全 文 ：·制剂与质量·
薄膜-超声分散法制备 Β-榄香烯固体脂质纳米粒①
刘红梅, 褚惠媛3 , 崔金霞3 , 吴琳华
(哈尔滨医科大学附属第二医院 药学部, 黑龙江 哈尔滨　150086)
摘　要: 目的　制备 Β2榄香烯固体脂质纳米粒, 并对其粒径和包封率进行考察。方法　采用薄膜2超声分散法制备,
并以包封率为指标采用正交设计法优化 Β2榄香烯固体脂质纳米粒的制备工艺。结果　所得 Β2榄香烯固体脂质纳米
粒的最佳制备条件是 Β2榄香烯 20 ΛL , 卵磷脂 90 m g, 硬脂酸 90 m g, 215% 聚山梨酯 80 5 mL , 215% 泊洛沙姆 188
5 mL。结论　该处方可用于 Β2榄香烯固体脂质纳米粒的制备, 工艺可行。
关键词: Β2榄香烯固体脂质纳米粒; 薄膜2超声分散法; 制备
中图分类号: R 28412; R 286102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0193- 03
Prepara tion of Β-elem ene sol id l ip id nanoparticles by f ilm -ultra son ic
wave d issolv ing techn iques
L IU Hong2m ei, CHU H u i2yuan, CU I J in2x ia, W U L in2hua
(D epartm ent of Pharm acy, the Second A ffilia ted Ho sp ita l of H arb in M edical U niversity, H arb in 150086, Ch ina)
Abstract: Objective　To p repare Β2elem ene so lid lip id nanopart icles and invest iga te their part icle size
diam eter and en trapm en t eff iciency1 M ethods　T he Β2elem ene so lid lip id nanopart icles w ere p repared by
film u lt rason ic w ave disso lving techn iques1 A nd the op t im um fo rm u la w as selected th rough o rthogonal de2
sign test acco rd ing to the en trapm en t eff iciency1 Results　T he op t im izing techn ique w as Β2elem ene (20ΛL ) , stearic acid (90 m g) , lecith in (90 m g) , Tw een80 (2. 5 % , 5 mL ) and Po loxam er 188 (2. 5 % , 5
mL ). Conclusion　T he techn ique of p reparing Β2elem ene by film 2u lt rason ic w ave disso lving techn ique is
feasib le.
Key words: Β2elem ene so lid lip id nanopart icles; f ilm 2u lt rason ic w ave disso lving techn ique; p reparing
　　Β2榄香烯是从姜科植物温莪术的根茎中分离提
取的倍半萜烯类化合物, 具有抗肿瘤和提高机体免
疫力的作用[1 ] , 同时还具有抗菌、抗病毒、活血祛瘀、
改善微循环等作用[2 ]。目前临床上多采用 Β2榄香烯
注射剂、乳注射剂、冻干粉、气雾剂应用于宫颈癌和
肝癌的治疗, 在抑制瘤体增殖、改善临床症状、提高
生存质量、防止复发转移以及提高机体免疫功能均
有明显的效果[3 ]。但现有的制剂都具有药物用量较
多, 不良反应较大等缺点, 尤其是注射剂在使用时刺
激血管给病人带来不便。将 Β2榄香烯制备成固体脂
质纳米粒, 不仅能减少用药量, 降低刺激性和不良反
应, 还能改变药物在体内器官的分布, 选择性治疗癌
症, 而且便于保存和使用。因此本实验以硬脂酸为载
体, 以包封率为评价指标, 采用单因素试验初选, 再
以正交试验法优选各因素的条件, 确定了薄膜2超声
法制备 Β2榄香烯固体脂质纳米粒的制备工艺。 1　仪器与材料　　W aters 高效液相色谱仪 (M illenn inum 32 色谱管理系统, 510 泵, U 6K 手动进样器, 486 紫外检测器) ; JEM - 1220 电子显微镜 (日立电子) ; Zetasizer激光粒径分析仪 (M alvern 公司) ; KQ 3200E 医用超声波清洗器。　　Β2榄香烯对照品 (大连远大制药有限公司, 质量分数为 9912% , 批号 040308 ) , 泊洛沙姆 188(Po loxam er 188, BA SF 公司) , 聚山梨酯 80 (长沙市有机试剂厂) , 蛋黄卵磷脂 (北京奥博星生物技术责任有限公司) , 硬脂酸 (分析纯, 沈阳新西试剂厂) , 二氯甲烷 (天津市和密欧化学试剂开发中心) , 乙腈 (色谱纯, 山东禹王实业有限公司禹城化工厂) , 无水乙醇 (天津市东丽区天大化学试剂开发中心) , 水为超纯水。2　方法与结果
·391·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 20072062033 哈尔滨医科大学药学院 2001 级临床药学专业实习生
211　Β2榄香烯固体脂质纳米粒的制备[4 ]: 将一定比
例的卵磷脂和硬脂酸溶于二氯甲烷内, 置于旋转蒸
发器中, 减压回收二氯甲烷成膜。另取 10 mL 聚山
梨酯 80 与泊洛沙姆 188 的混合溶液, 置于成膜的
梨形烧瓶中, 旋转将膜洗下, 加入适量 Β2榄香烯, 超
声处理 50 m in。超声后的溶液置 4 ℃冰箱中保存。
212　Β2榄香烯的H PL C 法测定[5 ]
21211　色谱条件: 色谱柱为OD S C18 (200 mm ×
416 mm , 5 Λm ) , 柱温为 30 ℃, 流动相为乙腈2水
(88∶12) , 检测波长为 210 nm , 体积流量为 1 mL ö
m in, 进样量为 20 ΛL。
21212　标准曲线的制备: 精密称取 Β2榄香烯对照品
9814 m g, 置 10 mL 量瓶中, 加无水乙醇至刻度, 摇
匀, 得 9184 m gömL 对照品储备液。精密吸取Β2榄香
烯对照品储备液 5、10、20、30、40、50、60 ΛL 分别置
10 mL 量瓶中, 加无水乙醇至刻度, 混匀, 进样, 测定
峰面积。以峰面积 (A )为纵坐标, 质量浓度 (C ) 为横
坐标进行回归分析, 得线性方程 A = 15 391C -
25516, r= 01999 4。结果表明 Β2榄香烯在 510～ 6010ΛgömL 与峰面积呈良好的线性关系。
21213　回收率的测定: 取不含 Β2榄香烯的空白固体
脂质纳米粒用注射器注入离心管中, 取 Q u ick
sealed 封口器将管口封死, 50 000 röm in 离心 30
m in。精密吸取上清液, 用水稀释 50 倍, 取上清液用
0122 Λm 微孔滤膜滤过, 取续滤液进行测定。根据测
得的 Β2榄香烯的量与加入Β2榄香烯总量的比值计算
回收率。结果低、中、高 3 个质量浓度的回收率分别
是 9312%、10417%、10618% (n= 5) , 平均回收率为
10116%。可见辅料对测定没有干扰, 且该方法的重
现性好。
213　包封率的测定: 将制备好的 Β2榄香烯固体脂质
纳米粒用注射器注入离心管中, 取Q u ick sealed 封
口器将管口封死, 50 000 röm in 离心 30 m in。取上清
液, 用水稀释 50 倍, 取上清液, 进样测定, 计算滤液
中游离 Β2榄香烯的质量, 计算包封率。
　　包封率= (C总- C测) öC总×100%
　　C测 为上清液中测得的药物量, C总 为加入的药物量。
214　处方筛选: 以粒径、包封率为指标, 对 Β2榄香烯
的用量、硬脂酸与卵磷脂的比例用量、超声时间、加
药方式、215% 聚山梨酯 80 和泊洛沙姆 188 的比例
用量进行单因素试验考察。除考察的因素外, 保持其
他条件不变, 测定包封率。结果显示: 超声时间的长
短不同造成其包封后粒径大小不同, 超声时间长则
粒径小, 时间短则粒径大, 但超声时间超过 50 m in
对其影响粒径不大, 故将时间定为 50 m in; 药物的
性质不同可能对固体脂质纳米粒的物理性质产生不
同的影响, 试验分别考察了将药物加入有机溶剂中
成膜后再超声制备固体脂质纳米粒和将药物制备成
空白固体脂质纳米粒后再加药物超声制备方法进行
比较, 后者的包封率优于前者。而对 Β2榄香烯的用
量、硬脂酸与卵磷脂的比例用量、215% 聚山梨酯 80
和泊洛沙姆 188 的比例用量都对其包封率有不同
程度的影响。
　　根据单因素考察结果, 选取影响 Β2榄香烯固体
脂质纳米粒的加药量 (A )、磷脂和硬脂酸的比例 (B )
和 215% 聚山梨酯 80 与 215% 泊洛沙姆 188 的比例
(C) 3 个因素为主要影响因素, 每个因素选 3 个水
平, 并选用L 9 (34)正交表进行正交试验设计, 因素与
水平见表 1。
表 1　因素与水平
Table 1　Factors and levels
水平
因　素
A öΛL Bö(m g·m g- 1) Cö(mL ·mL - 1)
1 20 　　　120∶60 715∶215
2 30 90∶90 510∶510
3 40 60∶120 215∶715
表 2　正交试验结果
Table 2　Results of orthogonal test
试验号 A B C 空白 包封率ö%
1 　1 　1 　1 　1 53160
2 1 2 2 2 69132
3 1 3 3 3 62151
4 2 1 2 3 66166
5 2 2 3 1 69160
6 2 3 1 2 65121
7 3 1 3 2 70150
8 3 2 1 3 59100
9 3 3 2 1 67180
K 1 185143 190176 177181 191100
K 2 201147 197192 203178 205103
K 3 19713 195152 202161 188117
k1 61181 63159 59127 63167
k2 67116 65197 67193 68143
k3 65177 65117 67154 62172
R 5135 2138 8166 5171
　　由极差R 可知影响因素的主次顺序为C> A >
B , 即 215% 聚山梨酯 80 与 215% 泊洛沙姆 188 用量
比为主要影响因素, 其次为Β2榄香烯的加药量, 然后
是卵磷脂和硬脂酸用量比。3 个因素对包封率的影
响都不大, 没有统计学意义。所以根据外观和包封率
来选择A 1B 2C 2 为最佳条件。
215　优化条件下制备的 Β2榄香烯固体脂质纳米粒
的理化性质
·491· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
21511　形态及粒度分布的测定: 取 Β2榄香烯固体脂
质纳米粒溶液适量, 加入一定量的重蒸水稀释, 混
匀。用覆有支持膜的铜网蘸取, 停留 2～ 3 m in, 浸入
磷钨酸溶液中, 染色 2～ 3 m in, 自然干燥, 用透射电
镜观察。结果表明 Β2榄香固体脂质纳米粒大小均匀
呈规则球形, 其形态见图 1。另取 Β2榄香烯固体脂质
纳米粒稀释后, 于粒径测定仪上进行测定, 其粒度分
布见图 2。
图 1　Β-榄香烯固体脂质纳米粒的透射电镜图
F ig11　Tran sm ission EM photograph of Β-elemene
sol id l ip id nanoparticles
粒径önm
图 2　Β-榄香烯固体脂质纳米粒的粒度分布图
F ig12　Particle size d istr ibution of Β-elemene
sol id l ip id nanoparticles
21512　包封率的测定: 取优化条件下制得的 Β2榄香
烯固体脂质纳米粒, 测定包封率, 结果包封率为
70118% (n= 3)。
216　稳定性考察: 将 Β2榄香烯固体脂质纳米粒胶体
分散液密封于 10 mL 安瓿中, 密封, 于 4 ℃避光放
置6个月, 观察平均粒径和包封率随时间的变化情
况, 结果见表 3。
表 3　Β-榄香烯固体脂质纳米粒的粒径和包封率变化
(x±s, n= 3)
Table 3　Particle size d iameter and en trapmen t eff ic iency
of Β-elemene sol id l ip id nanoparticles
(x±s, n= 3)
放置时间 粒径önm 包封率ö%
　0 天 251±15 7012±013
　3 个月 269±18 6812±014
　6 个月 297±12 6719±013
3　讨论
　　目前制备固体脂质纳米粒的常用方法可采用超
声分散法、高压均质法、溶剂挥发法、微乳分散法、溶
剂分散凝聚法等, 根据现有条件实验采用超声分散
法, 并对这种制备方法进行了考察, 制得的Β2榄香烯
固体脂质纳米粒径均匀, 但较大, 包封率较好。由于
时间因素未做其他方法, 因此, 采用其他方法制备Β2
榄香烯固体脂质纳米粒有待进一步试验。
　　因为有表面活性剂的作用和纳米级的粒子, Β2
榄香烯固体脂质纳米粒具有较好的理化稳定性。有
人认为由于该分散体是热力学不稳定体系, 固体脂
质纳米粒混悬液仍然是可以互相碰撞聚合的, 通常
在短时间里就有粒径的增大、粒子聚合甚至胶凝[5 ]。
将固体脂质纳米粒混悬液采用冷冻干燥或喷雾干燥
的方法干燥成固体, 可能有助于纳米粒的稳定。
　　固体脂质纳米粒混悬液外观具有淡蓝色乳
光[6 ] , 而本实验可见为白色乳光和淡黄色乳光。这可
能与被包裹的药物、表面活性剂的种类及纳米粒的
粒径有关。因为有白色乳光的为加硬脂酸多的, 有淡
黄色乳光的为加卵磷脂多的。
参考文献:
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作用的研究[J ]1 中药通报, 1981, 6 (6) : 321
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质纳米粒的工艺研究[J ]1 中国医学工程, 2004, 12 (5) : 211
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·591·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月