全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·683·
制剂与质量
正交试验法优选齐墩果酸固体脂质纳米粒的制备工艺
王婧雯，张三奇，文爱东，汤海峰，方坤泉，刘 丹
(第四军医大学西京医院药剂科，陕西西安 710032)
摘要：目的制备齐墩果酸固体脂质纳米粒。方法
封率为指标，采用正交试验优选最佳制备工艺。结果
采用薄膜一超声分散法制备齐墩果酸固体脂质纳米粒，以包
最佳制备工艺为：超声时间为40rain，齐墩果酸与大豆磷脂
的比例为1：8，60g／L甘露醇的用量为15mL。所得齐墩果酸固体脂质纳米粒圆形或椭圆形，平均粒径范围为(75
+20．3)nm，包封率大于97．81％。结论薄膜一起声分散法制备齐墩果酸固体脂质纳米粒的工艺可行，包封率高。
关键词：齐墩果酸；固体脂质纳米粒；薄膜一超声分散法
中图分类号：R284．2；R286．02文献标识码：A
；正交试验
文章编号：0253—2670(2007)05—0683一03
Optimizingforpreparationtech iqueofol anolicac dsolidlipidnanoparticles
byorthogonaltest ．
WANGJing—wen，ZHANGSan—qi，WENAi—dong，TANGHal—feng，FANGKun—quan，LIUDan
(DepartmentofPharmacy，XijingHosp tal，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi
7
an710032，China)
Abstract：ObjectiveToprepareol anolicac dsolidlipidnanoparticles．MethodsFilm—ultrasonic
wavedispersiontechniquewassedtoprepareoleanolicac dsolidlipidnanoparticles。Theoptimalprepa—
rationtechniquewas lectedbyorthogonaltest，andthe nvelopmentratioofsolidlipidnanoparticleswas
determinedtoevaluatethepreparationtech ique．ResuitsTheop imalconditionswere：ultrasonicwave
time40min，oleanolicacid—phospholipids(1：8)，60g／Lmannitol15mL．Theappearanceoftheprepared
solidlipidnanoparticleswasregularroundorellipseandthediameterdistributionwas(75---!-_20．3)nm．
Thenvelopmentratiowasover97．81％．ConclusionTheselectedpreparationtech iqueofol anolicac d
solidlipidnanoparticlesisrationalandpracticable，withhigherenvelopmentratio．
Keywords：oleanolicacid；solidlipidnanoparticles；film—ultrasonicwavedispersiontech ique；
orthogonaltest
齐墩果酸(oleanolicacid)是从青叶胆Swertia
mileensisT．N．HoetW．L．shih中提取分离的一种
五环三萜类化合物，临床上主要用于慢性肝炎的治
疗以及多方面保肝作用[1]。固体脂质纳米(solid
lipidnanoparticles)系指以固态的天然或合成类脂
如大豆磷脂、三酰甘油等为载体材料，将药物包裹或
内嵌于类脂核中，制成粒径约为50～l000nm的固
体胶粒给药系统[2]。本实验以大豆磷脂为载体，以包
封率为评价指标，采用正交试验法优选各因素条件，
确定了薄膜一超声分散法制备齐墩果酸固体脂质纳
米粒的制备工艺。
1材料
LC--IOVP高效液相色谱仪(日本岛津公司)，
Sephedex—GS0凝胶(Sigma公司)，RE一52旋转蒸
发仪(上海亚荣生化仪器厂)，KQ一250型超声波发
生器(江苏昆山淀山湖检测仪器厂)，BP--190S电
子天平(德国赛多利斯)，齐墩果酸(质量分数为
98．7％，陕西慧科公司，批号050322)，大豆磷脂(上
海太伟药业有限公司，批号050716)，其他试剂均为
国产分析纯。
2方法与结果
2．1 因素水平的确定：经预试验确定影响包封率、
形态、均匀度、粒径分布的3个主要因素，即齐墩果
酸与大豆磷脂比例(A)，60g／L甘露醇用量(B)和
超声时间(C)，各因素取3水平，因素水平见表1。
2．2 齐墩果酸固体脂质纳米粒的制备：由于齐墩果
酸为脂溶性药物，本实验采用薄膜_超声分散法制备。
精密称取处方量的齐墩果酸于100mL圆底烧瓶中，
收稿日期：2006—08—12
作者简介：王婧雯(1979一)，女，陕西人，硕士研究生，研究方向为药物的靶向研究。
Tel：(029)84775475—8015 E—mail：wjlbzw@fmmu．edu．crl
万方数据
·684· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
裹1因素水平
Table1 Factorsandlevels
加15mL氯仿溶解。旋转蒸发除去氯仿，在烧瓶壁上
形成一层薄膜，加6％甘露醇水溶液15mL，水浴超
声，0．45肛m微孔滤膜滤过，分装于安瓿中[3]。
2．3 齐墩果酸的HPLC法测定：色谱条件：色谱
柱：KromasilC18柱(150mm×416mm，5弘m)；流动
相：甲醇一水(90：10)；体积流量：1mL／min；进样体
积：20肛L；检测波长：210nm；温度：25℃。线性关
系：峰面积与质量浓度的回归方程为A一262673
C一1207，r一0．9996，表明齐墩果酸在4．34～
130．34mg／mL线性关系良好。
齐墩果酸固体脂质纳米粒的色谱图显示在齐墩
果酸出峰位置未见其他杂质峰，说明此法对测定药
物的特异性好(图1)。
-_-r——___●_—卜L—q——_—-__耐
O 5 1 0 0 5 1 0
t／rain
图1 空白(A)、齐墩果酸对照品(B)和齐墩果酸固体
脂质纳米粒(C)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsofbl nkcontrol(A)，
oleanolicac dreferencesubstance(B)，and
oleanolicac dsolidlipidnanoparticles(C)
2．4包封率和载药量的测定：采用凝胶柱色谱法测
定包封率。凝胶柱为Sephedex—G50，洗脱液为蒸馏
水，体积流量为0．5mL／min，色谱温度为室温。分
别移取齐墩果酸固体脂质纳米粒0．5mL上柱，每
3．0mL收集1次，共收集(25±3)管。采用HPLC
法测定齐墩果酸固体脂质纳米粒中齐墩果酸的质量
浓度和游离齐墩果酸的质量浓度。
包封率一(总的齐墩果酸的量一游离的齐墩果酸的量)／
总的齐墩果酸的量×100％
载药量[4]一(齐墩果酸的投药量一溶液中齐墩果酸的
量)／磷脂用量×100％
2．5 结果：以包封率和载药量为衡量指标，采用
L。(34)正交试验进行优化工艺参数，结果见表2。
以包封率为衡量指标进行直观分析，由极差确
表2 L’(3‘)正交试验结果
Table2 ResultofL，(3‘)orthogonaltest
试验号 A B C 包封率／％载药量／％
40 86．65 6．27
30 85．75 9．17
20 71．61 5．75
40 98．84 8．46
30 92．Z8 8．32
20 82．43 8．05
40 85．79 6．77
30 84．69 7．23
20 74．56 7．67
76．20
87．57
90．42
14．22
定主次因素顺序：C>A>B，其中C因素K。>K。>
K1，A因素K2>K3>K1，B因素K2>K。>K3，因此
确定C。A：B。为较优处方。影响包封率的主要因素为
超声时间，其次为齐墩果酸与大豆磷脂的比例和60
g／L甘露醇的用量。
将试验测定的包封率数据代入SPSS软件，进
行方差分析检验，由统计结果(表3)可知，C因素和
A因素对齐墩果酸包封率影响均有显著性(P<
0．05)，即超声时间为40min，齐墩果酸与大豆磷脂
的比例为1：8，60g／L甘露醇的用量为15mL，因
此，确定较优处方为C。B。A。。
裹3方差分析
验，制备3批固体脂质纳米粒，结果齐墩果酸的包封
率分别为98．75％、97．81％、98．32％，重现性较好。
2．7 齐墩果酸固体脂质纳米粒的形态观察：取齐墩果
酸固体脂质纳米粒少许滴至专用铜网上，用2％磷钨
酸负染，自然干燥，使粒子在铜网上浓缩沉积，用电子
显微镜观察并拍照，见图2。可见齐墩果酸固体脂质纳
米粒为白色乳光胶体溶液，电镜下可见许多圆形或椭
圆形颗粒，纳米粒的粒径为(75±20．3)nm。
3讨论
固体脂质纳米粒的制备工艺主要包括薄膜一超
声分散法、高压乳匀法、乳化一溶剂挥发法、微乳法、
溶剂分散法等，其中薄膜一超声分散法适于包封脂溶
性药物，制备工艺简单，所需成本低，适于实验室制
备。大豆磷脂是一种天然非离子表面活性剂，生物相
容性较好，无细胞毒性，乳化性能好Es]。
载体材料与药物的相容性可显著影响纳米粒的
的弘他鲇地托M¨墙地他地¨‰：軎鼢互
1
2
3
4
5
6
7
8
9硒＆‰R
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·685·
介质，实验证明，用60g／L甘露醇水溶液作分散介
质室温放置3个月无明显变化，而用生理盐水则很
快混浊、分层，表明药物大量泄漏，磷脂凝聚。原因可
能是电解质的加入改变了各种粒子间电荷的相互作
用，促进了磷脂晶型的转变。
References：
图2 齐墩果酸固体脂质纳米粒透射电镜照片 EliLiuHJ，SunHN，Inhibitioneffect8ofoleanolicac dfro“
Fig·2TEMicrographofoleanolicac d Pharmt，吼锄；工A(解放军磊学学报)，2002，1(5)：。；毳一
solidlipidnanoparticles 274．
包封率，药物浓度也是影响包封率的一个因素。在 E2-1PattarinoFM，IgnoniT·Stabilityofdrug—carrieremulsions
预试验中发现，药物浓度过高，会影响包封率，提示 菱轰：，’尝掣a5t3id(y41)c：h20。13in．e“m””u上风rJ确4⋯
包封率具有饱和性¨]。 [3]XueKC，GuY，ZhangSQ，et口1．Preparationofl m vudyl
通过预试验，确定影响固体脂质纳米粒包封率、palmi．t．ateso．1id．粤8．?：翼particl8[J]·JF“一^胁。胁du
形态、均匀度、粒径分布的3个主要因素，即齐墩果 [。]=‘竺i要嚣慧黧i箸。,h。24。。(。1。0)。ffi,8。9i。0。-。8，92。．“，。。。。。
酸与大豆磷脂的比例、60g／L甘露醇用量和超声时 usingsephadexcolumnchromatographyEJ]·C inPharmJ
间，设计了3因素3水平的正交试验，结果表明超声 [5]篡曼拳繁毫’二．22。3rch8(7)。。：d5=二。。。。。。。“dlipid
时间越长，包封药物量越多；大豆磷脂用量不能过 。。noparti。le。[J]．Foreig。MedSci：S 以Ph。。(国外医
多，说明齐墩果酸固体脂质纳米粒包封有饱和性； 学：药学分册)2002，29(4)：241—245·
60g／L甘露醇用量不能过多，否则包封率降低。 ‘6|M(suLlNler)RforH。,。羔怒Kd，,。。Godelhl，a。。S，．一S。ol。id篡?：；：竺1薹
本实验选用生理盐水、60g／L甘露醇作为分散theart[J]．EurJPharmBiopharm，2000，50：161．
化学发光法测定白果白蛋白的体外抗氧化活性
邓乾春1，陈春艳2，田斌强1，谢笔钧1+
(1．华中农业大学食品科技学院，湖北武汉，430070；2．湖南科技学院化学与生物工程系，湖南永州，425006)
摘要：目的研究白果白蛋白的体外抗氧化活性、对DNA损伤的保护作用及其作用机制。方法以莲房原花青
素和小牛血清蛋白为对照，分别采用邻苯三酚一鲁米诺化学发光体系测定了白果白蛋白对超氧阴离子的清除作用，
硫酸铜一邻菲l罗啉一抗坏血酸一双氧水、硫酸亚铁一鲁米诺一双氧水和硫酸亚铁一鲁米诺3个体系测定了白果白蛋白对羟
自由基的清除作用，双氧水一鲁米诺体系测定了白果白蛋白对体外双氧水的清除作用，采用硫酸铜一邻菲哕啉一抗坏
血酸一双氧水一脱氧核糖核酸体系测定了白果白蛋白对体外DNA损伤的保护作用。结果白果白蛋白具有较好的
体外清除活性氧和保护DNA损伤的活性，但在硫酸亚铁一鲁米诺一双氧水和双氧水一鲁米诺化学发光体系中表现出
“促氧化”作用。结论 采用化学发光体系衡量白果白蛋白的抗氧化活性具有选择性。
关键词：白果白蛋白；化学发光法；体外抗氧化活性
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)05—0685一06
Investigationofinvitroantioxidantactivityofginkgoalbuminbychemiluminescencem thod
DENGQian—chunl，CHENChun—yen2，TIANBin—qian91，XIEBi—junl
(1．CollegeofFoodScienceandTechnology，HuzhongAgricultureU iv rsity，Wuhan430070，China；2．Department
ofChemistryandBioengineering，HunanInstit teofScienceandTechnology，Yongzhou425006，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethescavengingab litiesofginkgoalbumintoreactiveoxygenin
vitro．aswellastheprotectionandmechanismofginkgoalbuminondamagedDNA．MethodsL tus
收稿日期：2006—09—21
基金项目：湖北省“十五”攻关资助项目(2001AA204802)
作者筒介：邓乾春(1979一)，男，湖北黄石人，博士生在读，从事天然产物化学和食品蛋白质化学研究。
Tel：(027)87283201E—mail：sprin9332288@yahoo．com．an
*通讯作者谢笔钧
万方数据
正交试验法优选齐墩果酸固体脂质纳米粒的制备工艺
作者： 王婧雯， 张三奇， 文爱东， 汤海峰， 方坤泉， 刘丹， WANG Jing-wen， ZHANG San-qi
， WEN Ai-dong， TANG Hai-feng， FANG Kun-quan， LIU Dan
作者单位： 第四军医大学西京医院,药剂科,陕西,西安,710032
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)

参考文献(6条)
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