全 文 ：HPLC法同时测定马鞭草中马鞭草苷和戟叶马鞭草苷
袁志芳1 ,段坤峰1 ,张兰桐1 ,史清文2 3
(11 河北医科大学药学院 药物分析教研室 ,河北 石家庄 　050017 ; 21 河北医科
大学药学院 天然药物化学教研室 ,河北 石家庄 　050017)
摘 　要 :目的 　建立马鞭草药材中马鞭草苷 (verbenalin) 及戟叶马鞭草苷 ( hastatoside) 的测定方法。方法 　采用
Diamonsil C18色谱柱 (250 mm ×4. 6 mm , 5μm) ,乙腈2水 (15 ∶85) 为流动相 ,检测波长为 238 nm。结果 　马鞭草
苷、戟叶马鞭草苷在 17. 2～155. 2μg/ mL 和 25. 5～229. 9μg/ mL 与峰面积均呈良好的线性关系 ;平均回收率分别
为 98. 89 %(RSD = 1. 1 %) 、99. 00 %( RSD = 0. 4 %) 。结论 　本法操作简便、准确 ,具有良好的重现性 ,为马鞭草药
材的合理应用及质量控制奠定基础。
关键词 :马鞭草 ;马鞭草苷 ;戟叶马鞭草苷 ;高效液相色谱
中图分类号 :R28612 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 05 0818 03
　　马鞭草为马鞭草科植物马鞭草 V erbena off ici2
nalis L1 的干燥地上部分 ,收载于《中国药典》2005
年版一部。马鞭草有活血散瘀、截疟、解毒、利水消
肿的功效 ,用于治疗癥瘕积聚、经闭痛经、疟疾、喉
痹、痈肿、水肿、热淋[ 1 ] 。马鞭草项下的薄层鉴别和
定量测定均以熊果酸为指标。熊果酸为脂溶性成
分 ,广泛存在于多种中药中 ,如山茱萸、夏枯草、枇杷
叶、山楂、栀子等[ 1 ] 。张涛等[ 2 ]以马鞭草甲醇渗漉粗
提物及其经硅藻土柱分离的各部分提取物 ,进行了
抗大鼠早孕作用的实验 ,结果表明 ,马鞭草甲醇粗提
取物及其甲醇部分提取物具有非常显著的抗大鼠早
孕作用 ,而石油醚、氯仿部分提取物未显示出抗大鼠
早孕的作用。由此确定马鞭草抗早孕作用的有效部
位为其甲醇部分提取物。张涛等[3 ]通过实验证明马
鞭草苷、3 ,42二氢马鞭草苷、52羟基马鞭草苷均能显
著增加子宫肌条的收缩频率和振幅 ,从而认为 3 种
成分为其兴奋子宫肌条的有效活性成分。由此可
见 ,马鞭草中抗早孕的活性物质为极性成分。卫生
部药品标准中药成分制剂含马鞭草的中成药有 3
种 ,即肾炎片、清热感冒茶、重感灵片[4 ] ,且马鞭草的
提取工艺均为水提。因此 ,研究马鞭草极性成分的
定量测定能够更好地监控药材的质量。
马鞭草的极性成分以环烯醚萜苷类物质为主 ,
也是主要药效物质基础 ,其中马鞭草苷和戟叶马鞭
草苷 (即 52羟基马鞭草苷) 为量最大的主要成分 ,其
他成分的量很低 ,所以 ,通过检测马鞭草苷和戟叶马
鞭草苷的量 ,对于控制马鞭草药材的质量具有重要
的意义。
1 　仪器与试药
Agilent Technologies 1200 series 高效液相色
谱仪 (配有紫外二极管阵列检测器、四元泵、自动进
样器、柱温箱) ;SCQ —200 超声波清洗器 (上海声谱
超声波设备厂) ;SZ—93 自动双重纯水蒸馏器 (上海
亚荣生化仪器厂) 。
马鞭草苷和戟叶马鞭草苷对照品自制 ,经 IR、
MS、1 H2NMR、13 C2NMR 确定结构[5～7 ] ,质量分数
均大于 98. 5 %。乙腈为色谱纯 ,水为重蒸水 (自
制) ,甲醇为分析纯。
药材购自石家庄乐仁堂药店及不同产地的药业
公司 ,经河北医科大学药学院生药学教研室聂凤褆
教授鉴定。药材产地见表 1。药材经 40 ℃干燥后 ,
粉碎过 24 目筛 ,备用。
2 　方法与结果
211 　色谱条件与系统适用性试验 :Dikma Diamonsil
C18色谱柱 (250 mm ×4. 6 mm , 5μm) ;柱温 35 ℃;流
动相为乙腈2水 (15 ∶85) ,体积流量 1. 0 mL/ min ;检测
波长 238 nm ;进样量 20μL。按马鞭草苷和戟叶马鞭
草苷计算理论板数均不低于 2 000 ,与相邻峰之间分
离度均大于 1. 5 ,对称因子均在 0. 95～1. 05。
212 　对照品溶液制备 :精密称取马鞭草苷和戟叶马
鞭草苷适量 ,加 80 %甲醇溶解并稀释制成含马鞭草
苷 0. 86 mg/ mL 、戟叶马鞭草苷 1. 28 mg/ mL 的溶
液 ,即得。
213 　供试品溶液制备 :取药材粉末约 0. 5 g ,精密称
·818· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
3 收稿日期 :2008208207　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :袁志芳 (1969 —) ,男 ,河北省故城县人 ,在读博士 ,研究方向为中药有效成分的提取分离与药效物质基础研究。
Tel : (0311) 86265625 　E2mail :zhifangyuan @126. com3 通讯作者　史清文　Tel : (0311) 86265534 　E2mail :shiqing2w @163. com
定 ,置具塞 100 mL 锥形瓶中 ,加入 20 倍量 80 %甲
醇 ,密塞 ,称定质量 ,超声处理 45 min ,放冷 ,称质
量 ,用 80 %甲醇补充减失的质量 ,摇匀 ,微孔滤膜滤
过 ,取续滤液备用 ,即得。
214 　标准曲线绘制 :精密吸取 212 项下的对照品溶
液 1. 0、3. 0、5. 0、7. 0、9. 0 mL ,置于 10 mL 量瓶中 ,
用 80 %甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,在上述色谱条件下
测定峰面积。以对照品质量浓度为横坐标 ,相应的
峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,计算回归方程 ,马
鞭草苷 : Y = 22 . 76 X —52 . 42 , r = 0 . 999 8 ,线性
范围为 17. 2～155. 2μg/ mL ;戟叶马鞭草苷 : Y =
32 . 25 X —71 . 41 , r = 0 . 999 5 ,线性范围为 25 . 5
～ 229 . 9μg/ mL ;结果表明线性关系良好。
215 　精密度试验 :精密吸取混合对照品溶液 5μL ,
重复进样 6 次 ,在上述色谱条件下测定峰面积 ,马鞭
草苷、戟叶马鞭草苷峰面积的 RSD 分别为 0. 47 %
和 0. 61 %( n = 6) 。
216 　重现性试验 :取同一批样品 ,精密称取 6 份 ,按
213 项下操作 ,在上述色谱条件测定马鞭草苷、戟叶
马鞭草苷的量 ,RSD 分别为 0. 40 %和 0. 41 %( n = 6) 。
217 　稳定性试验 :精密吸取同一供试品溶液 ,在室
温下放置 ,分别于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 测定马鞭
草苷、戟叶马鞭草苷的质量浓度 , RSD 分别为
1. 50 %( n = 6) 和 1. 82 % ( n = 4 ) ,样品溶液在 24 h
内稳定。
218 　回收率试验 :精密称取 6 份已知质量分数的药
材粉末 0. 25 g ,依次加入 2. 2 项下混合对照品溶液
2 mL 及 80 %甲醇 18 mL ,按 213 项下操作。在上
述色谱条件下测定 ,得出马鞭草苷、戟叶马鞭草苷的
平均回收率分别为 98. 89 %、99. 00 % , RSD 分别为
1. 1 %、0. 4 %( n = 6) 。
219 　样品测定 :分别取供试品溶液和对照品溶液 ,
在上述色谱条件下测定 ,以外标法计算各样品中马
鞭草苷、戟叶马鞭草苷的量 ,结果见表 1。色谱图见
图 1。
3 　讨论
311 　本实验首次建立同时测定马鞭草中马鞭草苷
和戟叶马鞭草苷的 HPL C 分析方法 ,该方法灵敏度
高 ,专属性强 ,操作简单易行 ,而且将质量控制与活
性成分相结合 ,为该中药材的质量控制提供了新思
路、新尝试。
312 　《中国药典》2005 年版一部收载的马鞭草是利
用其脂溶性成分熊果酸为鉴别和定量测定指标的 ,
而马鞭草基本上采用水提工艺。因此 ,马鞭草极性
表 1 　不同产地马鞭草中马鞭草苷和戟叶马鞭草苷的测定
( n = 3)
Table 1 　Determination of verbenalin and hastatoside in V1
of f icinalis from different habitats ( n = 3)
产地 马鞭草苷/ (mg ·g - 1) 戟叶马鞭草苷/ (mg ·g - 1)
河北 1 3. 49 5. 49
河北 2 3. 15 4. 61
河北 3 3. 45 5. 11
河北 4 3. 39 5. 08
河南 1 1. 49 3. 02
河南 2 0. 31 0. 98
河南 3 0. 45 2. 86
山东 2. 14 5. 41
江西 2. 72 5. 91
广西 2. 62 4. 59
12戟叶马鞭草苷　22马鞭草苷
12hastatoside 　22verbenalin
图 1 　对照品( A)及样品( B)色谱图
Fig. 1 　Chromatograms of reference substance ( A)
and sample ( B)
成分的定量能够更好地监控药材的质量。
313 　戟叶马鞭草苷与马鞭草苷在 238 nm 附近有
强吸收 ,因此本实验采用 UV 检测器 ,测定样品中
的戟叶马鞭草苷与马鞭草苷的量。结果表明 ,马鞭
草中的戟叶马鞭草苷与马鞭草苷能够获得很好的分
离 ,且分离度及重现性均令人满意 ,提示可用于马鞭
草药材的质量监控。
314 　关于提取方法和提取溶剂 ,实验过程中不同质
量浓度 (20 %、40 %、60 %、80 %、100 %) 甲醇的提取
率进行了比较 ,结果显示 80 %甲醇提取率最高 ,因
此选用 80 %甲醇作为提取溶剂 ;并且对不同超声提
取时间 (15、30、45、60 min) 进行了考察 ,结果表明
45 min 时戟叶马鞭草苷和马鞭草苷的质量浓度不
再增加 ,即能达到最大的提取量 ,因此确定将样品超
声处理 45 min ;超声处理和回流提取也进行了比
较 ,比前者为佳 ,最后选定样品用 20 倍 80 %甲醇超
声处理 45 min 进行样品制备。
315 　从样品的检测结果来看 ,各产地之间戟叶马鞭
草苷和马鞭草苷的量的差异较大 ,有必要对药材的
产地、采集、加工和贮存进行跟踪检测 ,以保证马鞭
草药材的质量和药效稳定。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典 [ S]1 一部1 20051
[ 2 ] 　张　涛 , 谢　虹 , 李　万1 马鞭草提取物抗大鼠早孕作用的
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[ 3 ] 　张　涛 , 李　力 , 阮金兰1 马鞭草化学成分对大鼠离体子宫
平滑肌条作用的研究 [J ]1 中国中医药科技 , 2001 , 8 (5) :
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册1 19941 [ 5 ] 　桂承会 , 唐人九1 马鞭草镇咳有效成分的研究 [J ]1 中药通报 , 1985 , 10 (10) : 351[ 6 ] 　Teborg D , Peter J1 Iridoid glucosides f rom Penstemon nitt dus[J ]1 Planta Med , 1991 , 57 : 18421871[ 7 ] 　张　涛 , 阮金兰 , 吕子敏1 马鞭草环烯醚萜苷类成分的研究[J ]1 中草药 , 2000 , 31 (10) : 72127231
HPLC2UV法测定通光藤药材中通光藤皂苷 A
马 　尧 ,赵陆华 3 ,肖望书 ,李 　琼 3
(中国药科大学 分析测试中心 ,江苏 南京 　210009)
　　通光藤又名乌骨藤、通关藤等 ,系萝藦科牛奶菜
属植物通光散 M ars deni a tenacissi m a ( Roxb1 )
Wight et Arn. 的干燥藤茎 ,主产于云南、贵州等地 ,
具有清热解毒、止咳平喘、消炎镇痛等功效。现代药
理学研究表明 ,通光藤独特的 C21甾体衍生物 (主要
是 C21甾体皂苷)具有显著的抗肿瘤活性 ;通光藤皂
苷提取物对人胃癌细胞 M KN28、人结肠腺癌细胞
Lovo 均有显著的抑制作用[1 ,2 ] 。由其研制而成的单
方制剂“消癌平”,对小鼠体内移植性实体瘤 S180 、
P388 也有明显抑制作用[3 ,4 ] 。
有文献曾报道对通光藤中主要药效成分通光藤
皂苷 A、G ( tenacisside A、tenacisside G) 等的
H PL C2EL SD 研究[ 5 ] , 但关于通光藤皂苷 A 的
H PL C2UV 测定法目前尚未见报道。鉴于 HPL C2
EL SD 法的重现性差 ,以及 H PL C2UV 分析法的普
及率高 ,建立了通光藤皂苷 A 的 HPL C2UV 测定
法 ,并比较了 9 个不同产地药材以及药材不同部位
中通光藤皂苷 A 的量 ,为通光藤药材的质量控制提
供了简单、可行的方法和依据。
1 　仪器与试药
岛津 L C —10AD V P 高效液相色谱仪 ,岛津
SPD —10A V P 紫外检测器 ,浙江大学 N2000 色谱
工作站。
通光藤药材分别由南京圣和制药有限公司 (药
材产自云南金平)和云南医药公司提供 ,共 9 个不同
产地 ,经中国药科大学宋学华教授鉴定为正品。通
光藤皂苷 A 对照品自制 (经 MSn 、1 H2NMR、13 C2
NMR 确定其化学结构 ,经 HPL C2DAD 测定 ,归一
化法计算质量分数 > 98 %) 。乙腈购自 TIDIA 公
司 ,甲醇为色谱纯 ,水为纯净水。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 : Alltech C18 色谱柱 (250 mm ×4. 6
mm , 5μm) ;流动相 :乙腈2水 (38 ∶62) ;检测波长 :
220 nm ;体积流量 :1. 0 mL/ min ;柱温 : 30 ℃;进样
量 :20μL ;灵敏度 :011 AU FS。
在上述色谱条件下 ,通光藤皂苷 A 峰形良好 ,
与其他组分的分离度大于 1. 5 ,色谱图见图 1。
图 1 　通光藤皂苷 A对照品( A) 和通光藤药材(南京圣和
制药) ( B)的 HPLC2UV色谱图
Fig. 1 　HPLC2UV Chromatograms of tenacisside A
to reference substances ( A) and sample
of M1 tenacissima ( Shenghe) ( B)
212 　对照品溶液的制备 :取干燥至恒重的通光藤皂
苷 A 对照品适量 ,精密称定 ,加甲醇制成质量浓度
为 2. 04 mg/ mL 的对照品储备液 ;临用前精密量取
适量 ,加甲醇制成 0. 51 mg/ mL 的对照品溶液。
213 　供试品溶液的制备 :通光藤药材 ,粉碎 ,取 2 g ,
准确称定 ,置 100 mL 圆底烧瓶中 ,加 70 %甲醇 50
mL 浸泡 30 min ,回流 1 h ,放冷 ,滤过 ;药渣加 70 %
甲醇 50 mL 再回流 1 h ,放冷 ,滤过 ,合并 2 次滤液 ;
滤液水浴蒸干 ,残渣加乙腈溶解并定容至 5 mL ,摇
匀 ,用微孔滤膜 (0. 45μm)滤过 ,取续滤液 ,即得。
214 　线性关系考察 :精密量取通光藤皂苷 A 对照
品储备液 0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1、1. 5 mL 于 2 mL 量
·028· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
3 收稿日期 :2008208202　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :江苏省自然科学基金资助项目 (B K2005100)
作者简介 :马　尧 (1984 —) ,男 ,江西铜鼓人 ,中国药科大学药物分析专业硕士研究生 ,研究方向为中药分析。
E2mail :f ranklinxinzhe @hot mail . com3 通讯作者　赵陆华　Tel : (025) 83271185 　E2mail :luhuazhaocpu @hot mail . com