨‘∏2
¦¯ ²¨·¬§¨ °²¯¼°²µ³«¬¶° ⁄¤·¤ ©²µ ∞¶·¬°¤·¬±ª °²³∏¯¤·¬²± °¤µ¤° 2¨
·¨µ¶q Š ±¨¨ ·¬¦¶ousss otxyktl }wv| q
Στυδψ ον Σεθυενχε ∆ιφφερενχε ανδ ΣΝΠ Πηεοµενον οφ ρ∆ΝΑ ΙΤΣ Ρεγιον
ιν Φ Τψπε ανδ Η Τψπε Ποπυλατιον οφ ∆ενδροβιυµ οφφιχιναλε
⁄Œ‘Š ÷¬¤²2¼∏t ou o • „‘Š «¨ ±ª2·¤²t o ÷ ˜ ∏²2¶«¤±t o
÷ ˜ ‹²±ªt o ‹ ’ ˜ Ž¤¬2¼¤u o≥‹Œ Š∏²2¬¬±u
kt q⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© °«¤µ°¤¦²ª±²¶¼ o≥¦«²²¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ °«¤µ°¤¦¼ o
≤«¬±¤ °«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o ‘¤±­¬±ª utssv{ o¬¤±¶∏o≤«¬±¤~
u q≤²¯¯¨ ª¨ ²© ¬©¨ ≥¦¬¨±¦¨ o ‘¤±­¬±ª ‘²µ°¤¯ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o ‘¤±­¬±ª utss|z o¬¤±¶∏o≤«¬±¤l
#{{#
第 uz卷第 u期
ussu年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qu
ƒ ¥¨qoussu
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ µ⁄‘„ Œ×≥ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ §¬©©¨ µ¨±¦¨¶¥¨·º¨¨ ± ƒ ·¼³¨ ¤±§·«¤·²© ‹ ·¼³¨ ²© ∆ενδροβιυ µ οφφιχιναλε
¬± °¤¬± «¤¥¬·¤·²© ≤«¬±¤q Μετηοδ : × «¨ ³²³∏¯¤·¬²± §¬©©¨ µ¨±¦¨¶²©·«¨ µ⁄‘„ Œ×≥ µ¨ª¬²± k¬±¦¯∏§¬±ªŒ×≥t oŒ×≥u ox q{≥l ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶²©
∆ . οφφιχιναλε º µ¨¨ ¶·∏§¬¨§¥¼·«¨ ° ·¨«²§²© ⁄‘„ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶¤±¤¯¼¶¬¶qΡεσυλτ : × «¨ µ¨ º µ¨¨ ·º²§¬©©¨ µ¨±·¶¬·¨¶¥¨·º¨¨ ±·«¨ µ⁄‘„ Œ×≥
¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ²©ƒ ·¼³¨ ¤±§·«¤·²© ‹ ·¼³¨ q’±¨ º¤¶¬±Œ×≥t µ¨ª¬²± o¤±§·«¨ ²·«¨µº¤¶¬± x q{≥ µ¨ª¬²± qŒ·º¤¶³µ²√ §¨·«¤··«¨ µ¨ º¤¶¶²°¨
µ¨ ¤¯·¬√¬·¼ ¥¨·º¨¨ ±·«¨ ¦«¤µ¤¦·¨µ²©µ⁄‘„ Œ×≥ µ¨ª¬²± ¤±§·«¨ ¬¯©¨ ·¼³¨ ²©·«¨ ³²³∏¯¤·¬²±¶q × «¨ ³«¨ ±²° ±¨²± ²©¶¬±ª¯¨±∏¦¯ ²¨·¬§¨ ³²¯¼2
°²µ³«¬¶° k≥‘°l ¬¨¬¶·¨§¬± x q{≥ µ¨ª¬²± ²©µ⁄‘„ Œ×≥ µ¨ª¬²± ¥¨·º¨¨ ± ƒ ·¼³¨ ¤±§ ‹ ·¼³¨ q × «¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶²©µ⁄‘„ Œ×≥ µ¨ª¬²± ²© ∆ .
οφφιχιναλε º µ¨¨ µ¨³²µ·¨§©²µ·«¨ ©¬µ¶··¬°¨o¤±§·«¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶²©Œ×≥ µ¨ª¬²± µ¤±ª¨ §yvw ¥³kŒ×≥t uvt ¥³oŒ×≥u uws ¥³ox q{≥ tyv
¥³l qΧονχλυσιον : × «¨ ¤±¤¯¼¶¬¶²©µ⁄‘„ Œ×≥ ²© ∆ . οφφιχιναλε §¨ ³¨¯¼ µ¨√ ¤¨¯ ·«¨ ³²³∏¯¤·¬²± §¬©©¨ µ¨±¦¨¶²© ∆ . οφφιχιναλε ²© ƒ ·¼³¨ ¤±§
‹ ·¼³¨ q
[ Κεψ ωορδσ] ∆ενδροβιυ µ οφφιχιναλε ~µ⁄‘„ Œ×≥ ~¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶²© ⁄‘„ ~¶¬±ª¯¨ ±∏¦¯ ²¨·¬§¨ ³²¯¼°²µ³«¬¶°k≥‘°l ~³²³∏¯¤·¬²±
§¬©©¨ µ¨±¦¨¶
≈责任编辑 袁桂京 
日本正仓院药物/鬼臼0的生药学鉴定
钟国跃t o徐珞珊u o徐国钧u o难波恒雄v
kt q重庆市中药研究院 o重庆 wsssyx ~
u q中国药科大学 o江苏 南京 utssv{ ~
v q民族医药食科学研究所 o日本 大阪l
≈摘要  目的 }鉴定日本正仓院中保存的我国唐代药物鬼臼的基原 o考察鬼臼药用历史 ∀方法 }对正仓院鬼臼
和国产玉簪属植物玉簪及紫萼进行比较组织学研究以鉴定其原植物 o结合基原鉴定结果与本草记载考察鬼臼药用
历史 ∀结果与结论 }正仓院鬼臼来源于玉簪的地下部分 o系我国唐代及其之前的鬼臼正品之一 ∀
≈关键词  正仓院/鬼臼0 ~玉簪 ~紫萼 ~生药学鉴定 ~药用历史
≈中图分类号  • u{u qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsu2ss{|2sy
/鬼臼0始载于5神农本草经6 o为/辛 o温 o主杀蛊
毒鬼 精物 o避恶气不祥 o逐邪 o解百毒0之药物 ∀据
5本草经集注6 !5新修本草6 !5本草纲目6等诸本草的
记载 o鬼臼古来即系基源混乱的药物之一 o早期国内
外学者在考证其原植物时曾涉及到双子叶植物类的
小檗科 !虎耳草科 !蓼科 !秋海棠科及单子叶植物类
的鸢尾科 !百合科 !天南星科等多种植物 o现一般认
为来源于小檗科的八角莲属 ∆ψσοσµ α植物的地下
部分 o主要系八角莲 ∆ . ϖερσιπελλισ k‹¤±¦¨l ≤«¨ ±ª
和六角莲 ∆ . πλειαντηα k‹¤±¦¨l • ²²§¶²±≈t  ∀据市
≈收稿日期  usst2sz2tu
≈作者通讯  电话 }ksuvlyuwyutux ∞2°¤¬¯}¤yuwyz|xw ƒ ¦·¤q
¦´ q¦±
场调查 o现我国鬼臼几乎仅作民间药用 o市场品约
x| h来源于 ∆ψσοσµ α属植物 ou| h为同科植物桃儿
七 Σινοποδοπηψλλυ µ ε µ οδι k • ¤¯¯q¨ ¬ • ²¼¯ l¨ ≠¬±ªo
z h为南方山荷叶 ∆ιπηψλλεια σινενσισ ¬o其余为西
南鬼灯檠 Ροδγερσια σαµ βυχιφολια ‹¨°¶¯ !槭叶秋海
棠 Βεγονια διγψνα Œµ°¶¦«q和蕺叶秋海棠 Β .
λι µ πριχητιι Œµ°¶¦«qo均为地下部分≈u ov  ∀在植物分
类学上 o∆ψσοσµ α曾归属于鬼臼属 Ποδοπηψλλυ µ €
Σινοποδοπηψλλυ µkt|u{ 年以前l o由于后者的桃儿
七 Σ . ε µ οδι( € Π. ε µ οδι[ w] )的中文名为/鬼臼0 ,所
以现在来源于 Σ . ε µ οδι的生药常称为/鬼臼0 o而
来源于 ∆ψσοσµ α者通称为/八角莲0k/八角莲0之名
始见于清5植物名实图考6中 o记载为鬼臼之俗名l ∀
中尾氏根据现日本奈良东大寺正仓院中保存的中国
#|{#
第 uz卷第 u期
ussu年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qu
ƒ ¥¨qoussu