全 文 ：#资源与鉴定#
泰和乌骨鸡苹果酸脱氢酶同工酶的薄层
等电聚焦电泳分析 3
李思光 k南昌大学生物科学工程系 南昌 vvsswzl
周庆华 k江西省分析测试研究所 南昌 vvssu|l
摘要 采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳技术 o研究泰和乌骨鸡肝 !肾 !眼 !肌 !脑和心 y种组
织中的苹果酸脱氢酶k ⁄l同工酶 ∀结果发现 o泰和乌骨鸡组织中共有 tu条 ⁄ 酶带 ∀不同组织中
酶带分布各不相同 o表现出明显的组织特异性 ∀
关键词 泰和乌骨鸡 苹果酸脱氢酶 同工酶 等电聚焦电泳
泰和乌骨鸡是我国特有的药用鸡种 o具有
补气养血 !调经止滞 !平肝祛风 !益肾养血等功
效 ∀以其为主要原料生产的/乌鸡白凤丸0是驰
名中外 o畅销各地的妇科良药 ∀随着泰和乌骨
鸡药用产品的开发和生产 o饲养泰和乌骨鸡的
鸡场和专业户越来越多 o同时 o市场上也出现了
一些品种不纯的乌骨鸡 ∀本文采用薄层聚丙烯
酰胺凝胶等电聚焦电泳技术 o研究泰和乌骨鸡
不同组织中 ⁄ 同工酶的分布情况 o旨在为
泰和乌骨鸡的种质鉴定和良种选育提供一些实
用的生化指标和理论依据 ∀
1 材料与方法
111 实验材料
泰和乌骨鸡 Γαλλυσ γαλλυσ δοµεστιχυσ
µ¬¶2
¶²±由江西省泰和县泰和鸡原种场提供 o经南
昌大学洪瑞川教授鉴定 ∀实验用泰和鸡 us只 o
其中雌鸡 {只 o雄鸡 tu只 o体重为 xus ∗ y|xª∀
112 样品制备
将泰和乌骨鸡断头放血 o随后解剖 o迅速摘
取肝 !肾 !眼 !肌 !脑和心 y种组织 ∀各组织块用
w ε 生理盐水洗净 o转入玻璃匀浆器 o按 tΒts
kªr °¯ l的比例加入冰冻磷酸缓冲液ks1st°²¯r
o³z1wl o在冰浴中匀浆 ∀然后 w ε 离心
ktxsssµr°¬±l vs°¬±∀离心后 o吸取上清液置
p xs ε 低温冰箱保存 o供同工酶电泳分析用 ∀
113 电泳方法
采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳
法 ∀薄层凝胶厚 s1x°° o凝胶浓度为 z1x h o交
联度为 v1s h o两性电解质载体k³ 范围为 v1x
至 ts o上海生物化学研究所产品l在凝胶中的
浓度为 u h ∀擦镜纸加样法加样 o加样量为
{Λ¯ ∀聚焦电泳在 w ε 冰箱中进行 ∀起始恒压
ys∂ otx°¬±后改为恒流 o每厘米宽的凝胶电流
为 s1xx° o恒流 ux°¬±后切断电源 o去掉加样
纸 o继续以 s1xx°r¦°凝胶宽恒流 o当电压升
至 x{s∂ 时 o再恒压 x{s∂ v«∀
114 染色
⁄ 同工酶染色参照 ≥«¤º≈t 的方法进
行 ∀
115 酶带命名
按从正极到负极的顺序 o用阿拉伯数字依
次给各酶带编号 o愈造近阳极的酶带用愈小的
数字表示 ∀
3 江西省自然科学基金资助项目
#xuv# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 y期
2 结果k见附图l
肝 肾 眼 肌 脑 心
附图 泰和乌骨鸡 y种组织中 ⁄ 同工酶电泳图谱
1 染色最深
1 染色较深 ≤1 染色居中
⁄1 染色较浅 ∞1 染色最浅
从附图可见 o泰和乌骨鸡共有 tu条等电点
不同的 ⁄ 酶带 o不同组织中酶带分布各不
相同 o具有明显的组织特异性 ∀为便于分析 o将
图谱分为 ´和 µ两个区域 ∀ ´区共有 z条等电
点不同的酶带k带 t ∗ zl o肝和肾中这 z条酶带
均有分布 o心缺带 t o脑缺带 t和带 y o肌肉缺带
t和带 u o眼缺带 t !带 u和带 y ∀在 ´区的不同
组织中 o相同等电点的酶带活性差异明显 o肝和
肾的大部分酶带其活性显著高于其它组织中的
相应酶带 ∀在同一组织中 o不同等电点的酶活
性也各不相同 o均以带 x的活性为最高 ~µ区共
有 x条等电点不同的酶带k带 { ∗ tul o各组织
中酶带的数量及活性的差异比 ´区更大 ∀肝 !
肾和心中 x条酶带均有 o其中肾和心的带 tt和
带 tu活性大 o染色深 ∀脑有两条微量带k带 tt
和带 tul o眼和肌只有一条微量带k带 ttl ∀
3 讨论
动物的 ⁄ 是二聚体酶 o分为由 o
基
因编码的¶2 ⁄k上清液型l和由 ≤ o⁄基因编
码的 °2 ⁄k线粒体型l两种类型≈u ov ∀前者
形成 u o
和
uv种分子形式 ~后者形成 ≤u o
≤⁄和 ⁄uv种分子形式 ∀这两种类型的 ⁄
同工酶具有不同的电泳行为 o在常规电泳图谱
中明显分为两个区带组 o即 ¶2 ⁄ 区带组和
°2 ⁄ 区带组 o每一区带组均有 v 条酶带 ∀
我们采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳将
泰和鸡的 ⁄ 同工酶分为 tu条酶带 o虽然它
们也可分为两个区带组 o但每个区带组的酶带
均超过 v条 o提示常规电泳图谱中的某些 ⁄
酶带具有不均一性 o其中含有 u条或 u条以上
的亚带 o其原因可能是蛋白质的亚基在翻译后 o
某些氨基酸残基经化学修饰 o造成了蛋白质分
子的微小差异 o这种差异用常规电泳难以分辨 o
在电泳图谱中表现为一条带 o而高分辨的薄层
等电聚焦电泳则可将其有效分开 ∀
同工酶分析是生物品种鉴定的理想方
法≈w ∀在以往的同工酶研究中 o人们常采用淀
粉凝胶电泳和常规聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ∀
前者分辨率低 o费时长 o区带拖尾严重 o后者的
分辨率虽优于前者 o但在 ⁄ 同工酶分析中 o
常出现部分区带染色不清的现象 ∀等电聚焦电
泳是基于不同蛋白质之间等电点的差异而将其
分离的高分辨率分析技术 o采用该技术分析泰
和乌骨鸡的 ⁄ 同工酶 o得到了区带更精细
的电泳图谱 o因而提高了对泰和乌骨鸡的种质
鉴别能力 ∀该技术仪器设备简单 o操作方便 o重
复性好 o是动物品种鉴定工作中值得推广的实
用技术 ∀
4 参考文献
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¬²¦«¨ ° ±¨¨ ·ot|zs ~w }u|z
u 李扬文等 q动物学报 ot||t ~vzkvl }u{t
v 傅予昌等 q水生生物学报 ot|{{ ~tukvl }ut|
w 余育和等 q水生生物学报 ot||v ~tzkvl }uyz
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