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HPLC测定北沙参中腺苷的含量



全 文 :十烷酸二十六烷醇酯(eicosanoicacidhexacosylester)
数据一致,因此鉴定化合物 3为二十烷酸二十六烷
醇酯。
化合物4 白色粉末(氯仿甲醇),mp281~283
℃,溶于氯仿甲醇混合溶液,浓硫酸香草醛显紫红
色,LiebermannBurchard反应阳性,Molish反应阳性。
其红外图谱与文献[6]一致。在薄层色谱上与β胡
萝卜苷标准品对照,两者 Rf值和显色行为一致,与
β胡萝卜苷标准品混合后熔点不下降,故鉴定化合
物4为β胡萝卜苷。
[参考文献]
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[责任编辑 李 禾]
HPLC测定北沙参中腺苷的含量
原 忠,董 焱,朱静娟
(沈阳药科大学 中药学院,辽宁 沈阳 110015)
[收稿日期] 20050515
[通信作者] 原忠,Tel:(024)23986469,Email:yuanzhong19@
yahoocomcn
北沙参为伞形科植物珊瑚菜 Glehnialitoralis
FrSchmidtexMiquel的干燥根。具有养阴润肺,益
胃生津的功效,主治肺热燥咳,虚劳久咳等证,并常
应用在抗衰老和癌症化疗后恢复体质的中药方剂
中[1,2]。现代化学及药理研究表明北沙参的主要有
效成分为香豆素、聚炔、酚酸、核苷、木脂素及异木脂
素等化合物[24]。其中,腺苷在生理生化过程中起着
调控作用,具有广泛的药理作用[5]。腺苷的含量测
定方法主要有薄层扫描法[6]、高效液相色谱法
(HPLC)[7]、高效毛细管电泳法[8],但对北沙参中腺
苷的含量测定尚未见报道。本研究采用 HPLC法,
测定了北沙参中腺苷的含量,并探讨了不同的产地
加工方法对腺苷含量的影响,方法准确,简便可靠,
适用于北沙参中腺苷的定量分析,也为其质量研究
提供了参考依据。
1 仪器与试药
PERKINELMERLC-250高效液相色谱仪,
PERKINELMER235c型二极管阵列检测器。
甲醇为色谱纯,纯净水,其余试剂均为分析纯。
腺苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号 879
200001)。北沙参药材,共 5批,经沈阳药科大学吴
维春高级工程师鉴定为珊瑚菜 Glitoralis,粉碎后
过40目筛备用。
2 方法与结果
21 色谱条件 DiscoveryC18色谱柱(46mm×250
mm,5μm),流动相为甲醇水(15∶85),柱温为室温,
流速10mL·min-1,检测波长260nm。按腺苷峰计
算,理论塔板数为5500。
22 标准曲线的绘制 精密称取腺苷对照品 182
mg,置于5mL量瓶中,加甲醇至刻度,混匀。分别进
样10,20,30,40,60μL,按上述色谱条件测定,
以峰面积对进样量进行回归,得腺苷的线性回归方
程为 Y=75955×106X+43999×105,r=09999,
线性范围为0364~2184μg。
23 供试品溶液的制备 取北沙参药材粉末 50
g,精密称定,加甲醇 50mL,超声 20min,滤过,滤液
以40mL石油醚萃取1次,弃取石油醚层,下层甲醇
液浓缩至小体积,置5mL量瓶中,甲醇稀释至刻度,
定容;经 045μm微孔滤膜过滤后,制成供试品溶
液。
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第30卷第17期
2005年9月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol30,Issue 17
September,2005
24 精密度试验 取腺苷对照品溶液,按上述色谱
条件进行分析,连续进样5次,每次进样50μL,结
果腺苷峰面积的RSD13%(n=5)。
25 重复性试验 取同一批北沙参药材,共 5份,
按供试品溶液的制备项下操作,平行测定,进样
100μL,结果供试品中腺苷含量的 RSD23%(n=
5)。
26 加样回收率的测定 取已知腺苷含量的北沙
参药材30g,共 5份,分别精密加入腺苷对照品溶
液(0364mg·mL-1)07mL,按供试品溶液的制备项
下操作,平行测定,进样100μL,结果平均加样回收
率是970%(RSD13%,n=5),见表1。
表1 腺苷的加样回收率(n=5)
称样量
/g
样品中含量
/mg
测得量
/mg
加样回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
3001 02491 04932 958
3001 02491 04945 963
3000 02490 04964 971 970 13
3002 02492 04953 966
3001 02491 05017 991
注:加入量均为02548mg
27 含量测定 取供试品溶液,按上述色谱条件进
行分析,进样100μL,通过回归方程计算腺苷的含
量,结果见表2,图1。
图1 北沙参HPLC图谱
1腺苷
表2 不同来源的北沙参中腺苷含量
编号 收集地 产地 产地加工方法 含量/mg·g-1
1 山东莱阳 山东莱阳 洗净,晒干 0083
2 山东莱阳 山东莱阳 沸水烫后,去外皮,晒干 0015
3 山东青岛 山东 去外皮 0018
4 辽宁沈阳 去外皮 0016
5 辽宁大连 去外皮 0020
3 结果与讨论
31 对回流提取法、索氏提取法以及超声提取法进
行了试验比较。以超声提取法提取率最高并且重现
性好。经甲醇超声提取后,以少量石油醚萃取,能够
除去脂溶性成分的干扰。
此外,本研究还对提取时间、提取次数进行了考
察。分别超声提取 10,15,20,25,30min,以腺苷含
量为考察指标,结果表明,20min后腺苷含量不再改
变。超声提取1次,基本提取完全,对第2次提取液
进行测定,未检测到待测峰。
32 利用 PE1022液相色谱工作站的纯度检查功
能,对供试品中腺苷峰纯度进行考察。通过比较腺
苷峰上各检查点的在线紫外吸收光谱,完全匹配,即
认为供试品中腺苷峰是纯的。
33 北沙参的产地加工方法主要有2种,一种是经
过沸水烫后,去外皮,晒干而成;另一种不经去皮,洗
净直接干燥。据文献报道,采用前一种方法,北沙参
中香豆素类成分欧前胡素和异欧前胡素的含量显著
降低,并建议北沙参应不去外皮,直接使用[9]。本研
究首次运用高效液相色谱法测定了北沙参中的腺苷
含量,结果表明,在5批北沙参药材中,腺苷含量为
0015~0083mg·g-1,其中,产自山东莱阳、未经产
地加工的药材所含腺苷的量最高。传统的产地加工
方法是否对北沙参药材质量有着不可忽视的影响,
值得重视,有待进一步研究。
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[责任编辑 李 禾]
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2005年9月
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September,2005