全 文 ：救脑益智胶囊水提物
对人神经母细胞瘤株 ≥≠x≠ 信号转导的影响
孟 艳 o张景艳 o王 蓉 o姬志娟 o盛树力
k首都医科大学 宣武医院 老年病研究所 o北京 tsssxvl
≈摘要 目的 }通过观察救脑益智胶囊对人神经母细胞瘤株 ≥≠x≠ 信号转导的影响 o探讨此药促进神经细胞
生长的可能机理 ∀方法 }以人神经母细胞瘤株 ≥≠x≠ 为细胞模型 o分为正常对照组和加药组 ∀收集对照组及加药
组细胞裂解物 o取上清用 ²ºµ¼法进行蛋白定量 o将总蛋白量相等的样品进行免疫沉淀 • ¶¨·¨µ± ¥¯²·分析 ∀结果 }
与正常对照组比较 o加药组 ≥≠x≠ 细胞蛋白激酶
k³µ²·¨¬± ®¬±¤¶¨
o ®·r°
l o¦ °反应元件结合蛋白k¦ °
µ¨¶³²±¶¨ ¨¯¨° ±¨·¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬± o≤ ∞
l !磷酸化的 ≤ ∞
k³«²¶³«²µ¼¯¤·¨§ ≤ ∞
o °2≤ ∞
l表达增加 o细胞色素 ≤
k¦¼·²¦«µ²°¨ ≤ o¦¼·≤tl表达减少 ∀结论 }救脑益智胶囊的生药水提取液能促进 ≥≠x≠ 神经母细胞存活信号通路中
®·r°
o°2≤ ∞
的表达 o推测其促进体外培养的 ≥≠x≠ 神经母细胞生长的机理与其促进神经元信号通路中有关
蛋白质的表达有关 ∀
≈关键词 救脑益智胶囊 ~人神经母细胞瘤株 ~信号转导
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussvltt2tszy2sv
救脑益智胶囊在临床上治疗一些脑萎缩等患
者 o有一定效果≈t o已有实验证实该药水提取液在体
外具有神经营养作用 o促进神经细胞生长≈u o但其作
用机理尚未明了 ∀本实验旨在通过研究救脑益智胶
囊对 ≥≠x≠ 细胞信号转导通路有关蛋白质表达的影
响 o探讨此药促进神经细胞生长的可能机理 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
1 q1 q1 细胞模型 人类野生型神经母细胞瘤细胞
株k ≠2≥≠x≠l ∀
1 q1 q2 药物 救脑益智胶囊由山西省曲沃县神经
医学研究所 !北京东城区朝阳门医院脑萎缩科曹子
青大夫提供 o主要包括黄芪 !党参 !白术 !肉苁蓉 !龟
甲 !当归 !白芍 !鹿角 !苏合香 !川芎 !川山甲等 us余
味中药 o其粉剂用蒸馏水煮沸 vs °¬±ou次 o将上清
液合并调整至 t ≅ tsvª#pt生药 ∀
1 q1 q3 主要试剂 °µ²·¨¬± 2≥ ³¨«²µ²¶¨ o
²¨ «µ¬±ª¨µ
¤±±«¨¬°公司产品 ∀高分子量标准蛋白 o¬¥¦²¯ 公
司产品 ∀碱性磷酸酶显色试剂盒 o≥¤±·¤ ≤µ∏½生物
技术公司产品 ∀
≈收稿日期 ussu2s{2uz
≈基金项目 国家科技部 |zv课题资助项目kussssxzssxl
≈通讯作者 盛树力 ר¯ }kstslyvstvvxx2u{xw
1 q1 q4 抗体 ¦ °应答元件结合蛋白k¦ ° µ¨2
¶³²±¶¨ ¨¯¨° ±¨·¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬± o≤ ∞
l !蛋白质激酶
k³µ²·¨¬± ®¬±¤¶¨
o ®·r°
l !细胞色素 ≤ k¦¼2
·²¦«µ²° ≤¨ o¦¼·≤l抗体为本室自行制备 o采用固相合
成法合成相关蛋白片段 k≤ ∞
o °≥≠ ⁄~
®·r°
} °ƒ°± ƒ≥≠≥≥× l o然后分别与血
蓝蛋白交联后免疫小鼠 o∞≥ 检测抗体效价最高
在 tΒts sss ∗ tΒtss sss之间 ∀做抗体吸附实验 o结
果阴性 ∀
°2≤ ∞
k磷酸化的 ≤ ∞
l抗体为 ≥¤±·¤≤µ∏½生
物技术公司产品 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 ≥≠x≠ 细胞培养 细胞培养条件为 ∞
k¬¥¦²
owtxss2syzl o培养基中加入体积分数为
ts h的灭活胎牛血清k ¼¦¯²±¨ o≥vsszt qsvl otx
°°²¯#p t ∞°∞≥k⁄¦²°³¤±¼l o青霉素 t ≅ tsx
#pt o链霉素 t ≅ tsx #pt ox h ≤ u ovz ε o每周
换液 u次 o传代 t次 ∀
1 q2 q2 免疫沉淀 • ¶¨·¨µ±
¯ ²·分析法 将 ≥≠x≠
细胞以密度为每毫升 t ≅ tsw 个接种于 zx ¦°培养
瓶k∏±¦产品l o每瓶加培养液 us °ozu «后分为
对照组 !加药组 ∀加药组加救脑益智胶囊的生药水
提取液 o终浓度为 t qux ≅ tsp uª#p t o对照组用 °
≥
#yzst#
第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o¶¶∏¨ tt
²√¨°¥¨µoussv
代替 ∀vz ε ox h ≤ u 培养 { ∗ ts «o收集对照组及
加药组细胞裂解物k冰浴中操作l o离心 o取上清 o将
总蛋白量相同的对照组和加药组上清分别加入
≥ ³¨«¤µ²¶¨2³µ²·¨¬± ux Λ及抗体 ≤ ∞
x Λo³2
≤ ∞
x Λo®·x Λo¦¼·≤x Λ室温混合 w «∀反复
洗涤上述沉淀物 o吸净上清 o煮沸变性 x °¬±o取上清
进行 • ¶¨·¨µ±
¯ ²·分析≈v ∀第 t抗体 ≤ ∞
k t Β
t sssl o³2≤ ∞
ktΒt sssl o¦¼·≤ktΒv sssl ®·r°
ktΒt sssl稀释于 °
≥中室温放置 t «o碱性磷酸酶
偶联抗鼠或抗羊 ª中放置 t «o漂洗后用碱性磷酸
酶显色试剂盒显色 ∀
2 结果
2 q1 救脑益智胶囊的生药水提取液能促进野生型
≥≠x≠ 细胞内 ≤ ∞
的表达
从 • ¶¨·¨µ±
¯ ²·结果可以看出 o≤ ∞
在 wv
§¤处有一清晰的条带 o加入救脑益智胶囊的生药
水提取液后 o其量明显较 °
≥ 对照组增加 o重复 v
次 o结果相同 o如图 t所示 ∀
图 t 加药组 ≥≠x≠ 细胞 ≤ ∞
的表达增加
t q对照组 u q加药组
2 q2 救脑益智胶囊的生药水提取液能促进野生型
≥≠x≠ 细胞内 °2≤ ∞
的表达
从 • ¶¨·¨µ±
¯ ²·结果可以看出 o°2≤ ∞
在 wv
§¤处有一清晰的条带 o加入救脑益智胶囊的生药
水提取液后 o其量明显较 °
≥ 对照组增加 o重复 v
次 o结果相同 o如图 u所示 ∀
图 u 加药组 ≥≠x≠ 细胞 °2≤ ∞
的表达增加
t q对照组 u q加药组
2 q3 救脑益智胶囊的生药水提取液能促进野生型
≥≠x≠ 细胞内 ®·r°
的表达
从 • ¶¨·¨µ±
¯ ²·结果可以看出 o®·r°
在
yy§¤处有一清晰的条带 o加入救脑益智胶囊的生
药水提取液后 o其量明显较 °
≥对照组增加 o重复 v
次 o结果相同 o如图 v所示 ∀
2 q4 救脑益智胶囊的生药水提取液能抑制野生型
≥≠x≠ 细胞内 ¦¼·≤ 的表达
从 • ¶¨·¨µ±
¯ ²·结 果 可 以 看 出 o¦¼·≤ 在
tu q{§¤处有一清晰的条带 o加入救脑益智胶囊的
生药水提取液后 o其量明显较 °
≥ 对照组减少 o重
复 v次 o结果相同 o如图 w所示 ∀
图 v 加药组 ≥≠x≠ 细胞 ·的表达增加
t q对照组 u q加药组
图 w 加药组 ≥≠x≠ 细胞 ¦¼·≤ 的表达减少
t q对照组 u q加药组
3 讨论
°v®2®·r°
2
⁄2≤ ∞
2°≤ ∞
途径是神
经元存活的主要途径之一 o在中枢神经系统中 oƒ
等神经营养因子与受体结合后 o启动 °v信号转
导通路 o从而使神经元存活≈w ∀本研究结果表明救
脑益智胶囊的生药水提取液能促进 ≥≠x≠ 神经母细
胞存活信号通路中 ®·r°
o°2≤ ∞
的表达 o®·r
°
o≤ ∞
是 °v通路中的重要成分 o®·r°
表达的增加一方面促进
⁄磷酸化 o另一方面也使
≤ ∞
磷酸化增加 o这与我们的实验结果 °2≤ ∞
表达增加是相吻合的 ∀ °2≤ ∞
表达增加将促进细
胞的存活 ∀另外本药还能促进细胞色素 ≤ 表达减
少 ∀细胞色素 ≤ 是存在于线粒膜间的凋亡因子 o细
胞色素 ≤ 的释放增加将促进细胞凋亡的发生 ∀本室
以往的实验证明本药水提取液能促进神经母细胞胞
体体积的增加和突起的延长 o并能促进 × × 代
谢≈u o因此 o推测提取液促进体外培养的 ≥≠x≠ 神经
母细胞生长的机理可能与其促进神经元信号通路中
有关蛋白质的表达有关 ∀
≈参考文献
≈t 曹子清 o侯景伦 o张北北 q救脑益智胶囊的药理研究 q中成药 o
t||x otzkwl }vv q
≈u 张景艳 o孟 艳 o赵志炜 o等 q救脑益智胶囊对人神经母细胞瘤
株 ≥≠x≠ 生长的影响 q中国中西医结合杂志 oussu oykuul }{w q
≈v 张 岱 oײ¥¬¤¶ ¤µ·°¤±± o ²±µ¤§
¨ ¼µ¨∏·«¨µq神经节苷脂
t促进 ½¯«¨¬° µ¨病长 Β2淀粉样蛋白kΒwul分泌以及干扰
Β2淀粉样蛋白前体k °°l代谢 q中国心理卫生杂志 o t||{ o
ktul }|z q
≈w ²¯ª¤§²2 o ²¶¦¤·¨¯ ²¯ ⁄ o∞°¯ ·¨⁄ o ·¨¤¯ qµ¥u2¤¶¶²¦¬¤·2
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第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Τηε Εφφεχτ οφ ϑιυναοψιζηι Χαπσυλ ον
Σιγναλ Τρανσδυχτιον Πατηωαψ οφ ΣΨxΨ Χελλ Λινεσ
∞ ≠¤± o ¬±ª2¼¤± o • ²±ªo «¬2∏¤± o≥∞ ≥«∏2¯¬
k
¨ ¬¬±ª ª¬±ª ¶¨¨¤µ¦« ≤ ±¨·¨µo ÷∏¤± • ∏ ²¶³¬·¤¯ o≤¤³¬·¤¯ ±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© §¨¬¦¤¯ ≥¦¬¨±¦¨¶o
¨ ¬¬±ªtsssxv o ≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨ ¦·²©¬∏±¤²¼¬½«¬¦¤³¶∏¯ ²±·«¨ ¶¬ª±¤¯ ·µ¤±¶§∏¦·¬²± ³¤·«º¤¼ ²©≥≠x≠ ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ¶¤±§ ¬¨2
³¯²µ¨ ·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©·«¨ ©∏±¦·¬²± ²©·«¨ ¦¤³¶∏¯χ¶ ±¨«¤±¦¬±ª±¨ ∏µ²±¤¯ ªµ²º·«q Μετηοδ : ∏°¤± ±¨ ∏µ²¥¯¤¶·²°¤ º¤¶∏¶¨§¤¶¦¨¯¯ °²§2
¨¯¶¤±§·«¨ ¼ º µ¨¨ §¬√¬§¨ §¬±·²¦²±·µ²¯ ªµ²∏³¤±§ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ ªµ²∏³q≥∏³¨µ±¤·¤±·²© ¦¨¯¯ ¼¯¶¤·¨ º¤¶·¤®¨ ± ¤±§¬°°∏±²³µ¨¦¬³¬·¤·¬²±
º¤¶§²±¨ º¬·«¤±·¬¥²§¬¨¶·² ³µ²·¨¬±¶µ¨ ¤¯·¨§·²¶¬ª±¤¯ ·µ¤±¶§∏¦·¬²± ³¤·«º¤¼ o¤±§·«¨ ¬°°∏±²³µ¨¦¬³¬·¤·¨¶ º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¥¼ • ¶¨·¨µ±
¥¯²··¬±ªq Ρεσυλτ : ©·¨µ·µ¨¤·° ±¨·º¬·«¬∏±¤²¼¬½«¬¦¤³¶∏¯ o ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ®·r°
o ≤ ∞
o °2≤ ∞
º¤¶¦¯ ¤¨µ¯¼ ¬±¦µ¨¤¶¨§¤±§ ¬¨2
³µ¨¶¶¬²± ²©¦¼·²¦«µ²°¨≤ §¨¦µ¨¤¶¨§ °²µ¨ ·«¤±·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³qΧονχλυσιον : ¬∏±¤²¼¬½«¬¦¤³¶∏¯ ¦¤± ³µ²°²·¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¶²°¨³µ²2
·¨¬±¶µ¨ ¤¯·¨§ º¬·«¶¬ª±¤¯ ·µ¤±¶§∏¦·¬²± ³¤·«º¤¼¬± ≥≠x≠ ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ¶q ¦¨«¤±¬¶° ²©¬∏±¤²¼¬½«¬¦¤³¶∏¯χ¶ ±¨«¤±¦¬±ª±¨ ∏µ²±¤¯ ªµ²º·«¬¶µ¨ 2¯
√¨¤±··² ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¶²°¨³µ²·¨¬±¶¬± ¶¬ª±¤¯ ·µ¤±¶§∏¦·¬²± ³¤·«º¤¼ q
[ Κεψ ωορδσ] ¬∏±¤²¼¬½«¬¦¤³¶∏¯ ~≥≠x≠ ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ~¶¬ª±¤¯ ·µ¤±¶§∏¦·¬²± ³¤·«º¤¼
≈责任编辑 古云侠
征稿启事
霍香正气类产品源于宋代5太平惠民和剂局方6所收载的藿香正气散 o至今已有上千年的应用史 o被之后
历代医药学家推崇为/暑湿圣药0 ∀藿香正气产品由藿香 !紫苏 !白芷 !厚朴 !半夏等 ts味药组成 o解表祛暑 o
化湿和中 o用于外感风寒 o内伤湿滞 o夏伤暑湿 o头痛昏重 o脘腑胀痛 o呕吐泄泻 o胃肠型感冒等 ∀藿香正气类
产品是目前临床上应用最广泛同时也是剂型最丰富的药品之一 ∀藿香正气软胶囊剂型的出现 o是中国中成
药剂型改革的一个里程碑 o是天津达仁堂制药厂在 t|{|年历经 ts余年刻苦攻关推向临床的更优秀产品 ∀
达仁堂藿香正气软胶囊采用天然骨胶做囊材 o直接将广藿香油与紫苏叶油包于软胶囊内 o使得挥发性有效成
分以及其他有效成分保留最完全 o临床疗效也更加突出 o同时也很好避免了藿香正气类产品不良的口感 o使
得适用人群更加广泛 o极大地推动了祛湿类产品的应用与研究 ∀达仁堂藿香正气软胶囊曾获/国优金奖0 !
/巴黎国际旅游金帆奖0 !/国家中药保护品种0 !/全国中医医院急诊必备中成药0等殊荣 oussu年又第一批获
得我国药用植物及制剂进出口绿色行业标准认证 o为 usss年版5国家基本医疗保险目录6产品 ∀我国中医药
学有着悠久的历史 o同时具备完整的理论体系 o在中国已经加入世界贸易组织的今天 o世界性的交流也更加
广泛 o中医药学也面临所未有的机遇 ∀在这样一个大环境下 o杂志社以藿香正气软胶囊为题 o展开专题论文
征集活动 o目的是进一步整理 !发掘传统名药的临床应用与药学研究资料 o以增进交流与讨论 o宏扬光大民族
医药 o加强世界竞争力 ∀
具体要求 }
t q征文内容 }应用达仁堂藿香正气软胶囊的临床疗效总结 !经验 !体会 !新应用 !剂型特点 !药理研究等 ∀经单
位审核同意 o出具介绍信或加盖公章 ∀
u q征文请寄 }北京东直门内南小街 ty号中国中药杂志社程志铭收k邮编 tsszssl ~并请在信封上注明/征文0
二字 ∀
v q征文截稿日期 }藿香正气软胶囊截至 ussv年 tu月 vt日 o以邮戳为准 ∀
w q此次征文将由专家严格评审 o并编辑出版5中国中药杂志6增刊kussw年l o凡入选论文均每篇赠送增刊一
册 o获奖论文将颁发获奖证书及 uss ∗ xss元人民币奖金 o另设 xsss元优秀集体论文奖 ts个 o以资鼓励 ∀
x q联系人 }程志铭 o电话 }kstslywswx{vs ~传真 }kstsl{wsv{y{w
#{zst#
第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o¶¶∏¨ tt
²√¨°¥¨µoussv