全 文 ：·1238· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
高不利于北柴胡愈伤组织的分化。而叶片诱导产生
的愈伤组织较茎段产生的愈伤组织松软且褐化严
重，不具有分化能力。
3．3试管苗的扩大繁殖：在不同的培养基中不定芽
增殖和生长状态不同。随着6一BA质量浓度的增大，
柴胡试管苗变为畸形。当培养基中添加CH的量达
到250mg／L时，北柴胡试管苗生长速度加快，苗的
高度显著增加，叶片也变的嫩绿。这可能与CH中含
有丰富的氨基酸有关[9]。
3．4试管苗的生根：实验过程中发现，在黑暗条件
下试管苗生长不良，逐渐变黄，叶片脱落，最终死亡。
而在光照条件下则生根情况较好，在1／2MS+
NAA0．5mg／L的培养基上，经过20d的培养，北
柴胡组培苗的基部长出4～5条白色、细长的根，可
用于后期的驯化移栽。
北柴胡的茎段和花芽外植体在适宜的激素组合
中均可经过愈伤组织阶段分化出不定芽，继而得到
生长健壮、根系发达的再生植株进行扩大繁殖。这一
结果为北柴胡的快速繁殖、品质改良和大面积种植
提供了又一条有效的途径。
参考文献：
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枸杞品质及其与土壤肥力关系的研究
张自萍1，史晓文1，曹丽华2，赵世华3
(1．西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏大学，宁夏银川 750021；
2．宁夏大学农学院，宁夏银川 750021；3．宁夏林业局，宁夏银川750021)
摘要：目的通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬、盛果期和秋果中总糖、多糖、甜菜碱、氨基酸、总黄酮、类胡萝
卜素的量及百粒质量，并分析总糖碱比，研究枸杞中这些指标间以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。方法采
用HPLC和分光光度等实验方法以及聚类分析、相关性分析和方差分析等生物统计方法。结果枸杞中各指标被
归为以总糖、甜菜碱和类胡萝卜素为代表的3类，各指标受各种土壤肥力因子的作用不同。结论总糖、甜菜碱和类
胡萝卜素这3种成分及糖碱比值能较科学地评价枸杞的品质；施肥时应综合考虑各种肥力因子对枸杞成分的协同
‘作用，不宜片面考虑其单一的相关性。该研究为枸杞品质评价及合理施肥提供了依据。
关键词：枸杞’总糖碱比；聚类分析}相关性分析；土壤肥力因子
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1238—05
QualitynfruitsofLyciumbarbarumanditsrelationshipwithsoilfertilityfactors
ZHANGZi—pin91，SHIXiao—wenl，CAOLi—hua2，ZHAOShi—hua3
(1．KeyLaboratoryofMinistryofEducationforProtectionandUtilizationofSpecialBiologicalResourcesinW ternChina，
NingxiaUniversity，Yinchuan750021．China；2．SchoolofAgricu ture，NingxiaUnivers ty，
Yinchuan750021，China；3．NingxiaForestryBure u，Yinchuan750021，China)
Abstract：ObjectiveTheont ntsof otalsugar，polysaecharide，aminoacid，beta e，carotenoid，
flavone．hundred—seedw ightofLyciumbarbarumfr itsfromeightdifferenthabitatsinfirststubble，
prosperoustime，andutumnweredeterminedandtheratiosftotalsugartobetainewereanalyzed，in
ordertoclassifytheseindexes，andinvestigatetherelationshipwiththesollfertilityfactors．Methods
收稿日期：200712—10
基金项目：国家科技专项(国科发财字[2006q9号，国家科技支撑计划子课题(2006BAT06A15～11)
作者简介：张自萍(1970一)，女(汉J。宁夏青铜峡人，博士，副教授，主要从事天然产物方面的分析研究。
Tel：1370950078L( 951)2062813(O)(0951)2062803(Fax)E—mail：zipingzhang@163．co“
万方数据
中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1239·
HPLCandUV-spectrophotometryme hodsw reusedtodeterminethecontentsandtheresultswere
analyzedadoptingtheclustering，correlation，andvarianceanalysis．ResultsAlltheindexesw redivided
intothreepartswhichweretotalsugar，betaine，andcarotenoid．Variousindexesw reaffectedindifferent
degreesbythesoilfertilityfactors．ConclusionThecontentsof otalsugar，betaine，carotenoid，andthe
ratiosoftotalsugartObetainecouldbeusedtOassaythequalityofL．barbarumfruitsreasonably；The
accumulationofeachi gredientinL．barbarumf uitsisaffectedbythesynergisticeffe tsofallthesoil
fertilityfactors，notasinglerole．Itwouldbebeneficialtothefertilizationandimprovementforthequality
ofL．barbarum．
Keywords：LyciumbarbarumL．；ratiosoftotalsugartObetaine；clustering；correlationanalysis；
soilfertilityfactors
枸杞LyciumbarbarumL．为茄科枸杞属植物，
其干燥成熟果实是我国传统名贵中药材，具有增强
免疫力、降血压、降血脂、抗氧化、抗肿瘤等多方面的
药理作用，以往认为这些作用主要与其所含的枸杞
多糖有关，然面，研究发现枸杞的药理活性并非其中
某一种成分在起作用，而是水溶性和脂溶性多种活
性成分协同作用的结果[1]。枸杞中这些活性成分的
合成与积累共同受制于多种环境因素，尤其是人为
影响较大的土壤肥力因子，研究表明由于土壤因子
直接影响药用植物体内的生理生化反应，从而影响
植物化学成分的种类和量C2]，所以有必要弄清枸杞
果实中各种活性成分与土壤肥力因子间的相互关
系，这对西北地区干旱半干旱地区的盐渍化土地利
用与改良具有重要的理论和实践意义。
为此，本研究以宁夏8个不同产地的枸杞头茬、
盛果期果实和秋果为材料，分别测定了枸杞中总糖、
多糖、甜菜碱、氨基酸、总黄酮、类胡萝b素的量以及
百粒质量，通过对这7种指标的聚类分析以及它们
与土壤肥力因子间的相互关系研究，旨在为提高枸
杞品质的检测以及枸杞的合理施肥提供依据。
1实验材料、仪器与试剂
1．1材料：以宁夏银北主要盐碱地区(惠农区、平罗
县)及同心、固原原州区清水河流域等8个试验点种
植的宁夏主栽品种“宁杞1号”头茬果(2006年6月
lOWl7日采摘)、四茬果(盛果期)(2006年7月9～
13Et采摘)和秋果(2006年9月20～23日采摘)为材
料，为尽可能减小田间管理水平对枸杞品质的影响，
在采样时尽量选择枸杞树龄、植株密度、枝条修剪水
平和成熟度一致的样品。测定前样品均在50℃恒
温条件下烘干至恒质量。
1．2 仪器与试剂：CBM--20A高效液相色谱仪
(日本岛津公司)，SPD--20A检测器，二元梯度泵，
LC--Solution色谱工作站，江苏汉邦Liehrospher
NH2(250mm×46mm，5pm)色谱柱，Milli～QA
10型纯水仪(MILLIPORE)，紫外可见分光光度
计，KQ一500B超声波清洗器(昆山市超声仪器有
限公司)，PB303E电子天平(METTLER
TOLEDO仪器公司)等。
乙腈为进口色谱纯；石油醚，丙酮，二氯甲烷，甲
醇，无水乙醇，浓硫酸为分析纯；葡萄糖对照品购自
中国药品生物制品检定所，甜菜碱对照品(Sigma
公司生产)。
2方法
2．1枸杞总糖测定：根据中华人民共和国国家标准
GB／T18672—2002附录B一枸杞总糖测定方法
测定[3]。
2．2枸杞多糖、总黄酮和甜菜碱按文献[4，5]方法
测定。
2．3枸杞氨基酸按文献i-6J方法测定。
2．4枸杞类胡萝b素按文献E73方法测定。
2．5枸杞百粒质量测定：按四分法从各枸杞样品中
随机数取100粒枸杞果实，称质量(重复3次，取其平
均值)。
2．6 土壤肥力因子的测定：在枸杞果实成熟前期
(2006年5月26日)分别采集了这8个试验点0--60
cm的土壤样品，测定了其土壤有机质(重铬酸钾熔
融法)、碱解氮(碱解扩散法)、速效磷(分光光度
法)、速效钾(火焰光度计法)的量嘲。
2．7本研究中的统计分析(聚类分析、相关性分析
和方差分析)均采用SPSSII．0软件。
3结果与分析
宁夏8个不同试验点，不同采摘期枸杞样品中
总糖、多糖、甜菜碱、总黄酮、氨基酸和类胡萝卜素的
量以及百粒质量的测定结果见表1。
3．1枸杞各指标聚类分析
3．1．1对不同采摘期枸杞各指标进行R型聚类分
析，分析结果见表2和图1。由图1可知，总糖、多糖、
百粒质量聚为一类，称类1；氨基酸、甜菜碱、总黄酮
万方数据
·1240· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
裹1 不同采摘期枸杞各指标测定结果
Table1 Determinationofeveryi dexinfruitsofL．barbarumtdifferentpickingstages
编号1-1、1-2、1-3分别表示1号产地的头茬、四茬和秋果样品，以此类推．百分比代表质量分数，表中空白处的数据没有测定。
Number1—1，卜2．and1-3representfruitsofL．barbarumf onumber1 habitatsinfirststubble，prosperoustim ，andutumn，
respectivelyandSOon．Percentagerepresentsqualitypercentage，spaceinTablrepresentsdatahatwerenotdetermined
表2相关系数矩阵 表3相关指数均值表
Table2 Matrixaboutcorrelationcoefficient Table3 MeanofrelativeIndexes
总糖
多精
百粒重
氢皋陵
甜菜碱
总黄酮
类胡萝h
图1不同采摘期枸杞各指标聚类谱系图
Fig．1Clusterd ndrogramofeveryindexinfruits
ofL．barbaruraatdifferentpickingstages
聚为一类，称类2；类胡萝卜素自成一类，称类3。表2
为各变量问的相关系数R，通过计算各类中每一变
量与该类其余变量的相关指数(即相关系数的平
方)的均值，从类1和类2中各选出均值最大的变量
作为该类的典型指标，计算及结果见表3。由表3可
知，总糖可作为类1的典型指标，甜菜碱可作为类2
的典型指标。综上，枸杞果实品质中的各种指标基本
上被归为3类，它们的代表分别为：总糖、甜菜碱和
类胡萝卜素。
3．1．2总糖代表了枸杞果实中的酸性物质，而甜菜
碱代表了碱性物质。高业新等[9]根据糖碱比值将枸
杞分为3个不同品质区域：I区糖碱比极低，属低糖
高碱区(糖碱比小于30)；I区属中糖中碱区(糖碱比
为30～60)；I区高糖低碱区(糖碱比大于60)。由表
1可知，8个试验点除了1—1、4—1、4—4、5—4样品处于
高糖低碱区外，其余的均属于中糖中碱区，而没有低
糖高碱的样品。通过方差分析发现，不同采摘期枸杞
样品中总糖和甜菜碱的量均存在差异，总糖量差异
达到极显著水平(F=14．190，P
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1241·
一茬果实大于第四茬，而糖碱比差异不显著(F一
3．226，P>0．05)。
3．2不同土壤肥力因子与枸杞各指标关系研究：由
于枸杞第一茬果实中各成分量普遍大于第四茬和秋
果，比较具有代表性，而且第一茬的采摘时间与土壤
样品的取样时间较为接近，因此，分别以每个试验点
第一茬枸杞各指标作为该点相应的代表，与其对应
的土壤肥力因子做相关性分析(各点的土壤肥力因
子指标见表4)，分析结果见表5。
裹4不同试验点土壤肥力数据
Table4 Dataofsoilfertilityfactors
indifferenttestregions
速效氟／ 速效磷／ 速效钾／ 有机质／
产地编号(g．kg-X)(g．kg-1)(g．kg-1)(g．kg-1)
30．90
43．45
51．79
43．39
56．54
29．27
29．03
36．63
6．41
9．37
7．37
11．76
12．99
6．53
4．13
9．38
裹5枸杞各指标与土壤各肥力因子相关性分析
Table5 Correlationnalysisbetweenveryindexinfruits
ofL．barbarumndsoilfertilityfactors
·号表示具有显著性差异，**表示具有极显著性差异
-inTable5 representsasignificantdifferenceand-t
representsaveryignificantdifference
3．2．1表5中偏相关分析所控制的变量为各种土
壤肥力因子。由表5可知，简单相关分析和偏相关分
析的结果存在一定差异，差异较大(差值大于0．3)的
为：多糖与有机质、甜菜碱与速效氮和有机质、类胡
萝卜素与速效钾，这说明该肥力因子对相应指标的
作用受其他肥力因子的影响较大；反之，差异较小
(差值小于0．05)的为：总糖与速效氮、多糖与速效
氮、氨基酸与速效氮和速效磷、总黄酮与速效磷，这
说明该肥力因子对相应指标的作用受其他肥力因子
的影响较小，可以用简单相关性代替偏相关性。
3．2．2 由表5的偏相关数据可知，相关性较明显
(相关系数大于0．6)的为总糖与速效钾(O．608)呈正
相关，多糖与速效钾(O．626)呈正相关；甜菜碱与速
效氮(0．855。)呈显著正相关；甜菜碱与速效磷
(--0．984一)呈极显著负相关；甜菜碱与速效钾
(一o．919。)呈显著负相关；甜菜碱与有机质
(一0．792)呈负相关；类胡萝卜素与速效钾(o．702)
呈正相关；氨基酸与速效磷(--0．664)呈负相关。可
见，总糖、甜菜碱、类胡萝卜素这3种代表枸杞整体
品质的活性成分均较大程度上受土壤肥力的影响，
其中速效钾对总糖和类胡萝卜素的积累均具有较明
显的正效应，速效氮对甜菜碱的积累具有较显著的
正效应，而速效磷、速效钾和有机质对甜菜碱的积累
均具有较显著的负效应，因此这些肥力因子通过对
这些成分的协同作用来共同影响枸杞的整体品质，
在施肥时应综合考虑。
4讨论
4．1本研究测定了宁夏8个产地不同采摘期枸杞
果实中多种活性成分的量以及百粒质量，统计分析
表明，枸杞果实品质中的各种指标基本上被归为3
类，它们分别以总糖、甜菜碱和类胡萝卜素为代表，
其中总糖代表了构杞果实中的酸性物质，而甜菜碱
代表了碱性物质。方差分析表明，不同采摘期枸杞样
品中总糖和甜菜碱量均存在差异，均为第一茬果实
大于第四茬，这可能与树体本身的营养积累程度有
关，头茬果为老眼枝上的果实，老眼枝是上一年形成
的枝条，经过一年的营养积累，其叶片多且大，成熟
度高，营养面积大，结出的果实营养成分量高。盛果
期果实是春7寸枝上的果实，春7寸枝是当年春季生
长的枝条，营养积累时间较短，其叶片长出时间短，
叶片小，叶片成熟度低，营养量少，结出的果实营养
成分量比老眼枝的低。另外通过所测糖碱比值可以
看出，第一茬和第四茬的枸杞整体糖碱品质差异不
大，除个别样品处于高糖低碱区外，其余均属于中糖
中碱的优质枸杞品质范围之内，而没有低糖高碱的
样品。所以，枸杞果实的综合品质并不是其中的所有
营养成分量越高越好，而是要均衡各种成分，使其达
到一个合理的配比关系，而酸、碱两组物质在枸杞果
实中的量及其相互之间的平衡配比关系是决定枸杞
药用品质的重要因素，因此，在目前尚缺乏科学、可
控的枸杞品质评价标准的情况下，利用枸杞糖碱比
值较单一的糖、碱成分更能客观地评价枸杞的品质。
0
5
5
O
O
5
O
5
6
8
5
1
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9
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坫”：=衢¨0
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0
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5”拈∞卯毖珀n
万方数据
·1242· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
另外，通过这3种成分及糖碱比的测定可以粗略估
计枸杞的总体品质，这可以大大简化检测工作，无疑
是对枸杞品质进行粗略检测时的科学、高效、经济的
方法。
4．2 土壤是生态系统中物质和能量交换的重要场
所，枸杞生命活动所需的水分和营养物质绝大部分
是通过根系从土壤中吸收的，土壤中各营养物质将
直接或间接影响枸杞的生长发育和品质表现，尤其
是变化较大的各种肥力因子。本研究通过枸杞各品
质指标与土壤中各肥力因子的两种相关性分析可以
看出，各品质指标大小分别受土壤中各种肥力因子
的共同影响，而非单一作用，只是作用大小与方向不
同。所以在做相关性分析时，应改变以往只做的简单
相关性分析，而采用控制土壤其他肥力因子的偏相
关分析，尤其是对于那些在两种分析下差异较大的
指标。因此在施肥时应该综合考虑各种肥力因子对
枸杞每一活性成分的协同作用，不要只片面考虑其
单一的相关性，尤其是对枸杞总糖、甜菜碱和类胡萝
卜素的综合作用。该研究可以为枸杞的合理施肥提
供参考。但枸杞品质除土壤肥力外还受其他环境因
素的影响，尤其是它们的综合作用，有关这一方面还
有待于进一步深入系统研究。
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红花cDNA—AFLP反应体系的优化研究
冯 娜，郭美丽’，张汉明
(第二军医大学药学院生药学教研室，上海200433)
摘要：目的为构建红花的遗传连锁图谱和功能基因的研究，探讨影响红花eDNA扩增片段长度多态性(eDNA
amplifiedragmentlengthpolymorphism，cDNA—AFLP)的各种因素，建立并优化红花cDNA—AFLP反应体系。
方法 以红花新鲜花瓣为材料，针对其内含物特殊性对Trizol法加以改进提取RNA，采用无RNaseH活性的鼠
源反转录酶(M—MLVRTase)结合置换合成法反转录双链eDNA；两步法酶切与连接，优化酶切时间；连接产物和
预扩产物分别设置不同稀释倍数扩增并对选扩反应体系略微调整后，用6％的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分
离，银染检测。结果改进Trizol法得到的红花总RNA样品较为完整，纯度较高，可直接用于双链的合成；经无
RNaseH活性反转录酶结合置换合成法得到高质量的eDNA模板。建立优化后的红花cDNA—AFLP体系为：250
ngeDNA37℃6h经限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切，16℃连接12h；连接产物最佳稀释倍数为10倍；预
扩产物稀释为150倍；PAGE电泳得到清晰、稳定、分辨率较高的多态性条带。结论本研究建立的反应体系适用
于红花功能基因的cDNA—AFLP研究。
关键词：红花；cDNA—AFLPI优化
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1242—05
OptimizationofcDNA—AFLPreactionsystemforCarthamustinctorius
FENGNa，GUOMei—li，ZHANGHan—ming
(DepartmentofPharmacognosy，CollegeofPharmacy，SecondMilitaryMe icalUniversity，Shanghai200433，China)
Abstract：ObjectiveTo onstructforthehereditylinkagemapandtostudythefunctionalgene
researchofCarthamustinctorius，thefac orsaffectingcDNAamplifiedragmentlengthpolymorphism
收稿日期：2007—12—03
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30772734)，上海市基础研究重点项目(043919313)
作者简介：冯 娜(1981一)，女．辽宁沈阳人，硕士，方向为药用植物功能基因研究。E—mail：fn1wf@hotmail．com
*通讯作者郭美丽Tel：(021)25074576E—mail：mlguo@smmu．edu．ca
—
万方数据
枸杞品质及其与土壤肥力关系的研究
作者： 张自萍， 史晓文， 曹丽华， 赵世华
作者单位： 张自萍,史晓文(西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏大学,宁夏银川
,750021)， 曹丽华(宁夏大学农学院,宁夏银川,750021)， 赵世华(宁夏林业局,宁夏银川
,750021)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
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9. 杨治科.崔秀梅.吴国平.杜占文.周皓蕾.沙凤英.王晓玲 宁南山区枸杞园节水灌溉试验技术研究[期刊论文]-陕
西农业科学2009,55(4)
10. 张运迪 实施无公害标准,做大做强宁夏枸杞产业[期刊论文]-中国标准化2003(1)
引证文献(3条)
1.杨俊东.陈兴福.杨文钰.刘月秋.张宝林 川泽泻质量与其根际土壤理化性质的相关性分析[期刊论文]-中草药
2012(3)
2.李惠霞.何文寿.王晓军 盐渍化土壤枸杞叶养分变化规律研究[期刊论文]-北方园艺 2011(9)
3.周倩倩.王有科.李捷.贺春燕.赵栋.陈娜.李小刚 施用沼液对景电灌区枸杞生长及品质的影响[期刊论文]-华南农
业大学学报 2013(1)
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