全 文 ：515-518.
[ 7]　黄　熙,夏　天, 任　平 . 川芎伍用丹参煎剂对川芎嗪药物动
力学的影响[ J ] . 中国中西医结合杂志, 1994, 14( 5) : 288-291.
黄芪毛状根与栽培黄芪中多糖的比较
单俊杰, 王顺春,刘　涤,胡之璧X
(上海中医药大学 中药研究所,上海　200032)
摘　要: 目的　比较栽培黄芪和生物技术培养的黄芪毛状根总多糖的组成与含量。方法　采用脱脂、水煎、醇沉、脱
蛋白、透析、冷冻干燥的方法,用硫酸-苯酚法进行了二者中多糖的含量比较,采用高效液相凝胶渗透色谱法对黄芪
毛状根和黄芪多糖的指纹图谱进行分析、比较多糖的组成和相对分子量的同异。结果　黄芪多糖为 2. 61% ,黄芪毛
状根多糖为 1. 85%。结论　黄芪毛状根多糖低于栽培黄芪中多糖含量。
关键词: 黄芪毛状根;栽培黄芪; 多糖;高效凝胶渗透色谱法
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 05 0413 02
Comparison of polysaccharides between hairy root of Astragalus membranaceus
and its cultivation
SHAN Jun-jie, WANG Shun-chun, L IU Di, HU Zhi-bi
　　( I nstitute of Chinese Mater ia Medica, Shanghai Univ ersity o f TCM , Shanghai 200032, China)
Key words : hair y ro ot of A st ragalus membr anaceus ( Fisch. ) Bge. ; cult iv ated A . membranaceus;
po lysaccharides; high ef ficiency gel permeat ion chromato graphy
　　由于中药野生资源日益短缺, 栽培品种又面临
品质退化、农药污染和种子带病等问题,严重影响了
我国中药材的质量和数量, 给中医临床、中成药加工
带来很大的影响。因此, 80年代以来,采用生物技术
手段生产中药材已日益受到人们的重视。因为毛状
根具有遗传性状稳定、生长迅速、易于遗传操作等特
点而成为药用植物大量生产的新方法。本实验室已
建立了黄芪毛状根诱导、培养的技术 [ 1, 2] , 测定了其
中黄芪甲苷和异黄酮的含量,与栽培的黄芪相比,二
者成分相差不多[ 3]。为了全面评价黄芪毛状根的质
量,我们又对黄芪毛状根中多糖的组成和含量进行
了研究,发现与栽培黄芪存在一定的差异。我们将比
较的结果报道如下。
1　材料和方法
1. 1　材料:山西膜荚黄芪,由上海药材有限公司购
进;黄芪毛状根由本实验室培养; dext ran 系列标准
品,购自 Sigma 公司。
1. 2　多糖的提取流程:见图 1。其中黄芪的多糖得
率为 2. 61%,黄芪毛状根的多糖为 1. 85%。 图 1　多糖的提取流程
·413·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 5期
X 收稿日期: 2000-07-14基金项目:国家“九·五”攻关和上海市科委科学技术发展基金支持。作者简介:单俊杰( 1966-) ,女,山东烟台市人,工程师。1988年获南开大学化学系理学学士, 1997年获哈尔滨工业大学化学系工学硕士,
1998年于上海中医药大学中药研究所攻读博士学位,主要研究方向:多糖化学和免疫药理学。
1. 3　总多糖含量测定: 采用硫酸-苯酚法[ 4]测定多
糖的含量。
1. 3. 1　回归方程的建立:精密称取 D ( + ) -葡萄糖
(恒重) 0. 06 g 置于 1 000 mL 容器瓶中,加蒸馏水
溶解。分别取 0, 1, 2, 3, 4, 5 mL 稀释至 5 mL, 于
490 nm 波长处比色,测定吸光度,做吸光度 A 与浓
度 C(Lg/ mL) 线性回归处理,回归方程:
A = 0. 005 84+ 0. 013 41 C, r= 0. 996 7
1. 3. 2　样品中总多糖的含量测定:精确称取 0. 02
g 样品,加蒸馏水溶解释稀至 500 mL, 测定其吸光
度,计算多糖含量,结果见表 1。
表 1　样品多糖含量测定结果
　　　黄芪毛状根 黄芪
多糖含量
( % )
+ - + -
82. 60 82. 03 83. 72 90. 30
　　+ 表示未除蛋白的多糖; - 表示去除蛋白的多糖
1. 4　黄芪毛状根与黄芪中多糖成分的比较:采用高
效液相凝胶渗透色谱法分折多糖的组成和相对分子
量[ 5]。液相色谱仪: Waters 600 泵, 410 示差析光检
测器;色谱柱: Bio SEP-sec-S 4000 ( Phenomenex 公
司) ; 色谱条件: 以蒸馏水为流动相, 流速为 1 mL/
min; 多糖标准品: dex t ran ( Sigma 公司) , 相对分子
量为 1. 04×104 , 4. 3×104, 6. 9×104, 8. 0×104,
3. 0×105, 4. 6×105, 5. 8×105, 2. 0×106 u(标准蓝
色葡聚糖)。将多糖标准品取 3 mg 上柱,精确测出
各自的洗脱体积 Ve,得出与分子量对数关系的标准
曲线, 回归处理, 得校正工作曲线方程为: K av =
2. 835 8- 0. 472 5 logMr , r= 0. 981 8。然后以同样
条件测定多糖的洗脱体积,在标准曲线上查出相应
的分子量。
2　结果和讨论
2. 1　蛋白质变性剂对黄芪多糖含量的影响:为了获
得较纯的多糖,我们在多糖提取和纯化过程中加入
了蛋白质变性剂三氯乙酸( 10% ) , 目的是去除多糖
中的蛋白质和与多糖结合的多肽,提高多糖的纯度。
变性剂的加入在黄芪毛状根和黄芪提取物中引起不
同变化,前者多糖含量几乎没有改变,而后者黄芪多
糖含量减少 7%左右, 造成这种差异的原因可能与
器官的生长时间有关, 黄芪毛状根生长时间为 21
d,而栽培黄芪长达 3年,这样造成二种根中多糖和
　　　黄芪总多糖　　　　　　　黄芪毛状根总多糖
峰 1-12. 46; 2-17. 96; 3-25. 21　峰 1-12. 09; 2-13. 44; 3-16. 97
图 1　样品色谱图
蛋白质的含量不同。
2. 2　黄芪毛状根和栽培黄芪中多糖含量的比较: 采
取本方法从黄芪毛状根和栽培黄芪中提取多糖, 经
定量分析发现前者多糖含量低于后者。由于使用的
方法不同,本结果和以前报道有所不同。本方法增加
了透析步骤,使小分子多糖流失造成小分子含量较
多的黄芪毛状根多糖含量低于栽培黄芪。
2. 3　黄芪毛状根和栽培黄芪中多糖组分的比较: 从
黄芪毛状根和黄芪中多糖的比较可以发现,二者均
含有保留时间为 12 min (相对分子量约 9. 02×105
u) 和 17 min (相对分子量约 1. 23×105 u)的组分,
然而不同的是黄芪毛状根中存在保留时间为 13. 4
m in 的峰(相对分子量约 5. 0×105 u) ,黄芪中并不
存在这个峰, 黄芪中存在含量较高保留时间为 25
m in(相对分子量低于 1万 u)的峰,黄芪毛状根都没
有或很少。
二种黄芪多糖药理活性的研究正在进行之中。
参考文献:
[1]　胡之璧,郑志仁,李幸平,等 . 黄芪毛状根培养系统的建立和外
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生理学通讯, 1997, 33( 2) : 133-134.
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活性比较[ J ] . 生物工程学报, 1998, 14( 2) : 153-156.
[ 4] 　Dubis M . Colorim et ric meth ods for determinat ion of sugar s
and related subs tances [ J] . Anal Chem, 1956, 28: 350-354.
[5]　魏远安,方积年 . 高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量
[ J ] . 药学学报, 1989, 24: 523.
　　1999年中国科技论文统计分析报告新闻发布:按全国1 372种主要科技期刊
总被引频次排序,《中草药》杂志名列全国期刊第 18名。
·414· 中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 5期