全 文 ：铁皮石斛及金钗石斛菌根真菌的
分离及其生物活性测定
郭顺星 o曹文芩 o高微微
k中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所 o北京 tsss|wl
≈摘要 目的 }对我国云南 !四川等地采集的野生铁皮石斛 ∆ενδροβιυ µ χανδιδυ µ 和金钗石斛 ∆ . νοβιλε 根中
的内生真菌进行分离并测定其生物活性 ∀方法 }采用平板分离法分离内生真菌 ~所获得真菌分别与铁皮石斛种子 !
铁皮石斛及金钗石斛无菌苗共培养测定其生物活性 ∀结果 }分离获得内生真菌 ux种 o主要属于担子菌 Βασιδιοµ ψ2
χοτινα和半知菌 ∆ευτεροµ ψχοτινα ~生物活性测定结果表明 o其中 x种真菌可促进铁皮石斛种子萌发 ~z种真菌可与铁
皮石斛和金钗石斛幼苗形成共生关系 o但仅有 v种真菌对幼菌有促生作用 ∀结论 }分离和筛选促进石斛生长发育
的适宜菌根真菌 o是菌根技术应用于石斛生产的关键问题之一 ∀
≈关键词 铁皮石斛 ~金钗石斛 ~菌根真菌
≈中图分类号 ≥xyz ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukussslsy2svv{2sw
兰科 Ορχηιδαχεαε 植物是与真菌形成典型共生
关系的特殊类群 o因内外学者对兰科植物内生真菌
进行了大量研究≈t ou o但对铁皮石斛和金钗石斛菌
根真菌的分离 o尤其是菌根真菌对这两种植物的生
物活性报道很少 ∀铁皮石斛及金钗石斛是我国宝贵
的药用植物 o由于自然资源少 o采挖过度 o目前已濒
临灭绝 ~加之组培无菌苗移栽成活率低 o生长缓慢 o
难以规模生产≈v ∀为此 o作者从兰科植物特殊的菌
根关系入手 o先后对这两种兰科药用植物的菌根真
菌进行了分离 o并对其生物活性进行了初步筛选 o现
报道其研究结果 o为全面深入研究菌根真菌对兰科
药用植物的促生机理提供参考 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
供分离菌根真菌的材料 o分别采自四川 !云南 !
福建等地的野生铁皮石斛 ∆ενδροβιυ µ χανδιδυ µ
• ¤¯¯q¨ ¬ ¬±§¯ q和金钗石斛 ∆ . νοβιλε ¬±®¯1 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 菌根真菌分离及分类 内生真菌分离方法
参考有关文献改进≈t ow o野生铁皮石斛 !金钗石斛的
根分别用流水冲洗干净 o并用无菌水充分洗净切成
s qx ∗ t ¦° 小段 os qt h ª≤ u¯ 溶液表面清毒 {
≈收稿日期 t|||2tt2t{
≈资助项目 高等学校全国优秀博士学位论文作者专项基金资
助kt|||xsl
∗ ts °¬±o无菌水冲净消毒液 o再用 zx h乙醇消毒 x
¶o无菌水冲洗后接种于含有 °⁄ 培养基的平皿内 o
ux ε 恒温培养 ∀观察到根内部k皮层l有菌丝长入
培养基时 o及时挑取真菌菌丝顶端并转到另一含有
°⁄培养基的试管或平皿纯化培养 ∀根据菌落的
平皿培养特征 !并利用光学显微镜观察菌丝及产孢
结构 o参考并比较已报道过的兰科植物内生真
菌≈x ∗ ts 对所获得的内生真菌进行分类 !鉴定 o见表
t ∀
1 q2 q2 生物活性测定≈x ≠ 取成熟未裂的铁皮石
斛果实 o表面消毒后将种子分别轻弹于上述 uv种菌
根真菌纯培养的树叶上 owx §时分别统计发芽率 ∀
将菌根真菌分别接种于瓶培的铁皮石斛 !金钗石
斛的无菌苗周围 oxs §时观察苗2菌共培养情况 o见
表 u ∀
2 结果
2 q1 菌根真菌的分离
作者分别在四川 !云南 !福建等地采集野生铁皮
石斛植株 o截取分离根段 tsx个 o其中有 wv个根段
分离到有内生真菌 o占此分离总根数的 ws1|x h ∀
从获得的内生真菌中 o经纯化和初步分类比较 o得到
不同形态特征的菌株 tw个 ∀其中 z种属于担子菌
类 oy种属于半知菌类 ot种未鉴定 ∀金钗石斛截取
根段 {v个 o其中有 us个根段长出菌根真菌 o占所分
离根数的 ux qss h o根据生长和形态特征 o经纯化和
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第 ux卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
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剔除相同菌株 o到内生真菌 tt 种 ∀其中担子菌 v
种 o半知菌 x种 o未鉴定 v种 ∀
2 q2 菌根真菌对铁皮石斛种子萌发的生物活性测
定
用上述 ux种菌根真菌分别培养无菌树叶 o约 us
§o菌丝基本布满树叶 o将铁皮石斛种子轻弹播于染
菌树叶上 ∀培养 wx §时 o测定其种子发芽率 ∀从表
u可以看出 o仅 ⁄≤2v o⁄≤2tv o⁄2u o⁄2y 和 ⁄2z
对铁皮石斛种子萌发有作用 o其中 ⁄2y 和 ⁄≤2tv
对种子萌发较好 o可达 xt qw{ h owu qss h ∀其余菌
株与无菌树叶k对照l相同均对铁皮石斛种子无萌发
作用 ∀
2 q3 菌根真菌对铁皮石斛幼苗生长影响
将 uv种菌根真菌分别接种至瓶培的铁皮石斛
无菌苗中 o培养 xs §时观察 o发现 tu种菌根真菌对
铁皮石斛幼苗有致死作用 o即真菌成了铁皮石斛的
寄生物 ~{种真菌对幼苗无伤害作用 o不形成内生菌
根结构 o菌丝在根围生长 o对幼苗也无促生作用 ~仅
有 ⁄≤2{ o⁄≤2tv和 ⁄2v对铁皮石斛幼苗比对照有
促生长作用 o切片观察也有菌根结构≈tt otu ∀
2 q4 菌根真菌对金钗石斛幼苗生长影响
菌根真菌与金钗石斛幼苗共培养结果显示 o{
种真菌可使金钗石斛苗死亡 o培养 xs §时 o真菌菌
丝布满整个植株 ∀tt种真菌对金钗石斛既无促生
作用 o也无菌根结构 ∀ ⁄2t和 ⁄2{两种真菌对幼
苗生长虽无促生作用 o但解剖发现 o菌丝可侵染至根
的表皮和少量皮层细胞 o幼苗也生长正常 ∀ ⁄2v对
金钗石斛有明显促生长作用 o但菌丝不侵入根细胞 o
仅在根围生长 ∀ ⁄≤2z o⁄≤2{和 ⁄≤2tv既与金钗石斛
的根形成菌根结构 o又对幼苗有促生效果 ∀
3 讨论
虽然几乎所有自然界兰科植物均具菌根结构 o
但并不是兰科植物所有根内均有真菌存在 ∀一般菌
根真菌多存在于较老的根中 ∀从作者分别 w次采集
的铁皮石斛和金钗石斛根的分离情况可以看出 o铁
皮石斛根段上仅有 ws q|x h能分离出菌根真菌 o金
钗石斛为 uw qyy h ∀从我们多年分离兰科菌根真菌
经验分析 o被分离的根段表面必须消毒彻底 o一般
表 t 铁皮石斛和金钗石斛菌根真菌分离
植物名称 分离根段数 长菌段数 菌株数 菌株号 分类
⁄≤2t 柱孢霉属 Χψλινδροχαρπον σπ .
⁄≤2u 枝顶孢霉属 Αχρε µ ονιυ µ σπ .
⁄≤2v 瘤菌根菌属 Επυλορηιζα σπ .
⁄≤2w 瘤菌根菌属 Ε . σπ .
⁄≤2x 蚀丝霉属 Μψχελιοπητηορεαε σπ .
⁄≤2y 头孢霉属 Χεπηαλοσποριυ µ σπ .
铁皮石斛 tsx wv tw ⁄≤2z 头孢霉属 Χεπηαλοσποριυ µ σπ .
∆ενδροβιυ µ ⁄≤2{ 瘤菌根菌属 Επυλορηιζα σπ .
χανδιδυ µ ⁄≤2| 角菌根菌属 Χερατορηιζα σπ .
⁄≤2ts 未鉴定
⁄≤2tt 简梗孢霉属 Χηροµοσποριυ µ σπ .
⁄≤2tu 丝核菌属 Ρηιζοχτοµια σπ .
⁄≤2tv 石斛小菇 Μψχενα δενδροβιι
⁄≤2tw 念珠菌根菌属 Μονιλιοπσισσπ .
⁄2t 丝核菌属 Ρ . σπ .
⁄2u 丝核菌属 Ρ . σπ .
⁄2v 粘帚霉属 Γλοιοχλαδιυ µ σπ .
⁄2w 未鉴定
金钗石斛 {v us tt ⁄2x 未鉴定
∆ . νοβιλε ⁄2y 兰小菇 Μψχενα ορχηιδιχολα
⁄2z 粘帚霉属 Γλιοχλαδιυ µ σπ .
⁄2{ 盘多毛孢属 Πεσταλοτινα σπ .
⁄2| 未鉴定
⁄2ts 念珠菌根菌属 Μονιλιοπσισσπ .
⁄2tt 角菌根菌属 Χερατορηιζα σπ .
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表 u 菌根真菌对石斛种子萌发及幼苗生长的生物活性
菌株 伴播铁皮石斛种子萌发率r h 对铁皮石斛幼苗生长影响 对金钗石斛幼苗生长影响
⁄≤2t 无萌发 幼苗死亡 幼苗正常 o无菌根关系
⁄≤2u 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄≤2v ts qts 形成菌根关系 o无明显促生作用 幼苗正常 o无菌根关系
⁄≤2w 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄≤2x 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄≤2y 无萌发 幼苗正常 o但无菌根关系不促进生长 幼苗正常 o无菌根关系
⁄≤2z 无萌发 幼苗死亡 形成菌根结构 o对幼苗有促生作用
⁄≤2{ 无萌发 形成菌根关系 o有明显促生作用 形成菌根关系 o有明显促生作用
⁄≤2| 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄≤2ts 无萌发 幼苗正常 o不形成菌根关系 o不促进生长 幼苗正常 o无菌根关系
⁄≤2tt 无萌发 幼苗正常 o不形成菌根关系 o不促进生长 幼苗正常 o无菌根关系
⁄≤2tu 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄≤2tv wu qss 形成菌根关系 o有明显促生作用 形成菌根关系 o有明显促生作用
⁄≤2tw 无萌发 幼苗死亡 幼苗正常 o无菌根关系
⁄2t 无萌发 形成菌根关系 o但无明显促生作用 形成菌根关系 o但无促生作用
⁄2u ut q{y 形成菌根关系 o但无明显促生作用 幼苗正常 o无菌根关系
⁄2v 无萌发 形成菌根关系 o有明显促生作用 不形成菌根关系 o但有明显促生作用
⁄2w 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄2x 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄2y xt qw{ 形成菌根关系 o但无促生作用 幼苗正常 o无菌根关系
⁄2z y qss 幼苗正常 o不形成菌根关系 幼苗正常 o无菌根关系
⁄2{ 无萌发 幼苗死亡 形成菌根关系 o但无促生作用
⁄2| 无萌发 幼苗死亡 幼苗死亡
⁄2ts 无萌发 幼苗正常 o不形成菌根结构 幼苗正常 o不形成菌根结构
⁄2tt 无萌发 幼苗正常 o不形成菌根结构 幼苗正常 o不形成菌根结构
对照k≤l 无萌发 幼苗正常 幼苗正常
s qt h升汞消毒 { °¬±以上 o否则很容易得到大量杂
菌 o而非真正的兰科菌根真菌 o后者一般存在于兰根
的皮层部位 ∀本文所提及的对石斛有菌根结构形
成 o即指真菌能侵入石斛根的表皮或皮层细胞内所
形成的菌根结构 ∀
从本文试验结果可以看出 o对铁皮石斛种子萌
发有促进作用的 x种菌根真菌 o并非都对两种石斛
的幼苗生长有促进作用 o即在植物的不同发育阶段
可能需要与不同的真菌共生 ∀一般情况下 o对兰科
植物生长有促进作用的真菌 o往往与该植物形成菌
根关系 o但本试验中的 ⁄2v虽然解剖结果未观察到
与金钗石斛有菌根结构 o但对该植物生长有明显的
促进作用 o其促生作用机理仍待深入研究 ∀
≈参考文献
≈t 郭顺星 o徐锦堂 1 促进石斛等兰科药用植物种子萌发的真菌分
离与培养 1 中草药 ot||s outkyl }vs q
≈u ≤∏µµ¤« ≥ o≥°µ¨¦¬∏∞ o¤°¥¯ ·¨²± ≥ q ¼¦²µµ«¬½¤¯ ƒ∏±ª¬²©
²2
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·ot|{{ oy{ }ttzt q
≈v 郭顺星 o曹文芩 o张集慧 o等 1 铁皮石斛人工种子制作流程及发
芽研究 1 中草药 ot||y ouzkul }tsx q
≈w ∏² ≥«∏±2¬¬±ªoƒ¤± ¬o≤¤² • ±¨2 ¬´± q Μψχενα ανοεχτοχηιλα σπ .
±²√ q ¶²¯¤·¨§ ©µ²° ¤¦²µµ«¬½¤¯ ²²·¶ ²© Ανοεχτοχηιλυσ ροξ2
βυργηιι kµ¦«¬§¤¦¨¤¨ l©µ²° ÷¬¶«∏¤±ª¥¤±±¤²© ≤«¬±¤q ¼¦²¯²ª¬¤o
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≈x ∏² ≥«∏±2¬¬±ªoƒ¤± ¬o≤¤² • ±¨2 ¬´± qΜψχενα δενδροβιι o¤ ¨ º
¼¦²µµ«¬½¤¯ ƒ∏±ª∏¶q ¼¦²¶¼¶·¨°¤ot||| ot{kul }twt q
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热带作物学报 ot||{ ot|kwl }zz q
≈z 范 黎 o郭顺星 o徐锦堂 1 我国部分兰科植物菌根的内生真菌
种类研究 1 山西大学学报 ot||{ outkul }ty| q
≈{ 范 黎 o郭顺星 o肖培根 o等 1 墨兰共生真菌一新种的分离 !培
养 !鉴定及其生物活性 1 真菌学报 ot||y otxkwl }uxt q
≈| ≤∏µ¤« ≥ o¯ ¨° µ¨≤ q ¨¼ ¤±§ ²·¨¶©²µ·«¨ ±¨¨ µ¤²© ƒ∏±ª¬
¼¦²µµ«¬½¤¯ º¬·« µ¦«¬§¶¤±§¤ ¨ º ≥³¨ ¦¬¨¶¬± ·«¨ ±¨∏¶∞³∏2
²¯µ«¬½¤q ³¨·×²··²µ¬ ¼¦²¯ ±¶·ot||u ovs }wv q
≈ts ¬¦«¤µ§¶²± o≤∏µµ¤« ≥ q¤°¥¯ ·¨²± ≥ q
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§²³«¼·¨¶©µ²° ²²·¶²© ¨ ²·µ²³¬¦¤¯ ∞³¬³«¼·¬¦µ¦«¬§¤¦¨¤¨ q¬±§2
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≈tt 郭顺星 o徐锦堂 1 细叶石斛种子同真菌共生萌发中细胞超微
结构研究 1 中草药 ot||s outk{l }u| q
≈tu ¨¯ ° µ¨≤ ⁄o ≤∏·«¥¨µ·¶²± o≤∏µµ¤« ≥ qƒ∏±ª¬¶¶²¦¬¤·¨§ º¬·«
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Ισολατιον ανδ Βιολογιχαλ Αχτιϖιτψ οφ Μψχορρηιζαλ Φυνγι φροµ
∆ενδροβιυµ χανδιδυµ ανδ ∆ . νοβιλε
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¤¯·¨ ·«¨ ªµ²º·«²©¶¨ §¨¯¬±ª¶²©·«¨ ·º² ° §¨¬¦¬±¤¯ ³¯¤±·¶qΧονχλυσιον :¶²¯¤·¬²± ¤±§¶¦µ¨ ±¨¬±ª²©©∏±ª¬«¨ ³¯©∏¯ ·²
·«¨ ªµ²º·«¤±§§¨ √¨¯²³° ±¨·²© ∆ενδροβιυ µ ¬¶¬°³²µ·¤±·¬±·«¨ ³µ²§∏¦·¬²± ²©·«¨ «¨µ¥q
[ Κεψ ωορδσ] ∆ενδροβιυ µ χανδιδυ µ ; ∆ . νοβιλε ; °¼¦²µµ«¬½¤¯ ©∏±ª∏¶
≈责任编辑 王康正
梯度磁场对山药珠芽的苗期生长效应
李艾莲
k中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 o北京 tsss|wl
≈摘要 目的 }探讨磁生物效应对药用植物生长和发育的影响 ∀方法 }采用带有传送装置的梯度磁场对山药
珠芽进行播前处理 o并对珠芽的苗期生长进行评价 ∀结果 }经磁场处理两遍的 o苗期生长最好 o与对照相比 o出苗率
提高 v{ qys h ~平均根长增加 u qyu ¦° o单株发根数提高 { h ∀经统计学 Φ测验 o平均根长 Φ t| q|{ oΦs qsx y q|w o
Φs qst t{ qss ∀结论 }适宜的磁场强度可促进药用植物生长 ∀
≈关键词 山药珠芽 ~梯度磁场
≈中图分类号 ≥xyz ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukussslsy2svwt2sv
生物磁学是研究和应用物质磁性及磁场与生物
关系的一门边缘科学 ∀磁场处理生物材料 o作为获
取磁生物效应的手段 o已被广泛研究和用于农业生
产上 ∀由于具有处理方法简便易行 o效果明显 o与其
它物理因素相比k如射线 !电场等l o无需特殊的防护
≈收稿日期 t|||2s|2s|
材料 o对周围环境无污染 o对人畜无害等独特优点 o
越来越受到各国研究工作者的重视 ∀前苏联农业物
理所研制出一种专供生产上大面积使用的梯度磁场
装置 o先后在前全苏 tt 个不同的土壤气候区域推
广 o遍及 xss多个国营农场和集体农庄 o取得了很显
著的经济效益≈t ∗ v ∀本文作者根据前苏联农业物理
所提供的梯度磁场装置的原理 o自制了一种小型并
#twv#
第 ux卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤ §¨¬¦¤
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