全 文 ：J= 7 8 Hz, H1) , 3 17( 1H , dd, J= 7 8, 9 0 Hz,
H2) , 3 37 ( 1H , m, H3) , 3 28 ( 1H , m, H4) ,
3 42 ( 1H , m, H5) , 3 62 ( 1H , m, H6a) , 3 99
( 1H , m , H6b) , 5 02( 1H , J= 2 4 Hz, H1) , 3 91
( 1H , d, J= 2 4 Hz, H2) , 3 78 ( 2H , d, J =
9 6 Hz, H4) , 3 59( 2H , s, H5)。13 CNMR( 600
MHz, CD3ODd4 ) : 37 2 ( C1 ) , 44 7 ( C2) , 72 9
( C3) , 40 1( C4) , 125 3( C5) , 135 8( C6) , 21 5
( C7) , 43 6( C8) , 210 1( C9) , 28 3( C10) , 27 2
( C11) , 28 6 ( C12 ) , 18 5 ( C13) , 101 3 ( C1) ,
73 7( C2) , 76 7( C3) , 70 4 ( C4) , 75 4( C5) ,
67 3( C6) , 109 5( C1) , 76 7( C2) , 79 1( C3) ,
73 7( C4) , 64 3( C5)。综合数据与文献对照[ 7] ,
鉴定该化合物为 7, 8二氢紫罗兰酮3OD芹糖
( 1 6)OD葡萄糖苷(大血藤苷 E, cuneataside E)。
参考文献:
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LCESIMSn 法鉴定心悦胶囊中西洋参皂苷类成分
杨 ! 琳,缪 ! 宇, 殷惠军,史大卓* ,陈可冀
收稿日期: 20100222
作者简介:杨 ! 琳 ! Email: ylhn 16@126. com
* 通讯作者 ! 史大卓 ! Email: heartmail@ 263 net
(中国中医科学院西苑医院, 北京 ! 100091)
摘! 要:目的 ! 建立 LCMS 法确定心悦胶囊的主要组成成分。方法 ! 采用 LCESIMS 负离子检测模式对心悦胶
囊中的皂苷类成分进行分析,通过与胶囊辅料提取物比较,筛选胶囊的主要成分, 对其进行多级质谱裂解分析。以
对照品及文献数据为对照,通过对各成分的 MS2 谱图和 MS3 谱图的解析对各成分进行指认。结果 ! 从心悦胶囊
中发现包括原人参二醇型、原人参三醇型和奥寇梯木醇型皂苷在内的 18 种人参皂苷类成分, 采用对照品对其中的
人参皂苷 Re( ginseno side Re, GRe)、Rg 1( GRg1 )、拟人参皂苷 F11 ( pseudog insenoside F11 , PF 11 )、人参皂苷 Rg 2 ( G
Rg2 )、人参皂苷 Rc( GRc)、Rb2 ( GRb2 )、Rb3 ( GRb3)、Rd( GRd)、F 2 ( GF2 )、20( S )人参皂苷 Rg 3 [ 20( S)GRg3 ]
等 10 个成分进行了结构确证。结论 ! 所建立的 LCMSn 法可同时对奥寇悌隆型人参皂苷、原人参二醇型和原人
参三醇型人参皂苷进行分析,方法灵敏、快速、简单, 适用于心悦胶囊和西洋参皂苷类成分的分析和结构鉴定。
关键词:西洋参皂苷; 心悦胶囊; LCESIM Sn
中图分类号: R284 1 ! ! ! 文献标识码: A ! ! ! 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 1942 06
Identification of ginsenosides from Panax quinquef olius in Xinyue Capsula by LCESIMSn
YANG Lin, M IAO Yu, YIN Huijun, SH I Dazhuo, CH EN Keji
( X iyuan Hospit al, China Academy o f Chinese Medical Sciences, Beijing 100091, China)
Abstract: Objective ! T o establish an LCMS method fo r ident if ication of the main components in
Xinyue Capsula Methods ! The main components in Xinyue Capsula w ere detected w ith the LCESIMS in
negat ive monitoring mode T hese components w ere further analyzed by LCMS2 and MS3 spect ra, and by
comparing to the corr esponding standar ds and the references, these components w ere elucidated Results !
Eighteen major g insenosides, w hich w ere belonging to protopanaxadio l, pro topanaxat riol, and oco tillo l
type saponin, w ere found in Xinyue Capsula With the corr esponding reference substances, ten of the 18
components w ere domenst rated as g insenoside Re, Rg 1 , pseudog insenoside F 11 , ginseno side Rg2 , Rc,
Rb2 , Rb3 , Rd, F2 , and 20( S )ginsenoside Rg 3 Conclusion ! The LCMSn method established in the pre
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sent study could simultaneously analyze various kinds o f g insenosides, w hich include ocot illol, protopanax
adio l, and pr otopanaxt iol type g insenoside T his method is sensit ive, rapid, and simple for analyzing and
ident ify ing the ginseno sides in Xinyue Capsula and Panax quinquef ol ius
Key words: g insenosides; Xinyue Capsula; LCESIMSn
! ! 心悦胶囊是以西洋参茎叶总皂苷( Panax quin
quef olius saponin, PQS)为原料药的上市中药制
剂,具有益气养阴、和血之功效, 临床用于气阴两虚
冠心病心绞痛患者的治疗, 具有较好的疗效 [ 1]。
PQS是从五加科植物西洋参的茎和叶中提取得到
的皂苷成分,主要为人参皂苷类物质,包括达玛烷型
( dammarane) [又分为原人参二醇型( protopanaxadi
ol)和原人参三醇型( protopanaxat riol ) ]、齐墩果烷
型( o leanane)和奥寇梯木醇型( oco til lol) 3 种类型的
皂苷[ 2] 。虽然已往对西洋参茎叶中提取的皂苷类成
分进行了研究 [ 3] , 但临床常用药心悦胶囊的具体组
成成分和药效物质目前并不清楚。为了深入探讨心
悦胶囊的作用机制, 有必要对其成分进行系统的
研究。
目前关于人参皂苷类成分的分析方法主要有
HPLCDAD [ 4]、H PLCELSD [ 5] 和 LCMS [ 6] 等, 其
中 LCMS 技术集液相的高效分离和质谱的高灵敏
度、定性专属性强的特点,在该领域中尤为多用。在
人参皂苷的 LCMS 分析测定中, A PCI 源[ 7] 和 ESI
源[ 3, 6, 8]是两种常见的离子源, 而以 LCESIMS 正
离子检测模式的报道最多。人参皂苷类尤其是原人
参二醇型和原人参三醇型皂苷在 ESIMS 正离子检
测模式下易同时形成[ M + H ] + 和[ M+ Na] + 峰, 这
就降低了二级质谱分析时母离子的浓度, 在一定程
度上降低分析的灵敏度。本实验采用 LCESIMSn
负离子检测模式,对中成药心悦胶囊中的人参皂苷
类成分进行了系统的分析, 流动相采用乙腈水系
统,获得了较好的分析效果。
1 ! 材料与方法
11 ! 仪器和材料: Finnigan LCQ Classic离子阱液相
色谱质谱联用仪(美国 ThermoFinnigan公司) ,包括
Finnigan SpectraSystem P4000 泵; Xcalibre 2 0 数据
处理系统; MilliporeBiocel超纯水处理系统。
甲醇、乙腈为色谱纯(美国 Fisher 公司) ; 水为
自制超纯水( 18 2 M )。心悦胶囊由吉林益盛药业
股份有限公司提供; 人参皂苷 Rg1、Re和拟人参皂
苷F 11 ( pseudog insenoside F11 )对照品购自中国药品
生物制品检定所, 人参皂苷 Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg 3、
Rg2、F2 购自天津一方科技有限公司,质量分数均大
于 98%。
1 2 ! 样品制备
1 2 1 ! 供试品溶液的制备:取心悦胶囊 3粒,取内
容物混匀。精密称取内容物 300 0 mg(相当于 1粒
胶囊内容物的量) , 加甲醇 15 mL, 密封, 室温浸泡
15 m in,超声提取 30 m in后,离心( 10 000 r/ min) 6
m in,分取上清液。精密吸取该上清液 10 !L, 置 10
mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 取适量, 离心
( 10 000 r/ min) 6 min, 上清液作为供试品溶液。
1 2 2 ! 空白对照溶液的制备:精密称取心悦胶囊辅
料 241 2 mg(相当于 1粒胶囊的辅料量) , 加甲醇 15
mL,按∃ 1 2 1%项下方法操作,得空白对照溶液。
1 2 3 ! 人参皂苷混合对照品溶液的制备:分别精密
称取人参皂苷 Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg 2、Rg3、
F 2和拟人参皂苷 F11适量, 加甲醇制成 200 !g/ mL
的对照品溶液,分别精密吸取各对照品溶液 25 !L,
置 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 取适量, 离
心( 10 000 r/ min) 6 m in, 上清液作为人参皂苷混合
对照品溶液 (相当于各对照品的质量浓度为 500
ng/ mL)。
1 3 ! 色谱与质谱条件
1 3 1 ! 液相色谱条件: 色谱柱为 Water s symme
t ry
C18 ( 100 mm & 2 1 mm, 3 5 !m) ;流动相为 A:
乙腈, B: 20% 乙腈水, 梯度洗脱程序: 0 ~ 4 min。
0~ 13% A; 3~ 14 min, 13% ~ 15% A; 14~ 24 min,
15%~ 30% A; 24~ 27 m in, 30% ~ 31% A; 27~ 37
m in, 31% ~ 42% A; 37 ~ 50 min, 42% ~ 88% A;
50~ 60 m in, 88% A。体积流量: 0 3 mL/ min; 柱
温:室温;进样量: 10 !L。
1 3 2 ! 质谱条件: ESI 源, 负离子检测模式。扫描
范围: m/ z 300~ 2 000。离子阱条件为喷雾电压: 3 5
kV; 壳气 ( N 2 ) : 4 137 & 105 Pa; 辅助气 ( He ) :
6 895 & 104 Pa; 离子传输管温度: 250 ∋ ; 离子传输
管电压: - 35 V; 套管镜头电压: - 15 V。
2 ! 结果
电喷雾电离 ( ESI)属于软电离, 人参皂苷类成
分在 ESI 源作用下,不发生结构裂解而给出准分子
离子峰,从而得到化合物相应的相对分子质量信息。
ESIMSn 能够得到化合物的多级裂解质谱, 为化合
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物的结构解析提供丰富的信息。人参皂苷类成分的
多级质谱裂解规律表明, 在碰撞能的作用下, 人参皂
苷主要发生糖苷键的断裂, 质谱给出失去一个或多
个糖的次级苷和苷元的碎片离子。西洋参中的皂苷
类成分依据其母核的不同, 裂解形成的皂苷元主要
为原人参二醇、原人参三醇和奥寇梯木醇, 在 ESI
(负离子)检测模式下分别给出m/ z 459、475和 491
的特征苷元碎片离子, 这些离子可以作为皂苷类型
鉴定的有利证据。图 1分别给出了人参皂苷 Rd(原
人参二醇型)、Re(原人参三醇型)和拟人参皂苷 F 11
(奥寇悌隆型)的 MS 谱图。
m/ z
图 1 ! 人参皂苷 Rd(A) ,人参皂苷 Re( B)和拟人参皂苷
F11 ( C)的负离子质谱
Fig 1 ! Negative ion mass spectra of ginsenoside Rd ( A) ,
ginsenoside Re ( B) , and pseudoginesenoside F11( C)
2 1 ! 样品的 LCMS 分析: 取∃ 1 2 样品制备%项下
的空白、供试品及对照品溶液,按照上述液相和质谱
条件分别进行 LCMS 分析, 得到各样品的总离子
流色谱图( T IC) , 见图 2。与空白对照溶液相比, 心
悦胶囊供试品溶液的 TIC谱图中出现了 16个明显
的色谱峰,按照出峰的先后顺序将其标示为 1~ 16,
保留时间见表 1。在 TIC 中, 谱峰 1 给出m/ z 945
和 799 的[ M - H ] - 准分子离子峰, 谱峰 12 给出
m/ z 765、783的[ M - H ] - 准分子离子峰, 谱峰 2~
11和 13 ~ 16 依次给出m/ z 799、783、783、1 077、
1 077、1 077、945、915、915、765、783、783、765 和
765的[ M - H ] - 准分子离子峰。初步推断心悦胶
囊中含有 18个主要单体成分。
t/ min
图 2 ! 空白( A) , 心悦胶囊(B)和人参皂苷对照品混合物
( C)在负离子模式下的总离子流色谱图
Fig 2! Total ion current chromatograms in negative
from blank ( A) , Xinyue Capsula ( B) , and
ginsenoside references mixture ( C)
22 ! 样品的 LCMS2 及 LCMS3 分析:为了确定各化
合物的结构,对各准分子离子进行了 MS2 ,甚至MS3 裂
解分析,表 1中列出了各化合物MS2 碎片离子。
保留时间为 5 27 min的谱峰1,给出[ M - H ] -
为m/ z 945 和 799的准分子离子峰,表明谱峰 1可
能包含 2个化合物。对m/ z 945的 [ M- H ] - 准分
子离子进行 MS 裂解分析, 质谱给出了m/ z 799、
783、765、637、619、475 的碎片离子; m/ z 799 为母
离子m/ z 945失去 1个脱水的鼠李糖基产生的碎片
离子[ M - ( Rha- H 2O) - H ] - , m/ z 783 为m/ z
945失去 1 个脱水的葡萄糖基得到的碎片离子
[ M - ( Glc- H 2O) - H ] - , m/ z 765为母离子失去 1
个脱水的葡萄糖基后再失去 1个水得到的碎片离子
[ M - ( GlcH 2O) - H 2O- H] - , m/ z 637 为母离子
失去 1个脱水的鼠李糖基和 1个脱水的葡萄糖基产
生的碎片离子[ M - ( Rha- H 2O) - ( Glc- H 2O)
H]
-
, m/ z 619对应于母离子失去 1个脱水的鼠李
糖基和 1个脱水的葡萄糖基后再失去 1个水产生的
碎片离子 [ M - ( Rha- H 2O ) - ( Glc- H 2 O ) -
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表 1 ! 化合物 1~ 16 在 ESI负离子检测模式中的 MS光谱数据
Table 1! MS Spectra data of compounds 1- 16 in ESI negative ion monitoring mode
编号 tR/ m in 化合物 [ M- H ] - ( m/ z ) MS2 ( m/ z) ( % )
1 5 27 人参皂苷 Re 945 945( 8) , 799( 96) , 783( 100) , 765( 32) , 637( 94) , 619( 20) , 475( 38)
人参皂苷 Rg1 799 799( 28) , 637( 100) , 475( 18)
2 8 74 拟人参皂苷 F11 799 799( 18) , 653( 100) , 635( 38) , 491( 22)
3 11 21 GRg2 783 783( 18) , 637( 100) , 619( 34) , 475( 70)
4 11 81 GRg2 异构体 783 783( 28) , 637( 100) , 619( 28) , 475( 64)
5 12 37 GRc 1 077 945( 100) , 915( 70)
6 14 38 Rb2 1 077 1 077( 60) , 945( 100) , 915( 96) , 783( 68) , 765( 20)
7 15 20 Rb3 1 077 1 077( 22) , 945( 100) , 915( 32) , 783( 66) , 765( 14) , 621( 6) , 603( 4) , 459( 6)
8 18 23 GRd 945 945( 14) , 783( 100) , 765( 6) , 621( 20) , 459( 6)
9 22 61 gypenoside IX 915 915( 22) , 783( 100) , 765( 4) , 753( 8) , 621( 24) , 603( 2) , 459( 4)
10 23 02 gypenoside IX is om er 915 915( 2) , 783( 100) , 765( 2) , 753( 2) , 621( 32) , 459( 4)
11 24 62 GRg6 765 765( 10) , 619( 100) , 601( 32) , 457( 2)
12 24 99 GRg6 异构体 765 765( 6) , 619( 100) , 601( 24)
GF2 783 783( 10) , 621( 100) , 459( 26)
13 27 73 GRg3 783 783( 24) , 621( 100) , 459( 38)
14 28 36 GRg3 异构体 783 783( 24) , 621( 100) , 459( 44)
15 35 88 Rk1 765 765( 22) , 603( 100)
16 36 61 Rg5 765 765( 22) , 603( 100)
H 2O- H] - , m/ z 475对应于 m/ z 945 失去 1个脱
水的鼠李糖基和 2个脱水的葡萄糖基后生成的碎片
离子[ M - ( Rha- H 2O ) - 2( Glc- H 2O) - H ] - ,
m/ z 475碎片离子的产生说明该人参皂苷为原人参
三醇型皂苷。综合上述分析, m/ z 945 的[ M- H ] -
峰代表相对分子质量为 946、结构中含有 1 个鼠李
糖和 2个葡萄糖的原人参三醇型皂苷, 这与文献报
道的人参皂苷 Re的质谱数据相同[ 78] 。经与人参皂
苷Re对照品质谱图(图 1B)及 LC保留时间(图 2C)
比较,确定该化合物为人参皂苷 Re( GRe)。
对谱峰 1中[ M- H ] - 为m/ z 799的准分子离子
进行 MS2 裂解分析,质谱给出了m/ z 637、475的碎片
离子峰,分别对应于[ M- ( Glc- H 2O) - H ] - 和[ M-
2( Glc- H2O)- H] - ,说明该化合物为原人参三醇型
皂苷,结构中含有 2个葡萄糖,这与人参皂苷 Rg1的
结构相符[ 78]。采用人参皂苷 Rg1 对照品在相同条件
下进行分析,结果与该化合物的 LC保留时间及质谱
数据一致,故鉴定该化合物为人参皂苷 Rg1 ( GRg1 )。
保留时间为 8 74 min, [ M - H ] - 准分子离子
为m/ z 799 的谱峰 2, M S 谱图给出m/ z 653、635、
491的碎片离子, 分别对应于[ M - ( Rha- H 2O) -
H ] - 、[ M - ( Rha- H 2O) - H 2O - H ] - 和 [ M -
( Rha- H 2O) - ( Glc- H 2O) - H ] - , 说明化合物结
构中含有 1个鼠李糖和 1 个葡萄糖, 而m/ z 491 碎
片的生成说明该化合物为奥寇梯木醇型皂苷。经与
拟人参皂苷F 11对照品质谱图(图 2C)及 LC 保留时
间比较,确定该化合物为拟人参皂苷 F11 ( PF 11 )。
保留时间为 11 21和 11 81 m in 的谱峰 3和 4
均给出m/ z 783的[ M - H ] - 峰, M S 谱图也均给出
m/ z 637、619和 475的碎片离子, 见表 1, 说明谱峰
3和 4代表的化合物互为同分异构体。m/ z 637的
碎片离子为母离子m/ z 783失去 1个脱水的鼠李糖
基产生的碎片离子,该离子进一步脱去 1个 H 2O后
产生m/ z 619的碎片离子。m/ z 475的碎片离子为
母离子m/ z 783失去 1个脱水的鼠李糖基和 1 个脱
水的葡萄糖基产生的碎片离子, 该离子的产生说明
谱峰 3和 4代表的化合物均为原人参三醇型皂苷。
综上所述,谱峰 3和 4代表相对分子质量为 784、结
构中含有 1个鼠李糖和 1个葡萄糖的原人参三醇型
皂苷。查阅相关文献, 迄今为止,从西洋参(包含根、
茎、叶、花、果实)中发现的人参皂苷类化合物相对分
子质量为 784的仅有 4种, 分别为人参皂苷 Rg2、G
F 2、20( S)Rg 3 和 20( R )Rg3 [ 910] , 后 3者均属于原
人参二醇型皂苷, 仅有人参皂苷 Rg2 属于原人参三
醇型皂苷,且结构中含有 1个葡萄糖和 1个鼠李糖。
采用人参皂苷 Rg2 对照品进行分析比较, 结果 G
Rg2 的 LC 保留时间及质谱数据与谱峰 3 一致, 故
鉴定谱峰 3为人参皂苷 Rg2 ( GRg2 )。谱峰 4与谱
峰 3的 MS 谱图极为相似, 且 LC 保留时间非常接
近,无法完全分离, 与文献 [ 11]比较,初步推测谱峰 4
为人参皂苷 Rg2 的异构体 20( R)g insenoside Rg2
( GRg2 isomer) ,结构有待于进一步确证。
保留时间为 12 37、14 38和 15 20 m in 的谱峰
5、6和 7,均给出m/ z 1 077的[ M - H ] - 峰, 是互为
同分异构体的 3个化合物。谱峰 5的 MS谱图中碎
片离子信号强度非常低, 仅给出m/ z 945 和 915的
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碎片离子, 未能得到苷元的离子信息。m/ z 945 为
母离子失去 1个脱水的五碳糖基( Ara 或 Xyl)后生
成的碎片离子, m/ z 915 为母离子失去 1 个脱水的
葡萄糖基所得到的碎片离子, 数据说明该化合物分
子中至少含有 1个五碳糖和 1个葡萄糖。谱峰 6的
MS
2 谱图给出m/ z 945、915、783和 765,分别对应
于碎片离子[ M - ( Ar a/ Xyl- H2O) - H ] - 、[ M -
( Glc- H 2O) - H ] - 、[ M - ( Ara/ Xyl - H 2O ) -
( Glc- H2O) - H ] - 和 [ M - ( Ara/ Xyl - H2O) -
( Glc- H2O) - H 2O- H] - ,说明该化合物是相对分
子质量为1 078,结构中含有 1个五碳糖和至少 1个
葡萄糖的皂苷,但 MS谱图未能得到苷元信息。谱
峰 7的 MS2 谱图给出m/ z 945、915、783、765、621、
603和 459,分别对应于碎片离子[ M - ( Ara/ Xyl-
H 2O) - H ] - 、[ M - ( Glc- H 2O ) - H ] - 、[ M -
( Ara/ Xyl- H 2O) - ( Glc- H 2O) - H ] - , [ M -
( Ara/ Xyl- H 2O ) - ( Glc- H2O) - H 2O - H] - ,
[ M- ( Ara/ Xyl- H 2O) - 2( Glc- H2O) - H ] - 、[ M
- ( Ar a/ Xyl- H 2O) - 2( Glc- H 2O) - H 2O - H ] -
和[ M - ( Ara/ Xy l- H 2O) - 3( Glc- H 2O) - H ] - ,
m/ z 459的苷元离子碎片的生成, 说明该化合物为
原人参二醇型皂苷, 谱峰 7 代表相对分子质量为
1 078、结构中含有 1个五碳糖和 3 个葡萄糖的原人
参二醇型皂苷。虽然谱峰 5、6和 7 的质谱数据相
似,但由于它们的 LC保留时间不同,它们的极性不
同。与文献比较[ 3, 7] ,推测谱峰 5、6和 7分别为人参
皂苷 Rc、Rb2 和 Rb3。采用人参皂苷 Rc、Rb2 和
Rb3 对照品相同条件下进行分析(见图 2C) , 数据
与推测结果一致。谱峰 5、6和 7 分别为人参皂苷
Rc( GRc)、Rb2 ( GRb2 )和 Rb3 ( GRb3 )。
保留时间为 18 23 m in 的谱峰 8, 准分子离子
峰[ M - H ] - 为m/ z 945, M S 谱图给出m/ z 783、
765、621和 459 的碎片离子, 分别对应于碎片离子
[ M- ( Glc- H2O) - H ] - 、[ M - ( Glc- H 2O) -
H 2O- H] - 、[ M - 2( Glc- H 2O) - H ] - 和 [ M - 3
( Glc- H 2O) - H ] - ,说明该化合物为相对分子质量
为946,结构中含有3个葡萄糖的原人参二醇型皂苷。
经与文献比较[ 7] ,推测其为人参皂苷 Rd。采用 Rd对
照品对照, 质谱数据及 LC保留时间与该化合物一
致,鉴定谱峰 8为人参皂苷 Rd( ginsenoside Rd)。
保留时间为 22 61和 23 02 m in 的谱峰 9 和
10, LCMS谱图给出m/ z 915 的[ M - H ] - 峰, MS
谱图均给出m/ z 783、765、753、621、603和 459的碎
片离子,分别对应于母离子失去 1个脱水的五碳糖
基、失去 1个脱水的五碳糖基和 1个水、失去 1个脱
水的葡萄糖、失去 1 个脱水的五碳糖和 1 个脱水的
葡萄糖、失去 1个脱水的五碳糖和 1 个脱水的葡萄
糖后再失去 1个水、失去 1个脱水的五碳糖和 2个
脱水的葡萄糖基产生的碎片离子, 说明它们均为结
构中含有 1个五碳糖和 2个葡萄糖的原人参二醇型
皂苷。经与文献对照[ 12] ,推测谱峰 9和 10为 gype
noside IX和 gypenoside IX的异构体。
保留时间为 24 62 min的谱峰 11, LCMS 谱图
给出m/ z 765的[ M - H ] - 峰。谱峰 11的 MS谱图
给出m/ z 619、601 和 457的碎片离子, 分别对应于
碎片离子[ M - ( Rha- H 2O) - H ] - 、[ M - ( Rha-
H 2O) - H 2O- H] - 、[ M - ( Rha- H 2O) - ( Glc-
H 2O) - H ] - ,说明化合物结构中含有1个鼠李糖和
1个葡萄糖, m/ z 457的碎片离子的产生, 说明该化
合物的母核比原人参二醇多 1个不饱和度。为了进
一步确证母核的碎片离子, 对二级质谱中产生的
m/ z 619[ M - ( Rha- H 2O) - H ]
- 进行了 MS3 裂
解分析,并证实m/ z 619 进一步裂解后的子离子为
m/ z 457。综合目前关于西洋参的化学成分研究结
果,推测该化合物为人参皂苷 Rg6 ( GRg6 ) [ 8, 13] 。
保留时间为 24 99 min的谱峰 12, LCMS 谱图
给出m/ z 765和 783的[ M - H ] - 峰,该谱峰中包含
2个未分开的化合物。对m/ z 765的准分子离子进
行二级 MS分析, 结果 MS谱图给出m/ z 619和 601
的碎片离子,质谱数据与 GRg6 相似, 以m/ z 619为
二级母离子对其进行 MS3 裂解分析, 但未得到满意
的子离子碎片。与文献对照[ 11] , 推测谱峰 12为 G
Rg6 的同分异构体( GRg6 isomer ) , 结构有待于进
一步确定。
对谱峰 12中[ M - H ] - 为m/ z 783的化合物进
行 MS2 分析, 在碰撞能的作用下, m/ z 783 给出了
m/ z 621[ M - ( Glc- H 2O) - H ] - 和m/ z 459[ M - 2
( Glc- H 2O) - H ] - 碎片离子,说明该化合物为结构
中含有 2个葡萄糖的原人参二醇型皂苷。目前关于
西洋参化学成分的研究表明 [ 89] ,符合该质谱裂解规
律的人参皂苷有 20( S)Rg3、20( R)Rg3 和 GF 2 3
种,但这 3种成分的极性不同,人参皂苷 F2 的极性
较小[ 9] ,通过分析比较, 初步推测谱峰 12中m/ z 783
的化合物可能为人参皂苷 F 2。采用人参皂苷 F2 对
照品在相同条件下进行分析, 结果表明 GF2 与该
化合物的 LC 保留时间及质谱数据一致, 鉴定该化
合物为人参皂苷 F2 ( GF 2 )。
保留时间为 27 73和 28 36 min 的谱峰 13和
#1946# 中草药! Chinese Traditional and Herbal Drugs! 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
14,准分子离子[ M - H ] - 均为m/ z 783, 相应的 MS
谱图均给出m/ z 621 [ M - ( Glc- H 2O) - H ] - 和
459[ M - 2( Glc- H 2O) - H ] - 碎片离子, 质谱裂解
规律均与 GF 2相同, 经与文献比较[ 7, 8 , 14] ,推测这两
个化合物分别为 20( S)GRg3 和20( R)GRg3。采
用 20( S)GRg3 对照品进行比较, 20( S )GRg3 与
谱峰 13 代表的化合物的 LC 保留时间及 MS 谱图
数据一致,故鉴定 13 为 20( S )GRg3。谱峰 14 为
其异构体 20( R)GGg3。
保留时间为 35 88 和 36 61 min 的谱峰 15 和
16均给出m/ z 765的[ M - H ] - 准分子离子, 它们
的 MS2 谱图均仅给出m/ z 603[ M- ( Glc- H 2O) -
H ]
- 碎片离子,说明化合物结构中均含有 1个葡萄
糖, 与文献[ 11] 对照, 初步推测其分别为人参皂苷
Rk1 ( GRk1 )和 Rg5 ( GRg5 )。由于化合物在样品中
的量较低,未能得到满意的 MS3 谱图数据, 这两个
化合物的结构有待于进一步的确定。
3 ! 讨论
本实验首次采用 LCMSn 联用技术分析了中成
药心悦胶囊中主要的皂苷类成分。通过与胶囊辅料
提取物的总离子流谱图比较, 发现了胶囊提取物中
的 18个主要的皂苷类成分,与文献报道的质谱数据
和液相保留时间比较, 将其依次鉴定为 GRe、G
Rg1、PF11、GRg 2、GRg2 isomer、GRc、GRb2、G
Rb3、GRd、gypeno side IX、gypenoside IX isomer、
GRg6、GRg6 isomer、GF2、20( S )GRg 3、20 ( R)
GRg3、GRk1 和 GRg5 , 并采用 GRe、GRg1、PF 11
等 10个对照品对相应的成分进行了确证。本实验
发现的这 18个皂苷类成分为心悦胶囊的主要组成
成分。
心悦胶囊中的皂苷类成分以原人参二醇型皂苷
居多,包括 GRd、GRb2、GRb3、GRg3、GRg3 iso
mer、GF2、gypenoside IX和 gypenoside IX isomer,
而 GRd、GRb3、GRb2和奥寇梯木醇型皂苷 PF 11
在胶囊中的量相对较高, 推测它们为心悦胶囊的主
要药效物质。人参皂苷 Rb1 在胶囊中的量相对较
少,未能给出理想的 LCMS 及 MS2 谱图,这与文献
报道的∃ GRb1 在西洋参茎、叶中的含量低%的结果
一致[ 4]。
本研究建立了心悦胶囊中主要皂苷类成分的快
速、准确的 LCMSn 分析方法,首次阐明了胶囊中的
主要皂苷类成分的结构, 为心悦胶囊的药效物质基
础研究提供了科学依据。
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