全 文 ：银黄狼消颗粒剂检测方法研究
李先端 3 o仝 燕 o马振山 o王 琳
k中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }建立银黄狼消颗粒质量标准 ~方法 }采用薄层层析定性 o反相高效液相定量 ~结果 }建立金银花 !
青蒿 !三七 !紫草 !山茱萸的鉴别方法 o大黄中大黄酚的含量测定法 ∀结论 }经方法学考察和 v批样品验证 o方法准
确 o简便灵敏 o可作为本制剂质量标准 o并供其他复方制剂的参考 ∀
≈关键词  银黄狼消颗粒 ~金银花薄层 ~青蒿薄层 ~高效液相法 ~大黄酚含量测定
≈中图分类号  • u{v ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsx2swuy2sv
本制剂由大黄 !金银花 !青蒿 !甘草 !枸杞子 !三
七 !地黄 !紫草 !山茱萸 |味药材加工精制而成 o属新
开发的 v类中成药 o目前已通过临床前审批 ∀该药
具有透热解毒 o凉血活血 o滋补肝肾的功能 ∀临床用
于系统性红斑狼疮热毒蕴血 o血瘀肾虚证 ∀面部及
手部红斑 !发热 !口疮 !咽干口渴 !心烦心悸 !腰膝酸
软等病症 o有很好的疗效 ∀为保证其安全性有效性
及稳定性 o必须建立质量控制的标准 o因此作者进行
了实验研究 o对复方制剂中主要的 x味药材 o金银
花 !三七 !青蒿 !紫草 !山茱萸建立了薄层鉴别方法 ~
对君药大黄中的大黄酚进行了含量测定 o经过方法
学考察和 v批样品的验证 o说明方法准确可靠 o简便
灵敏 o可作为本制剂的质量控制方法 o尤其本研究中
银花 !青蒿 !紫草的薄层鉴别方法 o对其存在于别的
复方制剂中的薄层鉴别 o具有一定的参考意义 ∀
1 仪器 !试药 !样品
1 q1 高效液相色谱仪
沃特斯 p yss高效液相色谱仪k美国l o沃特斯
p w{y检测器 ~日本岛津 ˜∂ p vsss紫外 !可见分光
光度计 ∀
1 q2 试药
大黄酚 !绿原酸 !人参皂苷 •ªt o• ¥t o熊果酸等
对照品由中国药品生物制品检定所提供 ∀大黄药材
北京市市售 ∀样品批号 ||s{s{ o||s{s| o||s{ts由本
所剂型室提供 ∀
2 方法和结果
2 q1 鉴别
≈收稿日期  ussv2sv2us
≈通讯作者  3李先端 oר¯ }kstslywstwwtt2u|xx
2 q1 q1 金银花 取本品细粉 s .v ªo加甲醇 x °o超
声处理 us °¬±o滤过 o取滤液作为供试品溶液 ∀另取
绿原酸对照品 o加甲醇制成每 t °含 t °ª的溶液 o
作为对照品溶液 ∀再取缺金银花的样品 o同法制成
甲醇溶液 o作为缺金银花的空白溶液 ∀吸取供试品
溶液及空白溶液各 y ˏ!对照品溶液 u ˏo分别点于
同一硅胶Š薄层板上 o以醋酸丁酯2甲酸2水kz qxΒ
v qxΒt qxl为展开剂 o展开 o取出 o晾干 ∀喷 t h亚硝
酸钠的 t h甲醇溶液 o待层析板干燥后 o再喷 t °²¯#
pt氢氧化钠溶液 ∀供试品色谱中 o在与对照品色
谱相应位置上 o显相同红色的斑点 o缺金银花空白样
品无干扰斑点 ∀
2 q1 q2 青蒿 取本品细粉 u ªo置索氏提取器中 o加
石油醚kvs ∗ ys ε l适量 o加热提取 u «o提取液回收
溶媒至干 o残留物加氯仿 u °溶解 o作为供试品溶
液 ∀另取青蒿对照药材 s qx ªo同法制成对照药材溶
液 ∀再取缺青蒿的样品 o同法制成甲醇溶液 o作为缺
青蒿的空白溶液 ∀吸取供试品溶液及空白溶液各 w
ˏ!对照药材溶液 u ˏo分别点于同一硅胶 Š薄层
板上 o以醋酸乙酯2甲酸2水kz qyΒs qwΒt qsl的上层溶
液为展开剂 o展开 o取出 o晾干 ∀在紫外光灯kvyx
±°l下检视 ∀供试品色谱中 o在与对照品色谱相应
位置上 o显相同的蓝色荧光斑点 o缺青蒿空白样品无
干扰斑点 ∀
2 q1 q3 三七 取本品细粉 u .x ªo置索氏提取器中 o
加适量氯仿 o加热提取 u «o弃去氯仿液 o药渣挥尽氯
仿 o加甲醇 us °o超声处理 us °¬±o滤过 o滤液蒸干 o
加水 ts °溶解 o离心 o取上清夜置分液漏斗中 o用
水饱和的正丁醇提取 u次 o每次 us °o合并正丁醇
#yuw#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
¤¼oussw
溶液 o加氨试液洗 u次 o每次 us °o弃去氨洗液 o正
丁醇液蒸干 o残渣加甲醇 x °使溶解 o作为供试品
溶液 ∀另取人参皂苷 •ªt o•¥t o加甲醇制成每 t °
各含 t °ª的溶液 o作为对照品溶液 ∀再取缺三七样
品 o同法制成甲醇溶液 o作为缺三七的空白溶液 ∀吸
取供试品溶液及三七空白溶液各 y ˏ!对照对照品
溶液各 w ˏo分别点于高效硅胶 ys预制板k µ¨¦®l
上 o以氯仿2甲醇2水kyxΒtvΒtslts ε 以下放置 tu «
的下层溶液为展开剂 o展开 o取出 o晾干 ∀喷 ts h
硫酸乙醇溶液 o于 |s ∗ |x ε 加热至斑点显色清晰 ∀
供试品色谱中 o在与对照药材及对照品色谱相应位
置上 o显相同颜色的斑点 o缺三七空白样品无干扰斑
点 ∀
2 q1 q4 紫草 取本品 u ªo研细 o加石油醚kvs ∗ ys
ε lws °o加热回流 u «o滤过 o滤液蒸干 o残渣加少
量甲醇溶解 o通过中性氧化铝柱ku ªotss ∗ uss目 o
干法装柱 o内径 t ¦° l o用甲醇 tx °洗脱 o蒸干 o残
渣加氯仿 u °使溶解 o作为供试品溶液 ∀另取紫草
对照药材 s qx ªo同法制成对照药材溶液 ∀再取缺紫
草的样品 o同法制成甲醇溶液 o作为缺紫草的空白溶
液 ∀吸取供试品溶液及空白溶液各 { ˏ!对照药材
溶液 y ˏo分别点于同一硅胶 Š薄层板上 o以石油
醚kys ∗ |s ε l 2乙醚kyΒwl为展开剂 o展开 o取出 o晾
干 ∀在紫外光灯kvyx ±°l下检视 ∀供试品色谱中 o
在与对照药材色谱相应位置上 o显相同的蓝色荧光
斑点 o缺紫草空白样品无干扰斑点 ∀
2 q1 q5 山茱萸 取本品 w ªo研细 o加乙醚 ws °o加
热回流提取 w «o滤过 o滤液蒸干 o残渣加无水乙醇2
氯仿kvΒul混合溶液 u °使溶解 o作为供试品溶液 ∀
另取山茱萸对照药材 t ªo同法制成对照药材溶液 ∀
再取熊果酸对照品 o加无水乙醇制成每 t °含 t °ª
的溶液 o作为对照品溶液 ∀再取缺山茱萸的样品 o同
法制成空白溶液 ∀吸取上述 w种溶液各 y ˏo分别
点于同一硅胶 Š薄层板上 o以甲苯2醋酸乙酯2冰醋
酸ktuΒwΒs qxl为展开剂 o展开 o取出 o晾干 ∀喷以
ts h硫酸乙醇溶液 oo于 |x ∗ tss ε 加热至斑点清
晰 ∀供试品色谱中 o在与对照品及对照药材色谱相
应位置上 o显相同颜色的斑点 o缺山茱萸空白样品无
干扰斑点 ∀
2 q2 含量测定
2 q2 q1 色谱条件 色谱柱 Žµ²°¤¶¬¯p ≤t{ ow qy °° ≅
txs °° ox Λ°k北京分析仪器厂填装l ~流动相甲醇2
水2冰醋酸k{sΒusΒtl ~检测波长 uxw ±° ~流速 t qs °
#°¬±pt ~理论板数按大黄酚峰计算为 v sss ∀
2 q2 q2 线性关系考察 精密吸取大黄酚对照品溶
液ks qxtw ª#ptls qx ot qs ot qx ou qs ou qx °o分别置
ts °量瓶中 o加甲醇稀释至刻度 o摇匀 o分别精密
吸取 us ˏo注入高效液相色谱仪 o测定峰面积 o以大
黄酚进样量为横坐标 o峰面积为纵坐标 o绘制标准曲
线 o其回归方程为 }Ψ€ x ssw sss Ξ p uv xxs , ρ€
s q||| | ∀表明大黄酚在 s qsx ∗ s quy Λª有良好的线
性关系 ∀
2 q2 q3 提取方法和时间 取样品数份 o加入甲醇 o
分别以超声处理 vs owx oys °¬±o回流 t ou «等方式提
取 o制备样品溶液 o经测定大黄酚含量分别为
s q|yu os q|{y os q|{z os q|{t os q|zx °ª#ªpt ∀结果表
明 o超声和回流提取均能将大黄酚提取完全 ∀为方
便起见 o采用超声处理 wx °¬±提取方法 ∀
2 q2 q4 精密度试验 精密吸取大黄酚对照品溶液
ks qssz zt ª#ptlus ˏo重复进样 x次 o测定峰面积 o
• ≥⁄为 s qww h ∀
2 q2 q5 稳定性试验 取样品溶液 o分别于 s ou ow oy o
{ ots otu ouw «进样测定 o• ≥⁄为 s qzs h ∀表明大黄
酚在 uw «内测定稳定 ∀
2 q2 q6 重复性试验 取同一批号样品 o精密称定 x
份 o制备样品溶液 o进行测定 o结果含量为 s q|yx °ª#
ªpt o• ≥⁄为 t qv h o表明含测方法重复性良好 ∀
2 q2 q7 回收率试验 采用加样回收法 o精密称取已
知含量的样品样品 o分别加入一定量的大黄酚对照
品 o按本实验方法进行测定 o结果见表 t ∀
表 t 大黄酚回收率测定结果
称样量
r °ª
大黄酚量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
r h
ξ
r h
• ≥⁄
r h
zx q|u s qszu | s qtw{ w |z q|u
zy qsu s qszv s s qtw| x || quu
z{ q|{ s qszx { s qtxu x || qw{ |{ qyz s qyz
z{ q{u s qszx z s qtxt w |{ qt{
z{ q|w s qszx { s qtxt { |{ qxz
注 }大黄酚添加量均为 s qszz t °ª
2 q2 q8 样品测定
对照品溶液制备 精密称取大黄酚对照品 x
°ªo置 xs °量瓶中 o加甲醇2氯仿kwxΒxl的混合液
溶解 o稀释至刻度 o摇匀 ∀精密吸取此溶液 u °o置
ux °量瓶中 o用甲醇稀释至刻度 o摇匀 o即得k每 t
°含大黄酚 { Λªl ∀
#zuw#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
¤¼oussw
供试品溶液制备 取本品细粉约 s qtx ªo精密
称定 o置具塞锥形瓶中 o精密加甲醇 us °o密塞 o称
定重量 o超声处理 wx °¬±o放冷 o再称定重量 o用甲醇
补足减失的重量 o摇匀 o滤过 ∀精密量取续滤液 ts
°o置 xs °鸡心瓶中 o挥去溶媒 o残留物加 y h盐
酸溶液 ts °o置沸水浴上加热水解 vs °¬±o移出 ∀
迅速冷却后 o置分液漏斗中 o加乙醚提取 w次 o每次
us °o合并乙醚提取液 o用蒸馏水洗 v次 o每次 vs
°o弃出水液 o乙醚溶液加入少量无水硫酸钠脱水 o
回收溶媒 o残留物加甲醇溶解 o定量移至 ts °量瓶
中 o并稀释至刻度 o摇匀 ∀用微孔滤膜ks qwx Λ°l滤
过 o取滤液作为供试品溶液 ∀
测定 分别吸取大黄酚对照品与供试品溶液各
us ˏo注入液相色谱仪 o测定 o即得 ∀结果见表 u ∀
表 u 样品测定结果k ν € ul
批 号 大黄酚含量r°ª#ªpt
||s{s{ s q|w
||s{s| s q|y
||s{ts s q|z
3 讨论
3 q1 曾采用药典鉴别单味药的方法≈t  o结果不适合
复方制剂 o为达到鉴别目的 o必须改进方法 ∀如金银
花的薄层鉴别 o展开薄板在紫外灯下检视 o有其他荧
光斑点干扰绿原酸的检查 o故改用喷 t h甲醇的 t h
亚硝酸钠溶液 o在板层干燥后再喷 t °²¯#pt氢氧化
钠溶液≈u  o使绿原酸呈现红色斑点而检出 ∀鉴别三
七 o供试品溶液制备必须先用氯仿脱脂 o氨水洗涤 o
才能检出 •ªt o• ¥t ∀供试品中未检出青蒿素及紫草
中左旋紫草素 o后改变了提取和净化方法 o薄层条件
以药材为对照品 o结果找到了鉴别特征 o经多批原料
考查 o发现此荧光斑点为药材固有成分 o因此具有专
属性强 o方法简便 o重现性好 o并且在其他复方制剂
中已得到验证 ∀按药典方法检查制剂中山茱萸的熊
果酸 o斑点不集中 o严重脱尾 o故改用文中的展开剂 ∀
3 q2 本方由大黄 !金银花 !青蒿等 |味中药组成 o大
黄为方中君药 ∀大黄主要含蒽醌类化合物 o其大黄
酸 !大黄素 !大黄酚等成分有多种药理活性 o其抗菌
消炎的药理作用与方中功能主治相吻合 ∀故选择大
黄中的化学成分作为分析定量 o以保证制剂的质量 ∀
据文献报道大黄中大黄酸 !大黄酚含量较高 o大黄素
较低 ∀经高效液相试验 o阴性样品在大黄素峰位处
有干扰 ∀因此作者选定大黄酚 o参考文献≈v  o建立
了高效液相法测定本方制剂中大黄酚的含量 ∀
3 q3 大黄蒽醌主要是以结合形式存在 o在参考文献
≈v 的基础上 o分别以 w h oy h o{ h浓度的盐酸进行
水解 o制备样品溶液 o经测定大黄酚含量分别为
s q|uy os q|zv os q|zt °ª#ªpt ∀表明 y h盐酸水解完
全 o大黄酚含量最高 o故采用 y h盐酸进行水解 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 q一部 qusss qts ouu otx{ otzz ou{s q
≈u  沙世炎 o徐礼 o严敏如 o等 q中草药有效成分分析法 q北京 }
人民卫生出版社 ot|{t qtxt q
≈v  罗文毓 o江 萍 q大黄中五种蒽醌衍生物的 ‹°≤测定 q药物分
析杂志 ot|{| o|kxl }ux| q
Στυδψ ον θυαλιτατιϖε ανδ θυαντιτατιϖε µετηοδσφορ Ψινηυανγ Λιανγξιαο γρανυλε
Œ ÷¬¤±2§∏¤±oג‘Š ≠¤±o  „ «¨ ±2¶«¤±o • „‘Š ¬±
(Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα , Αχαδεµψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsszss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¶·¤±§¤µ§²© ≠¬±«∏¤±ª¤±ª¬¬¤² ªµ¤±∏¯¨q Μετηοδ : ׫¨ Παναξ νοτογινσενγ , Αρνεβια
ευχηροµθ , Χορνυσ οφφιχιναλισ , Λονιχεραϕαπονιχα , Αρτεµισιαε αννυα º µ¨¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§¥¼ ׏≤ q׫¨ ¦²±·¨±·²©¦«µ¼¶²³«¤±²¯ ¬± ªµ¤±∏¯¨ º¤¶§¨·¨µ2
°¬±¨ §¥¼ ‹°≤ q Ρεσυλτ : ≥³²·¶²©¶¤°³¯ ¶¨²± ׏≤ ¦¤± ¥¨ º¨¯¯¶¨³¤µ¤·¨§¤±§·«¨ ° ·¨«²§«¤§ª²²§¶³¨¦¬©¬¦¬·¼q׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¼ ²©¦«µ¼¶²2
³«¤±²¯ º¤¶|{ qz h ¤±§• ≥⁄ º¤¶s qyz h qΧονχλυσιον : „± ¤¦∏µ¤·¨o¶¬°³¯¨¤±§ ©¨©¨¦·¬√¨ ∏´¤¯¬·¼2¦²±·µ²¯ ¬¯±ª° ·¨«²§«¤¶¥¨ ±¨ §¨ √¨¯²³¨ §oº«¬¦«
¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ©²µ≠¬±«∏¤±ª¤±ª¬¬¤²ªµ¤±∏¯¨q
[ Κεψ ωορδσ] ≠¬±«∏¤±ª¤±ª¬¬¤²ªµ¤±∏¯¨~׏≤ ~ ‹°≤ ~¦«µ¼¶²³«¤±²¯
≈责任编辑 袁桂京 
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第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
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