全 文 ：野生与栽培黄芪中毛蕊异黄酮苷的测定
陈有根1 3 ,辛敏通1 ,杨 　滨2 3
(11 北京市药品检验所 ,北京 　100035 ;21 中国中医科学院中药研究所 ,北京 　100700)
摘 　要 :目的 　通过定量分析比较野生与栽培黄芪药材中毛蕊异黄酮苷的质量分数差异 ,为评价不同来源的黄芪
药材的质量差异提供科学可靠的依据。方法 　采用高效液相色谱法测定 10 批野生与 12 批栽培黄芪药材中毛蕊
异黄酮苷的量。色谱条件 :ZORBAX SB2C18色谱柱 (150 mm ×4. 6 mm , 3. 5μm) ;流动相 :乙腈20. 1 %磷酸 ,梯度洗
脱 ;体积流量 :1 mL/ min ;检测波长 : 220 nm ;柱温 : 250 ℃。结果 　毛蕊异黄酮苷的工作曲线为 Y = 14 739 X -
5. 89 , r = 0. 999 2 ,线性范围为 0. 010～0. 015μg ,加样回收率为 104. 7 % ,RSD = 0. 78 % ( n = 6) 。10 批野生与 12
批栽培黄芪药材中毛蕊异黄酮苷的平均质量分数分别为 0. 21 mg/ g 和 0. 24 mg/ g。结论 　本方法测定结果准确、
重现性较好 ,可作为评价野生与栽培黄芪药材质量的方法之一。
关键词 :野生黄芪 ;栽培黄芪 ;毛蕊异黄酮苷
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921484202
　　黄芪为常用中药 ,来源于豆科植物蒙古黄芪
A st ra gal us membranaceus ( Fisch1 ) Bunge var1
mong hol icus (Bunge) Hsiao 或膜荚黄芪 A1 mem2
branaceus ( Fisch1 ) Bunge 的干燥根。化学成分研
究表明 ,黄芪中的主要有效成分为皂苷类、黄酮类和
多糖类化合物 ,药理研究[1～3 ] 证实 ,黄芪中的黄酮类
成分具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、维持血中
NO 浓度、保护缺血再灌注损伤、抗病毒和抗突变等
多种药理活性。由于黄芪具有广泛的药理作用 ,复
杂的化学成分是其物质基础 ,目前广泛采用的单指
标的质量控制方法难以有效地评价或控制黄芪药材
的质量。本研究对野生和栽培黄芪药材的黄酮类的
量进行定量分析 ,为多指标评价野生与栽培黄芪的
质量提供依据。
1 　仪器与试药
Agilent 1100 H PL C 色谱系统 ,包括二极管阵
列检测器 (DAD) ,四元低压梯度泵 ,真空脱气机 ,柱
温箱 ,自动进样器 ,Agilent A10. 02 工作站。乙腈为
色谱纯 ,水为超纯水 ,乙醇为分析纯。
毛蕊异黄酮苷为自制对照品 ,经 HPL C 归一化
法检测 ,质量分数大于 99. 0 %。
样品来源与编号见表 1 ,其中野生来源 10 批 ,
栽培来源 12 批。所有样品经陈有根博士鉴定 ,均为
豆科植物蒙古黄芪 A1 membranaceus Bunge var1
mong hol icus (Bunge) Hsiao 的根。
2 　方法和结果
2. 1 　色谱条件与系统适应性 :色谱柱为 Agilent
ZORBA X SB2C18 (150 mm ×4. 6 mm ,3. 5μm) ,流
动相 :A 相为水 (含有 0. 1 %磷酸) ,B 相为乙腈 ,梯
度洗脱 :2. 0 % B (0～4 min) ,2. 0 %～15. 0 % B (4～
10 min) ,15. 0 %～40. 0 % B (10～40 min) ,体积流
量为 1. 0 mL/ min ,检测波长为 220 nm ,柱温 25 ℃,
进样量为 10μL ,理论塔板数大于 100 000 ,分离度
大于 2。色谱图见图 1。
表 1 　药材样品来源
Table 1 　Origin of samples
编号 　药材来源 种植方式 编号 　药材来源 种植方式
0601 内蒙古赤峰 　栽培 0702 甘肃陇西首阳镇 　栽培
0602 内蒙古多伦 　野生 0703 甘肃漳县 　野生
0603 甘肃岷县 　野生 0704 甘肃漳县 　栽培
0604 甘肃陇西 　野生 0705 甘肃漳县三岔乡 　栽培
0605 甘肃甘谷 　野生 0706 内蒙古固阳 　栽培
0606 甘肃 (市购) 　栽培 0707 山西浑源 　半野生 3
0607 山西大同 　野生 0708 山西浑源 　横栽 3 3
0608 山西浑源 　野生 0709 山西应县 　野生
0609 山西浑源 　栽培 0710 吉林汪清 　栽培
0610 河北承德 　栽培 0711 内蒙古额尔古纳 　野生
0701 甘肃陇西 　栽培 0712 内蒙古乌拉特前旗 　栽培
　　3 为人工播种于野地中 ,未对其生长环境进行人工干预 ; 3 3
移栽时将主根横卧栽培3 Manual sowing in wild count ry , which is not interevened by
human being ; 3 3 Taproot was put in landscape orientation when it
was t ransplanted
2. 2 　对照品溶液的制备 :取适量毛蕊异黄酮苷 ,加
·4841· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2008211219　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :科技部“科研院所社会公益研究专项”课题 (2005DIA1J172)3 通讯作者　陈有根　Tel : (010) 66124422 　E2mail :ygchenphd @yahoo. com. cn
A2毛蕊异黄酮苷对照品　B2黄芪药材 (山西应县)
A2calycosin272O2β2D2glucoside reference substance
B2Radi x A st ragali ( Yingxian , Shanxi)
图 1 　毛蕊异黄酮苷及黄芪药材的 HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of calycosin272O2β2
glucoside and Radix Ast ragali
甲醇溶解 ,制得质量浓度为 1. 0 mg/ mL 的毛蕊异黄
酮苷的对照品储备液。
2. 3 　工作曲线与线性关系考察 :取毛蕊异黄酮苷的
对照品储备液 ,制成质量浓度分别为 1. 0、3. 0、6. 0、
9. 0、12. 0、15. 0μg/ mL 的系列对照品溶液 ,按上述
色谱条件进样 ,以对照品溶液的质量浓度 ( X) 为横
坐标 ,峰面积 ( Y ) 为纵坐标 ,计算得回归方程 Y =
14 739 X - 5. 89 , r = 0. 999 2。结果表明 ,进样量在
0. 010～0. 150μg 线性关系良好。
2. 4 　样品提取条件的确定 :分别对提取所选用的溶
剂和提取的时间进行了考察 ,根据试验结果 ,确定选
用 60 %乙醇 ,超声处理 (500 W ,40 k Hz) 20 min 为
提取条件。
2. 5 　供试品溶液的制备 :取黄芪药材细粉 0. 5 g ,精
密称定 ,置 25 mL 量瓶中 ,加入 60 %乙醇 20 mL ,超
声处理 20 min ,取出 ,放冷至室温 ,加 60 %乙醇至刻
度 ,摇匀。滤纸滤过 ,取续滤液 ,再用微孔滤膜滤过 ,
备用。
2. 6 　精密度试验 :取同一浓度的对照品溶液 (9. 0
μg/ mL) ,连续进样 5 次 ,测定毛蕊异黄酮苷的峰面
积 ,计算峰面积的 RSD 为 0. 16 %。
2. 7 　稳定性试验 :取同一浓度的对照品溶液 (9. 0
μg/ mL) ,分别在 0、2、4、6、8 h 进样 ,结果以峰面积
计算 RSD 为 0. 24 % ,表明毛蕊异黄酮苷在 8 h 内稳
定性良好。
2. 8 　重现性试验 :取编号为 0709 的药材样品细粉
0. 5 g ,精密称取样品 6 份 ,按“2. 5 供试品溶液的制
备”方法平行操作 ,测定其毛蕊异黄酮苷的量 ,结果
平均质量分数为 0. 30 mg/ g ,RSD 为 1. 7 %。
2. 9 　加样回收率试验 :取“重现性试验”项下药材细
粉 0. 25 g (毛蕊异黄酮苷的量为 0. 30 mg/ g) ,6 份 ,
置 25 mL 量瓶中 ,分别加入质量浓度为 0. 05 mg/
mL 对照品溶液 2. 5 mL ,加入 60 %乙醇 17. 5 mL ,
依法制成供试品溶液 ,测定 ,结果毛蕊异黄酮苷的平
均回收率为 104. 7 % ,RSD 为 0. 78 %。
2. 10 　样品测定 :分别取 22 批黄芪药材样品细粉
0. 5 g ,按 2. 5 项下方法制备供试品溶液 ,进样 ,测定
峰面积 ,工作曲线法计算毛蕊异黄酮苷的量。结果
见表 2。
表 2 　样品中毛蕊异黄酮苷测定结果 ( n = 3)
Table 2 　Determination of calycosin272O2β2D2glucoside
in Radix Ast ragali ( n = 3)
编号 毛蕊异黄酮苷/ (mg ·g - 1 ) 编号 毛蕊异黄酮苷/ (mg ·g - 1 )
0601 0. 24 0702 0. 19
0602 0. 05 0703 0. 18
0603 0. 20 0704 0. 28
0604 0. 06 0705 0. 19
0605 0. 13 0706 0. 22
0606 0. 23 0707 0. 48
0607 0. 24 0708 0. 63
0608 0. 55 0709 0. 30
0609 0. 12 0710 0. 23
0610 0. 22 0711 0. 05
0701 0. 10 0712 0. 20
3 　讨论
黄芪药材含有多种黄酮类成分 ,主要包括毛蕊
异黄酮苷、52羟基毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异
黄酮和芒柄花素 ,其中毛蕊异黄酮和芒柄花素为毛
蕊异黄酮苷和芒柄花苷的苷元。在这 5 种主要黄酮
类成分中 ,又以毛蕊异黄酮苷的量相对较高 ,本实验
以毛蕊异黄酮苷为定量测定指标 ,对野生黄芪药材
与栽培黄芪药材内在质量差异进行比较。
定量测定结果表明 : (1)野生黄芪药材与栽培黄
芪药材的平均质量分数基本接近 ,说明两种来源的
黄芪药材的毛蕊异黄酮苷的量无明显差异 ; (2)野生
黄芪药材由于生长年限不确定 ,质量分数差异较大
0. 05～0. 48 mg/ g ,其中有 3 批量低于 0. 10 mg/ g ,
而栽培黄芪药材栽培年限相对固定 ,质量分数差异
相对较小 ,多为 0. 20 mg/ g 左右 ,仅批号为 0708 样
品 (唯一的横栽来源的样品)的量比其他批号样品高
出许多 ,是否提示黄芪药材横栽时毛蕊异黄酮苷的
量高于竖栽 ,有待于进一步研究。
参考文献 :
[ 1 ] 　梁连生 , 余　静1 黄芪中黄酮化合物的药理作用 [J ]1 中西
医结合心脑血管病杂志 , 2005 , 3 (12) : 1085210871
[ 2 ] 　陈聪颖 , 陆　阳 , 陈泽乃 1 内蒙黄芪的研究概况 [J ]1 中草
药 , 2001 , 32 (6) : 56725691
[ 3 ] 　汪德清 , 田亚平 , 宋淑珍 , 等1 黄芪总黄酮抗突变作用实验
研究 [J ]1 中国中药杂志 , 2003 , 28 (1) : 1164211671
·5841·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月