全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1403·
生长调节剂的种类、质量浓度及组合而异[14。。TDZ
是近几年出现的新型植物生长调节剂，常用于木本
植物的组织培养研究中，用在蚬壳花椒组织培养中
还属首次。本研究发现，诱导蚬壳花椒叶片不定芽再
生，6BA比TDZ效果好：诱导时间早，不定芽再生率
高。崔丽华[15]也认为大多数种类的细胞分裂素以6一
BA最为有效。熊丽等D6]人指出，细胞分裂素对不定
芽的分化和增殖有着显著的作用，但生长素质量浓
度也不宜过高，一般来说，当生长素／细胞分裂素比
值高时，利于根的形成，低时则利于芽的发生。在本
试验中，当调节6一BA和NAA的比例发现，6一BA／
NAA=5时不定芽的分化率最高。
外植体的脱分化和分化与其内源激素量有密切
关系，内源激素量及其与外源激素的合理调控与平
衡是影响植物生长发育的重要目标。蚬壳花椒在愈
伤组织分化的不同阶段，内源激素的量及变化趋势
各不同：胚性细胞发生时，ABA的量一直保持较低
水平，说明ABA可能是芽分化时期的负调控因子；
细胞分裂素ZR的量始终高于生长素IAA；GA。在芽
分化过程中的水平也相对较高。因此，在愈伤组织分
化过程中适当增加ZR和GA。的量是否有利于提高
蚬壳花椒不定芽的分化还有待于进一步的研究。
参考文献：
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肉苁蓉种子的活力研究
陈庆亮1，张秀省2，郭玉海¨，翟志席1，杨重军2，王华磊3
(1．中国农业大学农学与生物技术学院，北京 100193；2．聊城大学农学院，山东聊城252000，
3．贵州大学农学院，贵州贵阳 550025)
摘要：目的为了改进TTC法测定肉苁蓉种子活力的方法和调查肉苁蓉种子于5℃贮藏时种子活力的变化。方
法研究了TTC法中种皮、TTC溶液、次氯酸钠(NaClO)溶液和染色时间对肉苁蓉种子活力的影响，并用改进的
方法测定了于5℃贮藏了不同年限种子活力。结果 肉苁蓉种子于40℃下用0．5％TTC溶液染色48h后，再用
0．2％NaC10溶液漂白2h后镜检；采收后贮藏于5℃保存1～2年的种子，其活力没有明显变化，但高活力种子的
百分比随着贮藏年限的增加而增加。结论提供了一套方便快捷的测定肉苁蓉种子活力的方法；肉苁蓉种子于5℃
贮藏有利于提高种子活力。
关键词：寄生植物}肉苁蓉ITTCl种子活力
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1403—05
StudyonviabilityofCistanchedeserticolaseeds
CHENQing—lian91，ZHANGXiu—shen92，GUOYu—hail，ZHAIZhi—xil，
YANGChong—jun2。WANGHua—lei3
(1．CollegeofAgronomyandBiotechnology，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China；
收稿日期：2008—01—20
基金项目：河北省科技攻关项目(0327640811)-4)l重大基础研究前期研究专项(2004CCA01200)
作者简介：陈庆亮(1972--)，男·博士研究生，研究方向为中药材栽培生理。Tel：(010)62733853E—mail：cqlcau@126．com
*通讯作者郭玉海E-mail：yhguo@cau．edu．cn
万方数据
-1404· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9,El
2．CollegeofAgronomy，LiaochengUniversity，Liaocheng252000，Chinal 3．College
ofAgronomy，GuizhouUniversity，Guiyang550025，China)
Abstract：ObjectiveToimprovethe2，3，5一triphenylt trazoliumchloride(TTC)solutionmethodf r
measuringtheviabilityofCistanchedes rticolaseedsandinvestigatethechangeinviabilityduringstorage
at5℃．MethodsTheeffectofthetesta，TTCconcentration，sodiumhypochloriteconc ntration
(NaClO)，andst iningtimewerestudied，andseedviabilityduringstorageat5℃wasmeasuredwiththe
improvedmethod．ResultsSeedswerekeptfor48hin0．5％TTCsolutionat40℃，andthenfor2hin
0．2％NaCl0solution；Seedviabilitywasmeasuredundera stereomicroscope．Storingse dsofC．
deserticolafor1 tO2yearsat5℃hadnosignificanteffectsontheirviability．However，thep rcen ageof
seedswithighviabilitywasincreasedwiththextensionofthestoragetimeat5℃．ConclusionA
convenientandrapidmethodf rmeasuringtheviabilityofC．deserticolaseedsi developed．StoringC．
deserticolaseedsat5℃couldimprovetheirviability
Keywords：parasiticplant；CistanchedeserticolaY．C．Ma；2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride
(TTC．)；seedviability
荒漠肉苁蓉为列当科肉苁蓉属(Cistanche
Hoffmgg．etLink)的多年生专性根寄生植物，有
。沙漠人参”之称，是国家二级保护植物[1]，已能人工
种植[2]。但由于其种子有休眠性，生产中萌发率和接
种率均低，严重影响肉苁蓉的产业化生产，而种子活
力的高低直接影响接种率和萌发率[3’‘】。因此，在接
种前准确了解肉苁蓉种子活力十分必要。在测定种
子活力的方法中，应用最广的是德国莱康(Lakon)
于1942年提出的TTC(2，3，5-triphenyltetrazolium
chloride)法，此方法快速、经济、准确，对休眠种子活
力测定亦有效[5’6]。1993年许月英等建立的测定肉
苁蓉种子活力的TTC法是采取去除种皮，露出胚
乳，以TTC染色后，放在玻片上压出种胚，观察种胚
染色情况。由于肉苁蓉种子很小(长0．7～O．9mm，
宽0．4．--0．6ram)，去种皮后，计数较困难，且镜检时
要压出种胚，操作比较繁琐、费时。本实验对未去种
皮的种子，经TTC染色后采用NaCl0溶液漂白种
皮，以避免去种皮和染色后压出种胚的操作，并探讨
TTC溶液浓度和染色时间以及NaClO溶液的浓度
和漂白时间对种子活力测定的影响，以形成快速高
效的测定方法；并用此方法检测了于5℃贮藏的肉
苁蓉种子活力的变化。
1材料与方法
1．1 材料：肉苁蓉CistanchedeserticolaY．C．Ma
种子由内蒙古自治区阿拉善盟吉兰泰肉苁蓉基地提
供，经中国农业大学郭玉海教授鉴定，为2003--2005
年收获的种子，于5℃贮藏。挑选直径≥O．7mm的
种子为实验材料。按照许月英等‘73测定肉苁蓉种子
活力方法，测定3者的活力分别为91．5％、92．3％、
91．2％。筛选方法时采用2004年的种子。
TTC(分析纯，国药集团化学试剂有限公司，Q／
CYDZ571—2004)，NaCIO(分析纯，北京笃信精细制
剂厂，GB／19106—2003)。
1．2方法
1．2．1 TTC溶液的配制：TTC用蒸馏水配成
0．1％、0．2％、0．5％、1．o％4个质量分数，以0．1
mol／L的NaOH调pH值至7左右。
1．2．2去种皮和未去种皮试验：为确定种皮对染色
的影响，将去种皮和未去种皮的种子放入直径9cm
的培养皿中，加入0．5％TTC溶液，直至完全淹没
种子，于40℃培养箱内黑暗条件下染色48h后滤
过。取去种皮的种子，直接于显微镜下镜检。未去种
皮的种子用0．2％的NaClo漂白2h后于显微镜下
镜检。同时与许月英等[7]的TTC测定法所得的活力
为对照。
1．2．3不同质量分数TTC溶液处理：为确定TTC
溶液和染色时间对种子活力的影响，将未去种皮的
种子放入直径9cm的培养皿中，分别加入0．1％、
0．2％、0．5％、1．o％的TTC溶液直至完全淹没种
子，于40℃培养箱内黑暗条件下染色。根据染色程
度以不同时间间隔取样滤过。用0．2％的NaClO溶
液漂白2h，于体视显微镜下镜检。对照同上。
1．2．4 不同质量分数NaClO溶液处理：为确定
NaClO溶液和漂白时间对种子活力的影响，将未去
种皮的种子放入直径9cm的培养皿中，加入0．5％
TTC溶液直至种子完全淹没，于40℃培养箱内黑
暗条件下染色48h后滤过。分别用0．1％、0．2％、
0．5％的NaClO溶液漂白。根据漂白速度以不同时
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1405·
间间隔取样，于显微镜下镜检。对照同上。
1．2．50．5％TTC染色时间的确定：将未去种皮的
种子放入直径9cm的培养皿，加入0．5％TTC溶液
直至完全淹没种子，于40℃培养箱内黑暗条件下染
色，每8h取样一次滤过。用0．2％NaCIO溶液漂白
2h后镜检，连续观察。因TTC溶液染色时，深红色
种子容易辨别和计数，因此将出现深红色种子数不
变的时间作为染色适宜时间。
1．2．6不同年限种子活力的测定：采用改进的方法
测定当年采收、贮藏1年和2年(5℃贮藏)的种子活
力，确定贮藏年限对种子活力的影响。
1．3数据处理：所有处理重复3次，每个重复用100
粒种子，采用SAS8．2软件对数据进行方差分析。
2结果与分析
2．1种皮对染色的影响：未去种皮的种子经TTC
染色后，由于种皮本身有颜色，无法看清楚种皮中胚
乳和胚的颜色，去种皮的种子经TTC染色后，种子
胚乳和胚的着色差异比较明显(图1)。
A一未去种皮种子以0．5％TTC染色B未去种皮种子以0．5％TTC染色后用于0．2％NaCIO漂白C一去种皮种子以0．5％TTc染色
A—seedswithtestastainedwith0．5％TTCsolutionB-seedswithtestastainedwith0．5％TTCsolutionandthenbleached
with0．2％sodiumhypochloritesolutionC—seedswithouttestastainedwith0．5％TTcsolution
图1种皮对染色的影响
Fig．1Effectof estaofC．derticolaseedsonseedstained
经TTC染色后用NaClO漂白并不影响种子活
力，去种皮和未去种皮的肉苁蓉种子与许月英等Ⅲ
的方法所测定的活力没有显著差异(表1)。这说明用
TTC测定肉苁蓉种子活力时，不必去种皮。
裹l去种皮和未去种皮的种子活力
Table1 Viabilityofseedwithoutandwithtesta
处理方法 活力／％
对照 92．3士1．2a
去种皮 93．0士2．6a
未去种皮 92．7士1．5a
同一列不同字母间差异显著P
PdO．05(followingtablesaresame)
2．2不同质量分数TTC溶液和染色时间的影响：
从表2可以看出，随着染色时间的延长，染色种子数
增加，但增加到一定时间后，染色种子数呈稳定。由
表3可知，0．1％、0．2％、0．5％的活力与对照差异不
显著，而1％的活力则与对照有显著差异。与0．1％和
0．2％TTC溶液染色时间相比，0．5％TTC溶液可
显著缩短观察时间，且染色效果较好。1％TTC溶
液染色时间虽短，但高质量分数时可能会导致丧失
活力的种子也染色，以致染色种子数增加[8]。
2．3 不同质量分数NaCl0溶液和漂白时间的影
响：从表4可知，随着漂白时问的增加，种皮颜色漂
表2不同质量分数溶液对种子活力的影响
Table2 EffectofTTCsolutionatvariousconcentrationonviabilityofC．deserticolaseeds
。一”表示未测定(下表同)
。一”meansomeasurement(followingtablesaresame)
万方数据
·1406· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
表3不同质量分数TTC下种子活力的方差分析
Table3 Variancea alysisofTTCsolution
atvariousconcentrationonviability
ofC．deserticolaseeds
TTC溶液／％ 种子活力／％
对照
0．1
0．2
O．5
1．0
种子活力由染色稳定初期的染色种子百分数确定
Seedviabilitywasexpresseda percentageofse dstained
ininitialtimewhichseedstainedstabilized
白的染色种子百分数增加，漂白时问延长，染成红色
的种子也会漂白，以致观察到的染色种子数下降。由
表5可知，0．1％和0．2％NaCIO溶液漂白后的活力
与对照差异不显著，0．5％的NaCIO溶液漂白后的种
子活力则与对照有显著差异，测得的种子活力偏低，
主要是漂白过程中强度较大，颜色变化快，难以控制
合适的漂白程度和时间。与0．1％NaClO溶液漂白4
h相比，0．2％NaCl0溶液漂白2h，省时且效果较好。
2．4 0．5％TTC染色时间的确定：染色8～16h的
种子未出现深红色种子；染色24～40h的种子才呈
现深红色，且随着染色时间的延长深红色的种子数
衰4不同质量分数NaCIO溶液对种子活力的影响
Table4 EffectofNaCIOsolutionatvariousconcentrationonviabilityofC．deserticolaseeds
表5不同质量分数NaCIO溶液下种子活力的方差分析
Table5 VarianceanalysisofdifferentNaClo
solutionatvariouscOncentratiOn
onviabilityofC．deserticolaseeds
NaCIO溶液／％ 种子活力／％
对照
0．1
0．2
0．5
92．3±1．2a
91．8士1．5a
93．5士0．6a
84．7士2．0b
种子活力由漂白后染色种子百分数最大值确定
Seedviabilitywasexpresseda maximumpercentageofseed
stainedduringbleaching
增加，颜色逐渐加深；48～56h的种子染色程度和数
目都稳定。因此可以认为0．5％TTC染色的适宜时
间为48h。
2．5不同年限种子活力差异：以TTC染色方法检
测5℃贮藏的种子活力时，通常表现为活力强的种
子颜色鲜明，活力弱的种子颜色较浅，没有活力的种
子不能染色。漂白后的肉苁蓉种子颜色分为4种：深
红色、红色、浅红色、无色。从表6可见，随着贮藏年限
的延长，种子活力在统计学上没有显著差异；但染成
深红色和红色的种子数目增加，贮藏2年和1年的种
表6贮藏时间对种子活力的影响
Table6 EffectofstoragetimeonviabilityofC．deserticolaseeds
子中高活力种子数与当年采收的高活力种子数差异
显著，贮藏年限长的高活力肉苁蓉种子数目增多。
3讨论
3．1 许月英等[7]测定肉苁蓉种子活力方法为先去
掉种皮，23℃染色16h。本实验中在未去除种皮情
况下，把TTC染色温度提高到40℃，染色时间延长
到48h，所测定的种子活力和许月英等[71方法测定
的活力没有差异。这个结果表明，提高染色温度，延
长染色时间能促进TTC染色和消除种皮对TTC染
色的影响，很多文献也有类似的报道‰9。。既然种皮
不影响TTC染色，实验中可以不去除种皮，减少不
必要的麻烦。然而，由于种皮有颜色导致不能直接观
察TTC的染色效果。本研究利用一定质量分数的
NaClO处理TTC染色后的肉苁蓉种子，能消除种皮
对染色观察的障碍，同时也不影响种子的活力测定
结果。文献报道小粒豆和牧草种子经TTC染色后，
用乳酸苯酚透明液透明种皮和稃壳，能消除种皮和
稃壳对染色观察的障碍[8]。因此，通过提高TTC染
色温度、延长染色时间和NaCl0漂白能方便快捷地
测定肉苁蓉种子活力，为科研和生产提供了一套简
便易行的方法。
3．2人工种植肉苁蓉时，选择高活力和完成后熟的
种子能提高接种率，缩短生产周期，省工省种子和提
高经济效益。文献报道肉苁蓉种子在自然环境下，要
b
b
b
b
a
2
5
2
O
2
●
●
●
●
●
i
1
1士士士士±
3
5
4
1
3
●
●
●
●
●
Z
Z
1
3
5
9
9
9
9
9
万方数据
中草蔼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1407·
经过2个冬季其胚才能完成后熟过程n0。。盛晋华等[4]
利用5℃下层积的种子，在1／2MS培养基上培养肉
苁蓉形成了吸器。这些文献的报道和本实验结果相
似：低温贮藏利于完成后熟和提高种子活力。1950年
Vallanceru3在研究黄独脚金Strigahermonthica种子
时也得到了同样的结论。关于低温贮藏提高种子活力
的机制是需要进一步研究的课题。
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野生竹黄菌生物学性状研究
林海萍，黄小渡，毛胜凤，张昕
(浙江林学院林业与生物技术学院，浙江临安 311300)
摘 要：目的 对竹黄菌生物学性状进行研究，可为人工培养与开发利用提供借鉴。方法 采用常规方法调查浙江
省竹黄资源，分析野生竹黄菌寄主竹种、优势寄主与生态环境，测定竹黄鲜质量变化。结果竹黄菌在浙江省大部
分地区都有分布，能在短穗竹、苦竹、早竹与篌竹上寄生，平均寄生率分别为18．4％、11．26％、10．83％、3．33％，其
中短穗竹为优势寄主，苦竹为寄主新记录。竹黄寄生率最高的生境为海拔100m以内，4、5月份平均气温22～26℃，
空气相对湿度85％～90％，光照强度2．5×10‘～4×10‘lx，湿润阴凉溪沟边的短穗竹纯林。从4月初到6月初，野生
竹黄鲜质量经历了从上升到下降的过程。结论竹黄开发潜力诱人，短穗竹上寄生的野生竹黄具有较大的开发利
用价值，5月中旬是竹黄采收的最佳季节。
关键词：竹黄菌；资源；寄主；生态环境；鲜质量变化
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1407—03
竹黄菌ShiraiabambusicolaP．Henn．是一种
寄生于竹子细嫩枝杆上的子囊菌，其子座竹黄为中
药，能营气卫血，破瘀止痛，恢复组织机能，增强体
质。主要药理作用有镇痛、抗炎、抗菌、抗癌、护肝和
保护心血管口]。竹黄有悠久与广泛的民间应用历史
与基础，在化学成分与药理作用方面的研究已较为
成熟，尤其是有效药用成分竹红菌素在临床上的应
用已引起国内外专家的浓厚兴趣∞]。较高的药用价
值与药用潜力使竹黄在全球日益备受关注[3]。竹黄
仅分布于中国东南部与日本，采收期又集中于每年
4～5月，资源极为有限，而目前人工培养技术尚不
成熟，还未能得到含有竹红菌素的人工培养子
座[1“]。本实验通过对竹黄菌生物学性状研究，为人
工培养与开发利用提供借鉴。
I材料与方法
1．1 浙江省竹黄资源调查：4---5月，在浙江省范围
内采用先南后北的方法，进行实地调查并采集标本，
填写调查表，记录采集时间、地点、寄主竹种、寄生
率、生态环境等。竹黄药材经浙江林学院森林病理学
教授张立钦鉴定。
1．2野生竹黄菌寄主竹种与优势寄主的确定：对调
查表寄主竹种一栏所做的记录进行整理与统计，得
出竹黄寄主植物范围。选择竹种不同，但生境基本相
同(均为海拔100m以内、溪沟边谷地、纯林且平均
气温、湿度、光照基本相同)的临安九仙山短穗竹、早
竹、篌竹与玲珑山苦竹林，每一竹林取30株竹子，重
收稿日期：2007—12-05
基金项目：浙江省科技厅科技计划项目(2008C32004)l浙江省森林培育重中之重学科开放基金资助项目(200524)
作者简介；林海萍(1973一)，女，浙江省台州市人，副教授，在读博士，硕士生导师，从事微生物学教学与科研．Tel：(0571)63732760
Fax：(0571)63740809E—mail：hplin@zjfc．edu．ca ·
万方数据
肉苁蓉种子的活力研究
作者： 陈庆亮， 张秀省， 郭玉海， 翟志席， 杨重军， 王华磊， CHEN Qing-liang， ZHANG
Xiu-sheng， GUO Yu-hai， ZHAI Zhi-xi， YANG Chong-jun， WANG Hua-lei
作者单位： 陈庆亮,郭玉海,翟志席,CHEN Qing-liang,GUO Yu-hai,ZHAI Zhi-xi(中国农业大学农学与生
物技术学院,北京,100193)， 张秀省,杨重军,ZHANG Xiu-sheng,YANG Chong-jun(聊城大学
农学院,山东,聊城,252000)， 王华磊,WANG Hua-lei(贵州大学农学院,贵州,贵阳,550025)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)
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引证文献(1条)
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