全 文 ：#研究论文#
石斛属 • „°⁄分析及鉴定铁皮石斛的
特异性引物设计
张 铭t o黄华荣t o廖苏梅t o高江云u
kt q浙江大学生命科学学院 o浙江 杭州 vtsstu ~
u q中国科学院西双版纳热带植物园 o云南 昆明 yxsuuvl
≈摘要  目的 }对石斛属植物亲缘关系进行分析 o并设计一对能方便准确地鉴别铁皮石斛的特异性引物 ∀方
法 }用随机扩增多态性 ⁄‘„k• „°⁄l技术对石斛属内 uy个种和金石斛属的 t个种进行了基因组 ⁄‘„多态性分析 o
并构建聚类树状图 ∀根据筛选到的 ⁄‘„片段序列 o将 ≥¤±ª²±t{引物从 v. 端延长至 us ¥³o得到所要的特异性引
物 ∀结果和结论 }设计成的特异性引物能方便快捷地鉴别出铁皮石斛 ∀此技术为药材的分子鉴定提供了一个新思
路 ∀
≈关键词  石斛属 ~铁皮石斛 ~• „°⁄~特异性引物
≈中图分类号  • u{u qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukusstlsz2swwu2sy
石斛属 ∆ενδροβιυ µ ≥º q是兰科植物中的第二
大属 o全世界约有 t xss ∗ t yss 种 o我国近 {s
种≈t  o其中 vs 多种可入药≈u  o而铁皮石斛 ∆ενδρο2
βιυ µ χανδιδυ µ • ¤¯¯q¨ ¬ ¬¯±§¯ q是其中的上品 o早在
5神农本草经6上就已把它作为传统的珍稀野生中药
材加以记载 ∀近年来 o国内外药学研究者对其化学
和药理的深入研究还发现它具有更为重要的药用价
值≈v ow  ∀
石斛的生境十分独特 o资源稀少 o加之人为滥采
和生境破坏 o不少名贵品种特别是铁皮石斛已近濒
危 ∀因此 o目前石斛药材市场上出现大量假冒的铁
皮石斛 ∀由于不同来源的石斛其药用成分如石斛
碱 !石斛多糖的种类和含量差异较大 o药理活性亦不
同≈x  ∀而加工成的石斛生药仅仅依靠颜色 !形状 !
气味 !味道和质地等感观特征难以区分其真伪 ∀为
此一些学者在商品石斛药材的鉴定研究中作了大量
的工作≈y ∗ {  o其鉴定标准也从传统的性状 !显微方
法发展到应用色谱 !光谱等较新的技术 o但这些鉴定
方法多数是以鲜植株为材料 o且需一定的分类学专
业知识和经验 ∀显微粉末鉴定虽可以借助于导管 !
≈收稿日期  usss2s|2uu
筛管 !内含物等性状来鉴别 o但加工成品其表面性状
已发生极大变化 o同时相近种又非常相似 o这都给鉴
定带来了很大的困难 ∀
⁄‘„ 分子标记技术的应用使中药鉴定深入到
分子水平 o提高了鉴定的准确性 o也能解决上述的一
些难题 ∀t||w年香港中文大学 ≤«¨ ∏±ª率先用 „°2
°≤ • 方法对西洋参 !人参的鉴别进行了研究≈|  ∀随
后出现许多用 ⁄‘„ 分子标记方法鉴定中药材的报
道≈ts ott  ∀但仍因其操作复杂 o成本过高 o难以作为
快速的常规方法应用于中药材的鉴定 ∀
本文在对 uy种石斛进行 • „°⁄聚类分析的基
础上 o对铁皮石斛某些特异性的 ⁄‘„ 片段序列进
行分析 o从而设计出一对长度大于 tx ¥³的高度特
异性引物 o该引物只能与铁皮石斛基因组的某一区
域特异性结合 o这就提高了鉴定的准确度 ∀同时还
因提高了复性温度 o从而能在一定程度上消除非样
品 ⁄‘„污染所造成的干扰 o而有望成为高效准确
鉴定铁皮石斛的新方法 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
供试材料的名称与来源列成表 t o其来源除特
别注明外均由中国科学院西双版纳热带植物园高江
云先生提供 ∀高江云 !傅承新鉴定 ∀
#uww#
第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qz
∏¯ qousst
表 t 供试材料和来源
编号 材料名称 编号 材料名称 编号 材料名称
t ∆ενδροβιυ µ ηανχοχκιι细叶石斛 tt ∆ . ωαρδιανυ µ 大包鞘石斛 ut ∆ . πενδυλυ µ 肿节石斛
u ∆ . νοβιλε金钗石斛 tu ∆ . χανδιδυ µ 铁皮石斛 ≠ uu ∆ . χηρψσοτοξυ µ 鼓槌石斛
v ∆ . εξιλε景洪石斛 tv ∆ .ϕενκινσιι聚石斛 uv ∆ . τερµιναλε刀叶石斛
w ∆ . δεννεανυ µ 迭鞘石斛 tw ∆ . ωιλλιαµσονιι黑毛石斛 uw ∆ . λιναωιανυ µ 矩唇石斛
x ∆ . βελλατυλυ µ 矮石斛 tx ∆ . χαπιλλιπεσ短棒石斛 ux ∆ . χρεπιδατυ µ 玫瑰石斛
y ∆ . σαλαχχενσε竹枝石斛 ty Επηε µεραντηα . φι µ βριατα流苏金石斛t) uy ∆ . φαλχονερι串珠石斛
z ∆ . φι µ βριατυ µ 流苏石斛 tz ∆ . αχιναχιφορµε剑叶石斛 uz ∆ . απηψλλυ µ 兜唇石斛
{ ∆ . χαρινιφερυ µ 翅萼石斛 t{ ∆ . δεϖονιανυ µ 齿瓣石斛 u{ ∆ . χανδιδυ µ 铁皮石斛 Š
| ∆ . αδυνχυ µ 钩状石斛 t| ∆ . λοδδιγεσιι美花石斛 u| ∆ . χανδιδυ µ 铁皮石斛 „
ts ∆ . µ ονιλιφορµε细茎石斛 us ∆ . χηρψσαντηυ µ 束花石斛
注 }表中铁皮石斛 ≠ oŠ o„分别产自云南 !广西和安徽 tl为金石斛属
1 q2 方法
1 q2 q1 ⁄‘„抽提 选择不同植株的适宜叶片数
张 o剪碎后液氮研磨 o取 s qx ª粉末置于 ∞³³¨ ±§²µ©
管中 o加入 xss Λ¯ 抽提缓冲液ktss °°²¯#pt ×µ¬¶2
‹≤¯o³‹ { qs ~tss °°²¯#pt ∞⁄× „ ~xss °°²¯#pt
‘¤≤¯~tss °°²¯ #ptΒ2巯基乙醇 ~u h ≥⁄≥ ~总 ³‹ z
∗ z qxl和 s qsx ª∂ ≤ o充分混匀后 oyx ε 水浴保温 us
°¬±∀冷却至室温 o加入 trv 体积 x °²¯ # pt的
Ž„¦o再次剧烈振荡混匀后w ε 放置x °¬± ow ε
tu sss ª离心 x °¬±o取上清液加入等体积的酚2氯
仿2异戊醇kuxΒuwΒtl o缓慢颠倒混匀 ow ε 静置 x
°¬±∀w ε tx sss ª离心 x °¬±∀取上清液并定量 o
加入等体积异丙醇和 trts体积的醋酸饱和液 o最后
加入 trts体积的乙醚 ∀混匀后 o静置 x °¬±o待分层
后弃去下层多糖 o上清液于 xx ε 水浴 tx °¬±o充分
挥发乙醚 ∀在 p us ε 放置 t «ow ε t usss ª离心
ts °¬±o所得沉淀用 zs h乙醇洗涤 u次 o风干后溶于
tss Λ¯ ×∞ 中 ∀ ˜ ∂2uyx 型紫外分光光度计k≥«¬2
°¤§½∏公司产l检测并定量 ∀
1 q2 q2 引物的筛选 用上述样品 ⁄‘„ 对上海生
物工程有限公司k≥¤±ª²±l的 ≥序列引物k≥t2≥tssl
共计 tss条进行筛选 ov个样品筛选 ts个引物后更
换另外 v个样品继续筛选 o依次类推 o直至 tss个引
物筛选完毕 o从中选择扩增谱带清晰且呈多态性的
引物用于所有实验样品的扩增 ∀
1 q2 q3 °≤ • 扩增和电泳检测 在前期实验中我们
对石斛 • „°⁄的反应条件和反应参数进行了优化 ∀
总反应体积为 ux Λ¯ o其中含有 ys ±ª模板 ⁄‘„ os qy
Λ°²¯#pt引物k上海生物工程公司l ou qx °°²¯#pt
 ªu n ot 单位 Ταθ 酶k进口分装l ~tss Λ°²¯ #pt
§‘×°∀ °≤ • 扩增仪型号为 • ²¥²¦¼¦¯¨ µŠµ¤§¬¨±·ws
k≥·µ¤·¤ª¨ ±¨ 公司产l o反应参数为 }|w ε 预变性 v
°¬±o|w ε 变性 xs ¶¨¦ov{ ε 复性 t °¬±ozu ε 延伸 u
°¬±o循环 ws次 ~最后 zu ε 延伸 x °¬±∀扩增完毕 o
以 t q{ h琼脂糖凝胶k含 ∞… s qx Λª# °¯ p tl电泳分
离 o用 Ž¤§¤µ数码相机和 Œ⁄凝胶分析系统照相记录
结果 ∀
1 q2 q4 聚类分析 电泳扩增图谱的每一条带
k⁄‘„片段l均为一个分子标记 o并代表引物的一个
结合位点 o根据各分子标记在相同电泳迁移率下k相
同分子量片段l的有无统计得到所有位点的二元数
据 }有 ⁄‘„扩增带k显性l为 t o无带记 s o强带和可
分辨的弱带均赋值为 t≈tv  ∀应用浙江大学唐启义
等编制的 ⁄°≥数据处理系统进行统计分析≈tw  o˜°2
Š  „建立亲缘关系树状图 ∀
1 q2 q5 铁皮石斛特异性条带的筛选 分析 us种引
物所得的电泳图谱 o从中挑选出具有铁皮石斛特异
性条带的 x种引物 o重复 • „°⁄反应 o筛选出特异
性条带能稳定扩增的几种引物 ∀再用顾其华的方法
分离并纯化出所需的特异性片段≈tx  o然后将纯化好
的 ⁄‘„片段用同种引物进行 • „°⁄扩增k复性温
度提高至 ws ε l o电泳检测后 o用5  ²¯ ¦¨∏¯¤µ≤ ²¯±¨ }
„ ¤¥²µ¤·²µ¼ ¤±±∏¤¯6中的方法进行纯化 o测序 ∀
1 q2 q6 铁皮石斛探针的设计 用双向测序法测定
的片段序列 o用 °µ¬° µ¨ °µ¨ °¬¨µx qs k°• ∞Œ∞•
…¬²¶²©·Œ±·¨µ±¤·¬²±¤¯开发l软件设计出一对约 us ¥³
碱基的引物 o进行合成 ∀
1 q2 q7 铁皮石斛探针的验证 取本实验的 u|种样
品为模板 o加入特异性引物 o反应体系和反应参数主
要参照 1 q2 q3 o复性温度为 xt ε ∀
2 结果与分析
2 q1 ⁄‘„多态性分析
#vww#
第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qz
∏¯ qousst
用筛选出的 us个引物对石斛属 uy个种和金石
斛属 t个种的样本 ⁄‘„ 进行 • „°⁄扩增 o共获得
uty条 ⁄‘„扩增带 o扩增片段长度在 s qv ∗ u Ž¥之
间 o引物 ≥xs获得 ut条带 o引物 ≥u o≥y|分别获得 x
条带 ∀平均每个引物产生约 tt条带 ~其中 us条带
k约占 | qv h l在所分析的石斛属 uy 个种都存在 o
t|z条k占 |t qu h l为多态性带 o如表 u和图 t所示 ∀
这表明石斛属植物遗传进化背景复杂性 o同时也表
现出其丰富的遗传多样性 ∀
2 q2 石斛属种间亲缘关系分析k图 ul
图 u表示的是 uz种样品用类平均法聚类后的
结果 o在遗传距离 s q{w处作结合线 t¯ o可将 uz种样
本分为 ´ ∗ ·类 o´类包括 t ov ox oy oz o{ otv otw o
tx ous ouu等 tt 个种 oµ类包括 u ow o| ots ott otu o
t{ ot| out ouw oux ouy ouz等 tv个种 otz ouv 归为 ¶
类 oty号样本单独聚为 ·类 ∀{s年代初 o在植物形
态分类方面吉占和曾把我国石斛属的 xz个种划分
为 |个组 o它们分别为剑叶组 !圆柱叶组 !禾叶组 !心
叶组 !基肿石斛组 !草叶组 !黑毛组 !顶叶组 !大花石
斛组≈ty  ∀而从本文绘制的 uz种石斛聚类图可见 o
µ类中的 tv个样品全部属于大花石斛组 o¶类 u个
样品均为剑叶组 o单独聚为 ·类的 ty号样品为金石
斛属的流苏金石斛 ∀这表明本研究在分子水平上的
• „°⁄聚类结果与经典的形态分类学结果基本一
致 ∀不过 o也存在与经典分类学结论不完全吻合的
情况 o´类的情况较复杂 o它包括大花石斛的 w个
种 o黑毛组的 v个种 o顶叶组的 v个种及基肿石斛组
和禾叶组各 t个种 o这需要进一步的探讨 ∀但若将
结合线 u¯划在 s qzw处时 o´类可细分为 v类 o从而
把顶叶组的 v个样本ktv otx ouul和黑毛组的 v个样
本kx o{ otwl区分开来 ∀
表 u us种随机引物的 • „°⁄标记统计结果
引物 总扩增带 多态性带 多态性带比例r h
≥u x x tss
≥x tx tw |v qv
≥tu ts { {s qs
≥tv tw tu {x qz
≥t{ tu tt |t qz
≥ut ts | |s qs
≥uy | | tss
≥vt tt ts |s q|
≥vx { { tss
≥v{ tz tx {{ qu
≥w{ | { {{ q|
≥xs ut us |x qu
≥xx tt ts |s q|
≥yu ts { {s qs
≥yx | | tss
≥y| x w {s qs
≥zz ts | |s qs
≥{s { z {z qx
≥{z tv tu |u qv
≥|s | | tss
总计 uty t|z |t qu
注 }多态性带不包括金石斛属的流苏金石斛
图 t 用引物 ≥t{扩增得到的 • „°⁄图谱
箭头 t 所指的条带为铁皮石斛的特异性带 箭头 u所指的条带为单一性带 o它为石斛属共有
 为 ¤µ®¨ µk图 v o图 w同l t ∗ uz q与表 t 所列石斛种类的编号相对应k图 u o图 w 同l
2 q3 铁皮石斛特异性条带的筛选
在不同引物的扩增产物中 o在某一片段长度处
仅个别种出现的条带 o即其它种不具有的条带可作
为该种的特殊标记 ∀铁皮石斛 ≠ 在引物 ≥t{的 xts
¥³k简称 ≥t{rxts o以下同l o≥uyr{ss o≥v{r|{s o≥wwr
wxs o≥uurxws处有清晰的多态性带 o而其它种石斛
在该处都不扩增 o因此这些条带可作为铁皮石斛的
特异标记 ∀经过进一步筛选 o发现只有 ≥t{rxts处
的片段和 ≥uyr{ss处的片段能稳定扩增 o且 v个产
地的铁皮石斛均有此带 ∀如图 v所示 o继而将铁皮
#www#
第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qz
∏¯ qousst
石斛 ≠ 箭头处的条带回收后 o再用引物扩增k复性
温度升至 ws ε l o结果如图 v的 ¤泳道 o这进一步证
明了此片段的特异性 o然后将同次 °≤ • 产物纯化 !
测序 ∀
图 u 根据 • „°⁄标记绘制分析的 uz种石斛的亲缘关系聚类图
2 q4 铁皮石斛特异性引物的设计
≥t{样品测序结果显示 o片段的长度为 xsv ¥³o
与 ¤µ®¨ µ标定的长度基本一致 ∀两端的序列和引
物序列完全对应 ∀我们采用 °µ¬° µ¨°µ¨ °¬¨µx qs软
件进行引物序列设计 o发现在二十个碱基处设计引
物最佳 o一条引物的 × °为 ys qy ε o另一条为 yt qu
ε o它们比较接近且引物内及引物间的碱基配对均
不超过 v对 ∀合成此引物 ∀
2 q5 铁皮石斛特异性引物的验证
从图 w中可以看出 o只有 ≠ oŠ o„ v种铁皮石斛
均有一条 xts ¥³左右的带 o其余 ux种石斛无任何
扩增产物 o说明此特异性引物设计已经成功 ∀
3 讨论
石斛经长期的异花授粉和自然选择 o其遗传背
景非常复杂 o事实上 o某些种之间的形态特征相差甚
远 ∀本研究结果表明 o供试种的基因组 ⁄‘„ 扩增
谱带的多态性高达 |t qu h ∀远高于濒危植物银松
k ut qx h l≈tz 和矮牡丹 kuu qx h l !紫斑牡丹
kuz qy h l≈t{  o而与兰花≈t|  !桑属植物≈us 相当 ∀说
明我国石斛属形成较早或变异率较高 o因而具有丰
富的遗传多样性 ∀
图 v 特异条带的筛选k≥t{l
„ oŠ o≠ 对应的石斛种见表 tk图 w 同l
¤qxts条带的扩增产物
此外 o本研究中 o绝大多数种间亲缘关系分析的
结果与经典分类学的结果十分一致 ∀如美花石斛
∆ .λοδδιγεσιι与齿瓣石斛 ∆ . δεϖονιανυ µ ;串珠石斛
∆ . φαλχονερι !大包鞘石斛 ∆ . ωαρδιανυ µ 与肿节石
斛 ∆ . πενδυλυ µ ;翅萼石斛 ∆ . χαρινιφερυ µ 与黑毛
石斛 ∆ . ωιλλιαµσονιι在形态分类上十分相近 o两者
#xww#
第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qz
∏¯ qousst
的亲缘关系 • „°⁄分析结果也是如此 ∀但在少数
种间关系分析中 • „°⁄分析与经典分类学的结论
不完全一致 o竹枝石斛 ∆ .σαλαχχενσε和细叶石斛 ∆ .
ηανχοχκι在经典分类中将前者列入禾叶组 o而将后
者列入大花石斛组 o我们 • „°⁄分析的结果却显示
两者的亲缘关系较近 ∀这有待于经典分类学和分子
生物学对兰科植物分类的进一步共同研究 ∀
图 w 铁皮石斛特异性引物的验证
本文在对石斛属 uy个种的 • „°⁄图谱聚类分
析的基础上 o挑选出铁皮石斛特异性条带 o进行测
序 o在符合 °≤ • 引物设计的原则下 o将原 • „°⁄引
物向 v. 端延长至 us ¥³碱基 ∀当有样品需要鉴定
时 o提取样品 ⁄‘„后 o再用探针对它进行一次 °≤ •
反应 o经电泳检测便可达到准确鉴别样品真伪 o所
以 o用此特异性引物进行鉴别时不需再用铁皮石斛
作对照实验 o只要电泳图谱上出现条带即为真品 ∀
由于鉴别 °≤ • 所用的是高特异性 °≤ • 引物 o扩增
反应的复性温度高 !特异性强 o一般 ⁄‘„ 的污染不
会影响鉴定结果 o对实验操作的要求也不如 • „°⁄
苛刻 o所以这种鉴别技术较易掌握 o具有很大的实用
价值 ∀此方法可克服其它 ⁄‘„ 分子标记鉴别技术
进行药材鉴定时存在的成本高 !重现性不好 !程序繁
琐等问题 o使 ⁄‘„ 分子标记鉴别技术推广应用于
药材鉴别成为可能 ∀
生物的遗传信息不随个体的发育阶段的变化而
变化 o同一个体的不同组织器官都具有相同的遗传
信息 ∀生物种属特异性的遗传信息也不会因新鲜活
体或干枯样本而发生生物差异 ∀本文介绍的鉴定方
法就是基于生物种属特异性和遗传稳定性而设计出
精确识别铁皮石斛与其他石斛的方法 ∀
≈参考文献 
≈t  唐振缁 o程式君 q广东石斛属k兰科l的研究 q中国科学院华南
植物研究所集刊 q第二集 qt|{y qz q
≈u  李满飞 o徐国钧 o吉占和 q广西产石斛属植物两新种 q中国药
科大学学报 ot|{| ouskul }yz q
≈v  王天山 o陆跃鸣 q鼓槌石斛中化学成分对 Žxyu肿瘤细胞株生
长抑制作用体外试验 q天然产物研究与开发 ot||z o|kul }t q
≈w  马雪梅 o李满飞 q云南石仙桃及石斛总生物碱和多糖含量的
分析 q中草药 ot||z ou{k|l }xyt q
≈x  李满飞 o徐国钧 o徐珞珊 o等 q商品石斛的调查及鉴定k µl q
中草药 ot||t ouukwl }tzv q
≈y  刘学平 o汤明辉 o戴 涌 o等 q中药石斛类粉末的显微鉴定研
究 q中国药科大学学报 ot||u ouvkvl }tw{ q
≈z  马国祥 o徐国钧 o徐珞珊 o等 q商品石斛的调查及鉴定k ¶l q
中草药 ot||x ouykzl }vzs q
≈{  马国祥 o徐国钧 o徐珞珊 o等 q中药石斛显微鉴定研究 · q中
国药科大学学报 ot||x ouykvl }tvw q
≈|  ≤«¨ ∏±ªŽ≥ oŽº¤± ‹ ≥ o…∏·° ° ‹ o ·¨¤¯ q°«¤µ°¤¦²ª±²¶·¬¦¤¯ Œ2
§¨ ±·¬©¬¦¤·¬²± ²© „ ° µ¨¬¦¤± ¤±§ ’µ¬¨§·¤¯ Š¬±¶¨±ª • ²²·¶¥¼ Š ±¨²°¬¦
ƒ¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª ˜¶¬±ª „µ¥¬·µ¤µ¬¯¼ °µ¬° §¨ °²¯¼° µ¨¤¶¨ ≤«¬±¤ • ¤¨¦2
·¬²± k„°2°≤ • l q ∞·«±²³«¤µ°¤¦¤¯ ot||w owu }yz q
≈ts  陈林姣 o赖小平 q • „°⁄技术在溪黄草类原植物鉴别中的应
用 q中国中药杂志 ot||{ ouvkyl }vu{ q
≈tt  ’½¨ ®¬≠ o • ¤®¨ ‹ o≠²¶«¬°¤·¶∏Žo ·¨¤¯ q„ • ¤³¬§  ·¨«²§©²µŠ 2¨
±²°¬¦⁄‘„ °µ¨³¤µ¤·¬²± ©µ²° ⁄µ¬¨§ ¤·¨µ¬¤¯¶²© Š ±¨∏¶°¤±¤¬©²µ
• ≤ • „±¤¯¼¶¬¶q‘¤·∏µ¤¯  §¨¬¦¬±¨ ¶ot||y oxsktl }uw q
≈tu  黄璐琦 o王 敏 o周长征 o等 q • „°⁄方法在药材鉴定研究中
的问题及其对策 q药学学报 ot||{ ovvktsl }zz{ q
≈tv  ≠¤±ª ÷ o ±∏¬µ²¶≤ qŒ§¨ ±·¬©¬¦¤·¬²± ¤±§≤ ¤¯¶¶¬©¬¦¤·¬²± ²© ≤¨¯ µ¨¼ ≤∏¯2
·¬√¤µ¶º¬·« • „°⁄ ¤µ®¨ µ¶q ׫¨ ²µ„³³¯¨ Š ±¨¨ ·ot||v o{y }usx q
≈tw  唐启义 o冯明光 q实用统计分析及其计算机处理平台 q北京 }
中国农业出版社 ot||z qtzw q
≈tx  顾其华 o李玲芝 o舒 畅 o等 q用普通琼脂糖代替低熔点胶回
收 ⁄‘„片段 q遗传 ousss ouukul }tsv q
≈ty  吉占和 q中国石斛属的初步研究 q植物分类学报 ot|{s ot{kwl }
wuz q
≈tz  汪小全 o邹喻苹 o张大明 o等 q银杉遗传多样性的 • „°⁄分析 q
中国科学k≤ 辑l ot||y okuyl }wvy q
≈t{  裴颜龙 o邵喻苹 o尹 秦 o等 q矮牡丹和紫斑牡丹 • „°⁄分析
初报 q植物分类学报 ot||x ovvkwl }vxs q
#yww#
第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qz
∏¯ qousst
≈t| 梁红健 o刘 敏 o钟志宇 o等 q中国部分兰花品种 • „°⁄分析 q
园艺学报 ot||y ouvkwl }vyx q
≈us  冯丽春 o杨光伟 o余茂德 o等 q利用 • „°⁄对桑属植物种间亲
缘关系的研究 q中国农业科学 ot||z ovsktl }xu q
Χλυστερ Αναλψσισ οφ ∆ενδροβιυµ βψ Ρ ΑΠ∆ ανδ ∆εσιγν οφ
Σπεχιφιχ Πριµερ φορ ∆ενδροβιυµ χανδιδυµ
 ‹ „‘Š ¬±ªt o ‹ ˜„‘Š ‹∏¤2µ²±ªt oŒ„’ ≥∏2° ¬¨t o Š„’ ¬¤±ª2¼∏±u
kt q≤²¯¯¨ ª¨ ²©¬©¨ ≥¦¬¨±¦¨¶o«¨­¬¤±ª ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o ‹¤±ª½«²∏ vtsstu o«¨­¬¤±ªo≤«¬±¤~
u q÷¬¶«∏¤±ª¥¤±±¤ ×µ²³¬¦¤¯ …²·¤±¬¦¤¯ Š¤µ§¨ ± o≤ „≥ oŽ∏±°¬±ª yxsuuv o≠∏±±¤±o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¤±¤¯¼½¨ ·«¨ ª¨ ±¨ ·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³²© ∆ενδροβιυ µ ¤±§§¨¶¬ª± ¤¶³¨¦¬©¬¦³µ¬° µ¨·²
§¬©©¨ µ¨±·¬¤·¨ ∆ενδροβιυ µ χανδιδυ µ ©¨©¨ ¦·¬√¨¯¼ q Μετηοδ : • ¤±§²° ¤°³¯¬©¬¨§³²¯¼°²µ³«¬¦⁄‘„ k• „°⁄l ·¨¦«2
±¬´∏¨ º¤¶∏¶¨§·²¤±¤¯¼½¨ ·«¨ ª¨ ±¨ ·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¶²©uy ¶³¨¦¬¨¶²© ∆ενδροβιυ µ ¤±§²±¨ ¶³¨¦¬¨¶²© Επηε µεραν2
τηα . ⁄¨ ±§µ²ªµ¤° º¤¶¦²±¶·µ∏¦·¨§¥¼ ˜°Š  „ q „¦¦²µ§¬±ª·²·«¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ²© ⁄‘„ ©µ¤ª° ±¨·¶¨¯¨ ¦·¨§o≥¤±ª²±
t{ ³µ¬° µ¨«¤§¥¨ ±¨ ¬¨·¨±§¨ §©µ²° v. ¬¨·µ¨ °¨·²us ¥³¬± ²µ§¨µ·²©²µ° ¤¶³¨¦¬©¬¦³µ¬° µ¨q Ρεσυλτ ανδ Χονχλυ2
σιον : ׫¬¶³µ¬° µ¨¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·²§¬¶·¬±ª∏¬¶« ∆ενδροβιυ µ χανδιδυ µ ©µ²° ²·«¨µ ∆ενδροβιυ µ ©¨©¨ ¦·¬√¨¯¼ q≥∏¦«¤
·¨¦«±¬´∏¨ ³µ²√¬§¨¶¤ ±¨ º º¤¼ ©²µ·«¨ ¬§¨ ±·¬©¬¦¤·¬²± ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ·µ¤§¬·¬²±¤¯ ° §¨¬¦¬±¨ ¶q
[ Κεψ ωορδσ] ∆ενδροβιυ µ ; ∆ενδροβιυ µ χανδιδυ µ ; • „°⁄~¶³¨¦¬©¬¦³µ¬° µ¨
≈责任编辑 袁桂京 
高效液相法测定八角属部分植物
果实中莽草酸的含量
王晓强 o郭亚健 o杨春澍
k北京中医药大学 中药学院 o北京 tsssu| l
≈摘要  目的 }建立莽草酸含量测定方法 ∀方法 }采用 ‘‹u 键合相硅胶柱 o乙腈2u h ‹v°’wk|xΒxl为移动相 o
检测波长 utv ±° o ‹°≤ 法 ∀结果 }平均回收率为 |{ qx h oΡΣ∆为 t qyz h k ν € xl ∀结论 }适用于含莽草酸药材及
制剂的质量控制 ∀
≈关键词  二极管阵列高效液相色谱法 ~莽草酸 ~八角属
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukusstlsz2swwz2sv
八角茴香和地枫皮为5中国药典6usss年版收
载的品种 o我国为八角属植物的主要分布区≈t  ∀八
≈收稿日期  usss2sz2t{
≈基金项目  国家科委课题 k|y2|st2st2vxl
角属植物果实普遍含有莽草酸 o为莽草酸的丰富资
源之一 ∀现代药理学研究证明 o莽草酸具有较强的
镇痛和抑制血小板聚集作用≈u ∗ w  o但其高效液相色
谱含量测定方法未见文献报道 ∀本文建立八角属植
物果实中莽草酸的高效液相含量测定方法 o测定了
#zww#
第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qz
∏¯ qousst