全 文 ：≈tw  刘振丽 o宋志前 q不同地区制何首乌中二苯乙烯苷含量测定
和稳定性考察 q中成药 oussu ouwk|l }y{w q
≈tx  苏子仁 o周 华 o刘中秋 o等 q大黄在提取精致过程中的化学
成分变化研究kŒl2大黄素的湿热分解机理探讨 q药物分析杂
志 ot||{ ot{kul }{u q
≈ty  魏风玲 o单光璇 o朱立平 q大黄中总大黄素成分含量测定条
件优选 q中国实验方剂学杂志 oussu o{ktl }tw q
Ινφλυενχε οφ προχεσσ µετηοδσ ον χοντεντσ οφ χηεµιχαλ
χοµ πονεντ Ραδιξ Πολψγονι Μυλτιφλορι
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( Τηε Ινστιτυτε οφ Βασιχ Τηεορψ, Χηινα Αχαδεµψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsszss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] ⁄¬©©¨µ¨±·° ·¨«²§¶²© ³µ²¦¨¶¶¬±ª •¤§¬¬ °²¯¼ª²±¬ ∏¯·¬©¯²µ¬¤±§·«¨ ¦«¤±ª¨ ²© ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²°³²±¨ ±·¶¬±¦¯∏§¬±ª °¨²§¬±o
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[ Κεψ ωορδσ] • ¤§¬¬ °²¯¼ª²±¬∏¯·¬©¯²µ¬~³µ²¦¨¶¶¬±ª~¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ ¶~u ov ox owχ2¶·¬¯¥¨ ±¨ ª¯∏¦²¶¬§¨
≈责任编辑 刘  
芽孢杆菌发酵炮制中药红花增强溶血栓药效研究
何 晨t o金 钊u o冯志华t o白家峰t o田天丽t o张兴宇t o孙启玲t 3
kt1 四川大学 生命科学学院 o四川 成都 ytssyw ~u1 成都中医药大学 基础医学院 o四川 成都 ytsszxl
≈摘要  目的 }利用具有高纤溶酶活性的地衣芽孢杆菌 ≤u2tv发酵炮制中药红花以增强整体溶血栓药效的研
究 ∀方法 }应用系统数值化及数值系统调控技术对发酵炮制条件进行优化 o用角叉菜胶法进行了小鼠尾部血栓实
验及测定了大鼠纤溶及凝血指标 ∀结果 }在同等剂量下kt sss ˜#°ptl„红发组k红花与 ≤u2tv共发酵组l比其余各
组均有缩短血栓长度k Π s1stl ~明显延长凝血酶原时间k°×lk Π s1sxl !凝血酶时间k××lk Π s1sxl和活化的部分
凝血活酶时间k„°××lk Π s1stl ~显著缩短优球蛋白溶解时间k∞×lk Π s1stl的作用 ∀结论 }红花通过 ≤u2tv菌种
发酵炮制后可提高纤溶活性 !抗凝作用 o增强溶血栓药效 ∀
≈关键词  红花 ~芽孢杆菌 ~发酵炮制 ~溶血栓
≈中图分类号  • u{v ~• u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlsx2svws2sw
≈收稿日期  ussw2sw2sx
≈基金项目  四川省中医药管理局基金项目kussutwl
≈通讯作者  3 孙启玲 oר¯ }ksu{l{xwtstyx o∞2°¤¬¯}±≥∏± ƒ «²·2
°¤¬¯q¦²°
微生物自身具有的丰富酶系可在温和条件下促 使物质转化 o产生新物质 ∀通过微生物与中药共发
酵来进行中药炮制 o可能获得药效更强的药物 }微生
物发酵的次生代谢物与药物成分发生协同作用增强
药效 ~微生物在发酵过程中可能使药物转化为小分
子 o更利于身体的吸收 ~以中药的有效成分为前体 o
#swv#
第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ x
¤µ¦«oussx
经微生物代谢修饰可以形成新的药效更强的物质 ∀
红花 Χαρτηαµυσ τινχτοριυσ q系菊科植物红花的
干燥花 o是活血通络 !祛瘀止痛之良药 ∀近年来广泛
用于淤血阻滞 o血行不畅之证 o并具有降血脂和抗血
栓等作用 ∀作者用一株具有高纤溶酶活性的地衣芽
孢杆菌发酵炮制中药红花 o研究了共发酵的条件并
对共发酵产物进行了小鼠尾部血栓实验及体内凝
血 !纤溶效果的药效实验 ∀
1 材料
111 药物 红花 o产地四川简阳 o经成都中医药大
学裴瑾博士鉴定为菊科植物红花 Χ1τινχτοριυσ的干
燥花 ∀
112 试剂 冻干人纤维蛋白原 !凝血酶k中国药品
生物制品检定所l ~蚓激酶肠溶胶囊k北京百奥药业
有限公司 o批号 usuvs|stl ~角叉菜胶k¶¬ª°¤公司l ~
„°×× o×× o°× oƒŒŠ试剂盒k太阳诊断系列产品l ~其他
试剂均为分析纯 ∀
113 动物 ≥⁄大鼠 ys只 o体重kuws ? usl ªo雌雄
各半 o昆明种小鼠 ys只 o体重kus ? ul ª雌雄各半 o
由四川省中药研究所试验动物中心提供 ∀
114 菌种 地衣芽孢杆菌 ≤u2tv由本实验室分离 o
中国科学院成都生物研究所环境研究实验室鉴定并
传代保存 ∀
2 方法
211 纤维蛋白平板法 检测纤溶酶活 ∀参照 „¶2
·µ∏³和 ∏¯¯ µ¨·½¨ ≈t 的方法制备标准纤维蛋白平板 o用
微量注射器滴注定量样品于平板上 ovz ε 恒温箱中
温育 | «o用游标卡尺测量溶斑垂直直径 o并和尿激
酶标准曲线比较得酶活单位 ∀
212 发酵条件优化 生长曲线法 }红花全花 ws ε
下干燥 o粉碎过 uss目筛 o研究不同浓度的红花对
≤u2tv生长的影响 o在 yvs ±°下测量不同培养时间
的 Ο∆值 o绘制生长曲线 ∀ ≤u2tv菌株发酵培养基以
及发酵条件调控 !优化采用系统数值化及数值系统
调控技术≈u  ∀
213 药效实验
21311 小鼠尾部血栓实验 将小鼠随机分成 „对
照ks1su °²¯#pt的磷酸缓冲液l o…红浸k红花水提
液 ux ª#ptl o≤ 蚓激酶k配置成 t sss ˜#°ptl o⁄
白发k≤u2tv发酵上清液 t sss ˜#°ptl o∞红混k白
发浓缩 u倍后与 ux ª#pt的红浸等体积混合l oƒ红
发k红花与 ≤u2tv共发酵上清液 t sss ˜#°ptly组 o
每组 ts只 o雌雄各半 o每日每只灌胃 s1st °#ªpt ∀
喂药 v §后 o用角叉菜胶法≈v 做小鼠尾部血栓造型 ∀
正常给药 u §o并观察血栓出现率 o并测其长度 ∀
21312 正常大鼠凝血及纤溶指标的影响 动物分组
给药k同上l }每组 ts只 o雌雄各半 o分别按组给药 o每
日每只灌胃 s1st °#ªpt o时间为 ts §∀观察指标及
检测方法 }活化的部分凝血活酶时间k„°××l !凝血酶
原时间k°×l !凝血酶时间k××l的测定用 „≤uss全自
动血凝仪及其配套产品k美国 ≤²∏¯·¨µ公司l ~纤维蛋
白原kƒŒŠl的测定用采用 ≤¯ ¤∏¶¶凝固法 ~优球蛋白溶
解时间k∞×l测定按文献≈w ox ∀
214 数据处理 结果以 cξ ? σ表示 o数据用 τ检验 ∀
3 结果与分析
311 不同剂量红花对 ≤u2tv生长的影响
如图 t所示 o在 s h ∗ x h含量 o红花对 ≤u2tv的
生长的影响经历了一个由促进到抑制的过程 o培养
基中红花的含量在 s ∗ vs ª#pt时 o对这一株地衣芽
孢杆菌有促进其生长的作用 o大于 vs ª#pt时对其
生长有抑制作用 o因此在研究中红花的比例均控制
在 s ∗ vs ª#pt ∀值得注意的是在 us ∗ vs ª#pt含
量下 o红花不仅有力地促进了 ≤u2tv的生长而且还
显著延长了 ≤u2tv对数生长期 o这就更有利于微生
物对红花有效成分的发酵炮制以及纤溶酶的产生 ∀
图 t 不同含量ks h ∗ x h l红花对 ≤u2tv生长的影响
312 发酵炮制优化结果 通过系统数值化及数值
系统调控技术调控 !优化了培养基 ∀ Ξt ∗ Ξ{为碳源
含量 k h l o分别是糖蜜 o葡萄糖等 ; Ξ| ∗ Ξuu为氮源
含量k h l o分别是大豆蛋白胨 o玉米蛋白粉等 ~Ξuv ∗
Ξu|为无机盐含量 k h l o分别是 ª≤¯ u o ±≥’w等 o
Ξvs ∗ Ξvw为发酵条件 o其中 Ξvs为 ³‹ o Ξvt为温度
k ε l oΞvu为装量k h l oΞvv为接种量k h l oΞvw为发酵
时间k«l oΨ为发酵液的酶活k˜#°ptl ∀通过系统
#twv#
第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ x
¤µ¦«oussx
因素量的优化配置只进行了 x项试验 o使原系统由
vw个因素减少至 tv个 o试验结果见表 t共发酵前 ∀
又将红花的含量 s ∗ vskª#ptl作为一因素 o即 Ξvx
加入优化过的培养基中和地衣芽孢杆菌 ≤u2tv共发
酵 o对此进一步进行了优化就得到最佳发酵条件 o结
果见表 t共发酵后 ∀
表 t 系统因素量的优化配置试验设计及结果
组别 Ξy Ξtt Ξtw Ξus Ξuv Ξuw Ξu{ Ξu| Ξvs Ξvt Ξvu Ξvv Ξvw Ξvx Ψ
共发酵前 u t t t1y s1t t1u s1t{ s ts ws tΒtx v w{ s yyw
共发酵后 u t t t1y s1t t1u s1t{ s ts ws tΒtx v w{ ux zwu
未加红花 ≤u2tv菌株发酵液的酶活只有 yyw ˜#
°pt o而 ≤u2tv菌株与红花共发酵后酶活得到了一
定的提高k表 ul o这一结果提示了 ≤u2tv菌株的次生
代谢产物有可能和中药红花的有效成分发生复方协
同作用 o在共发酵过程中起到了促进纤维蛋白平板
溶解作用 ∀
313 小鼠尾部血栓实验结果 在小鼠皮下注射 t h
的脚叉菜胶后 w ∗ tw «后尾部出现暗红色血栓 o逐渐
向尾根部扩大到一定范围 ous ∗ u{ «经紫色变为黑
色 o与正常尾部分界明显 o结果见表u∀在同等水平下
kt sss ˜#°ptl oƒ组有显著抑制小鼠尾部血栓发生
率和缩短血栓长度 o并且效果好于 „ o…o≤ o⁄o∞oƒ 组 ∀
314 大鼠凝血及纤溶指标结果
31411 对凝血功能的影响 分别测定 „°×× o×× o°×
来反映机体内 !外源性凝血途径的状况 ∀见表 u o以
…o≤ o⁄o∞oƒ 组结果显示相对 „组 o在同等剂量下kt
sss ˜#°ptl oƒ组 °× o××和 „°××明显延长 o其差别
具有统计学意义 o说明 „红发组可明显抑制内源性及
外源性凝血系统 o且效果优于其余各组 ∀
31412 对纤溶系统的影响 在溶栓药物评定中 o
常以 ∞× oƒŒŠ来反映药物的溶栓效果 ∀见表 u o以
…o≤ o⁄o∞oƒ 组结果显示相对 „ 组 o在同等剂量下
kt sss ˜#°ptl oƒ组比其余各组有显著的缩短大
鼠血液优球蛋白溶解时间的作用 o其差别具有统计
学意义 o反映出红发组的纤溶酶活性高于其余各组 ∀
血浆纤维蛋白原kƒŒŠl的含量虽有下降趋势但无显
著性变化 o说明此剂量不影响机体的凝血机制 o出血
副作用小 ∀
表 u 小鼠尾部血栓及大鼠凝血 !纤溶指标结果kcξ ? σo ν € tsl
组别 血栓长度r h „°××r¶ °×r¶ ××r¶ ∞×r°¬± ƒŒŠrª#pt
„对照 w{1ty ? {1yv uv1|{ ? tt1xy tz1uw ? tw1wz wt1zw ? tw1uy usv ? t| v1ut ? s1t{
…红浸 v|1t| ? ts1ux uz1wt ? t|1xz us1s{ ? tz1u| wz1yx ? t|1vw tzw ? tutl v1tu ? s1ux
≤蚓激 vx1wu ? z1txtl vw1{{ ? ty1wwtl uu1w ? ty1uv xw1|{ ? tv1xt ttu ? tytl v1t{ ? s1tw
⁄白发 vt1zy ? |1yvtl wv1xu ? t{1xwtl u|1y{ ? tw1{{ yu1{w ? tw1xytl ts{ ? {tl v1tz ? s1uv
∞红混 uz1yw ? y1v|ul wx1u{ ? t|1|{tl uz1zx ? tx1xxtl yy1vz ? tt1uytl |z ? twul v1tt ? s1uu
ƒ红发 ut1vu ? x1v{ul xz1xv ? w1yvul v{1xw ? {1twtl z{1yy ? ty1xttl zy ? ttul v1sw ? s1ty
注 }剂量均为 s1st °#ªpt ~同对照组比较tl Π s1sx oul Π s1st
4 讨论
利用微生物发酵炮制中药的过程实际上是一种
生物转化反应 ∀微生物在生长过程中可以分泌几十
种胞外酶到培养基中去 o微生物进行生命活动所产
生的胞内酶更是有成百上千 o这些丰富而强大的酶
系就可能成为中药发生化学反应的物质基础 o也就
是微生物可以用来发酵炮制中药的理论根据 ∀
通过小鼠尾部血栓实验检验 ≤u2tv红花共发酵
液抗血栓药效 ~分别测定 „°×× o°× o×× 来反映机体
内 !外源性凝血途径的状况 ~并以 ∞× oƒŒŠ为指标
判定纤溶作用 ∀红发组比其余各组均有显著缩短小
鼠尾部血栓长度 ~明显延长大鼠 °× o××和 „°××值 o
并有显著的缩短 ∞×时间及降低 ƒŒŠ的含量的作用
趋势 ∀说明红花经 ≤u2tv共发酵炮制后可明显抑制
内源性及外源性凝血系统 o显著提高纤溶酶活性 o
使其抗栓 !溶栓作用增强 ∀
通过对红花中各有效成分结构的分析 o发现发
酵炮制后溶栓作用提高可能与 ≤u2tv所产生的各种
糖苷水解酶有关 ∀红花中有许多糖苷类化合物 o其
中很多糖苷是酚羟基与葡萄糖缩合而成 ∀如新红花
苷 oy2羟基山柰酚2v2 Ο2葡萄糖苷 oy2羟基山柰酚2z2
Ο2葡萄糖苷 o槲皮苷等 ∀当糖苷水解酶将这些糖苷
键上的葡萄糖水解掉后 o水解后产生的苷元比相应
的糖苷容易吸收 o生物利用率更高 o更有利于发挥其
药理作用 ∀
前期工作中 o利用 ‹°≤对 ≤u2tv与红花共发酵
#uwv#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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物进行了测定 o发现红花中有 t个保留时间为 z1ywu
°¬±的吸收峰消失 o还有个保留时间为 tu1wxz °¬±
的新吸收峰出现 ∀提示发酵后溶血栓能力提高可能
与 ≤u2tv的发酵炮制有关 ∀要从机理上解释这一现
象 o还需要利用核磁共振 !液2质联用等先进检测仪
器分析检测 o进行深入研究 ∀
≈参考文献 
≈t  „¶·µ∏³× o ∏¯¯ µ¨·½ ≥ q׫¨ ©¬¥µ¬± ³¯¤·¨ °¨ ·¨§©²µ ¶¨©¬°¤·¬±ª©¬¥µ¬±²·¼·¬¦
¤¦·¬√¬·¼q Αρχη Βιοχηεµ Βιοπηεψσot|xu ows }vwy q
≈u  邱 凯 o万昌秀 o张兴宇 o等 q应用系统全面反馈试验优化技术
提高 • Š⁄短肽液相合成产率的初步研究 q科技通报 oussv ot|
ktl }ux q
≈v  段智变 q纳豆激酶粗制液对家兔溶血栓作用及其机制研究 q
营养学报 oussv ouxktl }wy q
≈w  徐叔云 o陈 修 q药理试验方法学 q北京 }人民卫生出版社 o
t|{u q{v{ q
≈x  陈 奇 q中药药理研究方法学 q北京 }人民卫生出版社 ousss q
xt{1
Ενηανχεµεντ οφ τηροµ βολψτιχ αχτιϖιτιεσ οφ Χαρτηαµ υστινχτοριυσ
προχεσσεδ ωιτη φερµεντατιον ωιτη α βαχιλλυσσπ . Χu2tv
‹∞ ≤«¨ ±t oŒ‘2«¤²u oƒ∞‘Š «¬2«∏¤t o…„Œ¬¤2©¨ ±ªt o׌„‘׬¤±2¯¬t o‹„‘Š ÷¬±ª2¼∏t o≥˜‘±¬2¯¬±ªt
(t . Χολλεγε οφ Λιφε Σχιενχε , Σιχηυαν Υνιϖερσιτψ, Χηενγδυ ytssyw , Χηινα ;
u . Χηενγδυ Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Χηενγδυ ytsszx , Χηινα)
[ Αβστραχτ] „ ³µ²¦¨¶¶¬±ª ° ·¨«²§·² ±¨«¤±¦¨ ·«µ²°¥²¯¼·¬¦ ©¨©¨¦·²© Χαρτηαµυσ τινχτοριυσ ∏¶¬±ª¤©¨µ° ±¨·¤·¬²± ·¨¦«±²¯²ª¼ º¬·« βαχιλλυσ
σπ q≤u2tv º¤¶¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§q ׫¨ ©¬¥µ¬±²¯¼¶¬¶¤±§¤±·¬¦²¤ª∏¯¤·¬²± ¤¦·¬√¬·¼ ²©·«µ²°¥²¯¼·¬¦ ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° ¤± ²³·¬°¬½¨ §©¨µ° ±¨·¤·¬²± ³µ²¦¨¶¶º¤¶
¶·∏§¬¨§∏¶¬±ª¤¦¤µµ¤ª¨ ±¨¤±¬±§∏¦¨§ °¬¦¨ °²§¨¯q׫¨ ©¨µ° ±¨·¨§ ¬¨·µ¤¦·¶µ¨¶∏¯·¨§¬± ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¥¨·¨µ·«µ²°¥²¯¼·¬¦¤¦·¬√¬·¼o¶∏ªª¨¶·¬±ª·«¤·
·«¨ ³µ²¦¨¶¶º¤¶³µ²°¬¶¬±ª©²µ∏¶¨ ¬±·«¨ ¶·∏§¼ ¤±§³µ¨³¤µ¤·¬²± ²©±¤·∏µ¨ ° §¨¬¦¬±¨ ¶q
[ Κεψ ωορδσ] Χαρτηαµυστινχτοριυσ~·«µ²°¥²¯¼·¬¦ ©¨©¨¦·~©¨µ° ±¨·¤·¬²± ³µ²¦¨¶¶~ βαχιλλυσσπ q≤u2tv
≈责任编辑 刘  
≈收稿日期  ussw2su2ux
≈基金项目  河南省科技攻关项目kswuwuwssvvl
≈通讯作者  3薛刚 oר¯ }ksvzzluszyvt{ o∞2°¤¬¯}ª¤±ª¬∏¨t ƒ ¼¤«²²1¦²°
高纯度 Χ2亚麻酸包合工艺研究 ´
) ) ) 皂化值及皂化反应
刘凤霞t ou o薛 刚u 3 o高秋华t o高伟霞u o张立华v
kt1 华中科技大学 o湖北 武汉 wvsszw ~u1 南阳理工学院 生物与化学工程系 o河南 南阳 wzvssw ~
v1 河南南阳普康药业有限公司 o河南 南阳 wzvsswl
≈摘要  目的 }测定月见草油的皂化值及脂肪酸组分 o研究皂化反应后 ³‹对产物提率的影响和脂肪酸之间的
相关性 o为原料的选择 !提高皂化产物的产率及尿素包合提供依据 ∀方法 }皂化值的测定 o利用气相色谱法测脂肪
酸组分 ∀结果 }月见草油 Χ2亚麻酸含量在 z h ∗ ts h o其含量多少与不饱和脂肪酸含量呈极显著负相关 ∀通过皂
化值的测定 o确定了皂化月见草油时的 Ž’‹加量 o及皂化反应萃取时的最适 ³‹ ∀对 u个地区月见草油脂肪酸的测
定得出 o月见草油脂肪酸中棕榈酸的含量为 y h ∗ { h o硬脂酸为 t h ∗ u h o油酸为 z h ∗ ts h o亚油酸为 ys h ∗
#vwv#
第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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