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Different mechanisms Mediated the potentiation uterine smooth muscle caused by Polygala tenuifolia decoction progesterone in virginal rats

远志增强未孕大鼠子宫平滑肌运动的机制研究



全 文 :远志增强未孕大鼠子宫平滑肌运动的机制研究
徐敬东1,王 文2,秦晓民3
(1.首都医科大学 生理教研室,北京 100054;2.首都医科大学 宣武医院 药物研究中心,北京 100053;
3.兰州医学院 生理教研室,甘肃 兰州 730000)
[摘要] 目的:探讨远志对未孕大鼠子宫平滑肌电活动及离体子宫平滑肌条运动的影响及其机制。方法:在
体组随机选取成年未孕大鼠60只分为实验组(n=15)与5个机制组(n=9),实验时腹腔注射1次远志水煎剂溶液
(以下简称“远志”),剂量为0.02,0.04,0.08g·kg-13种浓度,等容量生理盐水作自身对照。腹腔注射1种阻断剂10
min后再注射远志0.04g·kg-1;离体组肌条在1g的前负荷下温育,远志浓度为2×10-4g·mL-1,记录30min;分别
使用不同的受体拮抗剂,5min后再加入远志。用Biolap410生物机能仪记录远志对子宫平滑肌电活动及离体子宫
平滑肌运动的影响。结果与结论:远志对未孕大鼠子宫平滑肌的运动有增强作用。远志对未孕大鼠子宫肌电的增
强作用可能主要通过L型Ca2+通道,α受体,H1受体发挥作用,与前列腺素合成和释放有关,平滑肌细胞膜上的 M
受体,并不参与介导其兴奋作用;而其对未孕大鼠离体子宫平滑肌收缩运动的增强作用,可能是通过 L型 Ca2+通
道、α受体、H1受体发挥作用,与前列腺素合成和释放及M受体无关。
[关键词] 大鼠;子宫平滑肌;运动;机制;远志
[中图分类号]R2855 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2005)04029503
[收稿日期] 20040710
[通讯作者] 徐敬东,Tel:(010)6305119813,Email:xujingdong
@163.com
远志来源于远志科植物远志 Polygalatenuifolia
Wild的干燥根,为安神益智药,具有安神益智,祛痰,
消肿等功效,在临床上曾用于引产及催产。有实验证
实,远志具有较强的子宫兴奋作用,远志水煎剂经乙醇
沉淀处理制成的100%注射液对大鼠及小鼠离体未孕
子宫有强烈的兴奋收缩作用,此作用可能系由于远志
皂苷对子宫肌的直接刺激所引起。远志皂苷H可兴奋
离体子宫平滑肌[13],且认为可能部分地通过兴奋前列
腺素合成酶而引起子宫收缩,但远志对子宫平滑机运
动影响机制的研究较少,本研究探讨了远志对未孕大
鼠子宫平滑肌电活动的影响。
1 材料
11 动物
成年未孕Wistar大鼠90只,体重250~300g,由
兰州医学院实验动物室提供(合格证书:医动字第
3676494号)。
12 药物
药材购于甘肃省黄河中药材批发市场,经兰州医
学院生药教研室周印锁教授鉴定为远志 Polygala
tenuifoliaWild。加10倍量水煎煮3次,每次1h,过
滤后合并滤液,浓缩,加乙醇至含醇量达80%,静置
12h,除去沉淀物,蒸发乙醇至无味,制备为1g·mL-1
终浓度的水煎剂,于4℃冰箱内保存,使用时用NaH
CO3调配pH值为73~74,采用终浓度为2×10-3g·
mL-1;阿托品(湖南洞庭药业股份有限公司,批号
000916),针剂05mg·mL-1;苯海拉明(江苏兴化制药
厂,批号00032331),针剂20mg·mL-1;酚妥拉明(上海
旭东海普药业有限公司,批号20000502),针剂10mg·
mL-1。异搏定(上海禾丰制药有限公司,批号00701),
针剂5mg·mL-1。消炎痛(江苏太仓制药厂,批号
990113),于5%NaOH溶液中溶解后,以10mol·L-1的
盐酸滴定至pH为74,制备为3mg·mL-1终浓度的溶
液。
13 仪器 肌肉张力换能器(JH-2,中国北京航天
医学工程研究所);Biolap410生物机能实验系统(成
都泰盟电子有限公司研制);CW-3恒温平滑肌槽
(上海豪敦工贸有限公司医学生物学实验器件厂);
5%二氧化碳与 95%氧气组成的标准气体(中科院
兰州化学物理研究所特种气体供应站)。
2 方法
21 在体实验 1%戊巴比妥钠35mg·kg-1腹腔注
射麻醉后,按外科手术常规于耻骨联合正上方行腹
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ChinaJournalofChineseMateriaMedica
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正中切口,切口长度10~20cm,在右侧子宫角上
方1cm处浆膜层沿子宫长轴包埋一对自制微型 Ag
-AgCl双极电极。电极导线自腹肌穿出,经皮下潜
行至颈部两肩胛引出体外。术后1周起在清醒状态
下每隔72h做一次实验,每次实验前将大鼠单独置
于特制的笼内,静置30min后将大鼠颈部导线连接
至微机Biolap410经生物机能系统软件记录其子宫
肌电。随机选取成年未孕大鼠 60只分为实验组与
5个机制组,每次实验时腹腔注射 1次远志水煎剂
溶液(以下简称“远志”),剂量有 002,004,008g·
kg-13种浓度。腹腔注射1种阻断剂10min后再注
射远志004g·kg-1。阻断剂有阿托品 05g·kg-1、
苯海拉明8mg·kg-1、酚妥拉明05mg·kg-1、异搏定
100μg·kg
-1和消炎痛 6mg·kg-15种。每次用药前
先记录10min等量生理盐水腹腔注射后的子宫肌
电作为自身对照,用药后再记录 50min。每鼠每次
实验间隔72h。
22 离体实验 同批动物实验前 24h禁食,饮水
不限,并于实验前 72h皮下注射乙烯雌酚 05mg·
kg-1,造成人工动情期以提高子宫对药物的敏感性。
制成子宫平滑肌条备用[4],将肌条分别安置在恒温
平滑肌肌槽中,每个肌槽中分别盛有 5mL37℃
Krebs液。肌条在1g的前负荷下温育,每20min更
换1次5mL新鲜的Krebs液(37℃),待肌条的自发
活动平稳后再加入药物。远志浓度为 2×10-4g·
mL-1,记录30min;分别使用不同的受体拮抗剂,消
炎痛浓度为 2×10-5moL·L-1;酚妥拉明浓度 2×
10-6moL·L-1;阿托品浓度2×10-5moL·L-1;异搏定
浓度为2×10-7moL·L-1;苯海拉明浓度2×10-6moL
·L-1,5min后,再加入远志。此后,用37℃Krebs液
冲洗多次。药物终浓度指的是溶于肌槽中 5mL溶
液后的浓度。
23 统计方法 所有数据均采用珋x±s表示。离体
机制组用变化指数来表示[(效应值-对照值)/对照
值×100%+3]。使用 SPSS80软件进行统计学检
验,给药组同对照组间进行配对比较的 t检验,机制
组采用配伍组LSD法检验。
3 结果
31 远志对未孕大鼠子宫肌电的作用 腹腔注射
不同剂量远志后与等量的生理盐水对比,子宫肌电
均发生不同程度的增强,频率加快,持续时间延长,
峰面积加大,用药后子宫肌电发生较有规律的变化,
爆发波频率,持续时间及峰面积先随时间的增加而
迅速增加,给药后0~20min内达到最大值,然后随
时间的增加逐渐减小,30~40min后,子宫肌电基本
恢复正常,给药后 0~30min内爆发波频率持续时
间,峰面积同对照组比较均有显著性差异,见表1~
3。
表1 远志对大鼠在体子宫肌电爆发波持续时间的作用(珋x±s,n=15)
组 别
剂量
/g·kg-1
肌电爆发波持续时间/s
对照 0′~ 10′~ 20′~ 30′~ 40′~50′
远志低剂量组 0.02 5.72±3.78 8.45±3.422) 8.82±4.672 6.43±4.30 5.62±3.66 4.35±2.45
远志中剂量组 0.04 5.21±2.01 8.37±4.371) 8.13±2.472) 6.85±2.04 5.89±2.05 5.04±2.64
远志高剂量组 0.08 5.38±2.29 10.20±3.943) 8.86±3.103) 7.55±3.352) 6.13±3.90 6.09±3.38
注:与对照组比较1)P<0.05,2)P<0.01,3)与远志组比较4)P<0.05,5)P<0.01(表2,3同)
表2 远志对在体大鼠子宫肌电爆发波峰面积的作用(珋x±s,n=15)
组 别
剂量
/g·kg-1
肌电爆发波峰面积/mV·s·min-1
对照 0′~ 10′~ 20′~ 30′~ 40′~50′
远志低剂量组 0.02 0.96±0.72 1.41±0.981) 1.31±0.79
1)
0.94±0.79 0.95±0.76 0.60±0.41
远志中剂量组 0.04 0.82±0.49 1.20±0.692) 1.05±0.43 0.91±0.40 0.74±0.34 0.61±0.21
远志高剂量组 0.08 0.76±0.41 1.51±0.962) 1.27±0.592) 1.02±0.56
1)
0.83±0.47 0.70±0.39
表3 远志对在体大鼠子宫肌电爆发波频率的作用(珋x±s,n=15)
组 别
剂量
/g·kg-1
爆发波频率/n·min-1
对照 0′~ 10′~ 20′~ 30′~ 40′~50′
远志低剂量组 0.02 0.47±0.27 0.80±0.432) 0.79±0.462) 0.58±0.39 0.48±0.29 0.38±0.24
远志中剂量组 0.04 0.55±0.18 0.82±0.381) 0.82±0.221) 0.69±0.26 0.57±0.21 0.48±0.18
远志高剂量组 0.08 0.45±0.26 0.94±0.263) 0.70±0.212) 0.57±0.231) 0.46±0.28 0.45±0.29
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阿托品阻断M受体后,远志对子宫肌电的增强
作用未受影响,爆发波的频率、持续时间及峰面积与
对照组比较有显著性差异(P<005),与单独远志
组无显著性差异(P>005);苯海拉明阻断 H1受体
后,远志对子宫肌电的作用消失,爆发波频率、持续
时间及峰面积与对照比较无显著性差异(P>
005),与单独远志组有显著性差异(P<001~
0001);酚妥拉明阻断α受体后,远志对子宫肌电增
强作用部分消失,爆发波频率及峰面积与对照组比
较无显著性差异(P>005),与单独远志组有显著
性差异(P<005~001);异搏定阻断 L型钙通道
后,远志对子宫肌电的增强作用被完全阻断,爆发波
频率,持续时间及峰面积与对照组比较无显著性差
异(P>005),与单独远志组有显著性差异(P<
005~001);消炎痛抑制前列腺素合成酶后,远志
对子宫肌电的增强基本消失,爆发波频率,持续时
间,峰面积与对照组无显著性差异(P>005),而与
单独远志组比较有显著性差异(P<005)。
32 远志对离体子宫平滑肌运动的影响 远志能
增加子宫平滑肌收缩运动,使收缩波的频率加快,振
幅增大,持续时间延长。分别加入不同的受体拮抗
剂5min后,再加入远志(20×10-4g·mL-1)进行自
身对照。结果表明,在加入 L型 Ca2+通道阻断剂异
搏定后发现远志的兴奋子宫平滑肌的作用消失,在
加入H1受体阻断剂苯海拉明后远志兴奋子宫平滑
肌作用被部分阻断,收缩波的振幅,持续时间与对照
组无显著性差异(P>005),与单独远志组有显著
性差异(P<005),收缩波的频率与对照组比较有
显著性差异(P<005),与单独远志组无显著性差
异(P>005);加入α受体阻断剂酚妥拉明后,远志
兴奋子宫平滑肌的作用部分阻断,收缩波的持续时
间与单独远志组比较有显著性差异(P<001);加
入消炎痛抑制前列腺素合成酶合成和释放后,远志
的增强子宫平滑肌的作用未受明显影响,收缩波的
频率,持续时间与对照组有显著性差异(P<005~
001)。与单独远志组无显著性差异(P>005),见
表4。
表4 使用拮抗剂后远志对大鼠离体子宫平滑肌条
作用的影响(珋x±s,n=9)
组 别
收缩波
频率 振幅 持续时间
远志组 432±2201) 313±0201) 316±0192)
异搏定组 280±027 285±020 285±014
异搏定+远志组 323±0804) 288±0254) 276±0235)
酚妥拉明组 329±076 291±019 287±032
酚妥拉明+远志组 328±048 307±024 278±0325)
苯海拉明组 314±048 296±025 281±018
苯海拉明+远志组 425±1281) 305±0364) 306±0644)
消炎痛组 299±025 300±037 291±027
消炎痛+远志组 503±2261) 311±027 336±0532)
注:①表内数据均为变化指数;②与对照组比较1)P<005,2)P
<001;与远志组比较4)P<0.05,5)P<0.01
4 讨论
本实验以慢性在体实验的方法证明远志兴奋子
宫平滑肌爆发波的作用是多途径的,酚妥拉明,苯海
拉明,异博定,消炎痛都能部分或全部阻断其兴奋作
用,提示远志兴奋子宫平滑肌电活动作用与子宫平
滑肌的细胞膜上的α受体和组胺H1受体有关,并可
通过作用于LVDCC和刺激前列腺素的合成与释放
的途径实现。但平滑肌细胞膜上的 M受体,并不参
与介导其兴奋作用。在急性离体平滑肌实验中,发
现远志能加强子宫平滑肌收缩波的振幅,持续时间
及收缩频率,当剂量加大时出现强烈收缩,其作用主
要通过 H1受体,L型钙通道,α受体发挥作用,与前
列腺素的合成与释放作用与 M受体无关。离体与
在体实验均可增强子宫平滑肌运动,但其机制不同。
[参考文献]
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wildonisolatedsmoothmuscleandheart.ChinPharmJ,1999,34
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[2] 金宝渊,朴政一.远志生物碱成分的研究.中国中药杂志,
1993,18(11):675.
[3] 刘友平,万德光,刘 涛,等.分光光度计测定不同产地远志
总皂甙的含量.成都中医药大学学报,2000,23(2):46.
[4] 高宇勤,秦晓民,徐敬东,等.黄连水煎剂对未孕大鼠离体子
宫平滑肌运动的影响.中药药理与临床,2002,18(5):33.
(下转第319页)
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肠道有刺激,应在饭后服用;大蜜丸应压碎后服用;
儿童应根据年龄或体重不同规定用量等等。
中成药说明书的统一和规范,不但给病人服用
带来很多方便,而且有利于很多疗效确切的中成药
推广应用,从而做大做强中药产业,提升中医中药地
位。
[参考文献]
[1] 王筠默,姜名瑛 中药药理学 上海:上海科学技术出版社,
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[2] 尹 广,胡伟新,黎磊石 木通中毒的肾脏损害 肾脏病与透
析肾移植杂志,1999,8(1):10
[3] 杨占华,王 薇 服用木通煎剂致肾脏损害1例 中国药业,
2003,12(10):54
[责任编辑 古云侠]
(上接第297页)
DiferentmechanismsMediatedthepotentiationuterinesmoothmusclecausedby
Polygalatenuifoliadecoctionprogesteroneinvirginalrats
XUJingdong1,WANGWen2,QINXiaomin3
(1.Departmentofphysiology,CapitalUniversityofMedicalScience,Beijing100054,China;
2.HospitalofXuanwu,CapitalUniversityofMedicalScience,Beijing100053,China;
3.Departmentofphysiology,LanzhouMedicalColege,Lanzhou730000,China)
[Abstract] Objective:ToresearchtheefectsofPolygalatenuifoliadecoctiononmyoelectricactivityofuterinesmoothmuscleand
contractileactivityofuterinesmoothmusclestripsofvirginalrats.Method:TorecordtheefectsofP.tenuifoliadecoctiononmyoelectricac
tivityofuterinesmoothmuscleandcontractileactivityofuterinesmoothmusclestripsofvirginalratswithbiolap410biologicalsystem.Five
blockingagentswereusedtostudytheirmechanimsrespetively.Result:DifeerentdosagesofwaterextractofP.tenuifolia(0.02,0.04,0.
08g·kg-1),couldsignificantlypotentiateuterinemyoelectricagtivityandcontractileactivityofvirginalrats.Conclusion:TheefectofP.
tenuifoliaonmyoelectricactivityofuterinesmoothmuscleandcontractileactivityofuterinesmoothmusclestripsinratsmaybemainlyassoci
atedwithH1receptor,receptor,Lvoltagedependantcalciumchannelsorprostaglandinsynthese,itsnothingtoMreceptor.
[Keywords] rat;uterinesmoothmuscle;motion;mechanism;Polygalatenuifolia
[责任编辑 古云侠]
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