全 文 ：哮喘宁片的质量标准研究
庾燕珍, 邓慧敏,何文玲*
(广州中一药业有限公司, 广东 广州 510530)
摘 要:目的 为哮喘宁片建立一个科学、全面的质量控制标准。方法 利用薄层色谱法对哮喘宁片中的麻黄、五
味子、远志进行定性鉴别, 采用高效液相色谱法测定制剂中麻黄的有效成分盐酸麻黄碱。结果 麻黄、五味子和远
志可在不同的薄层色谱条件下分别检出;利用高效液相色谱法测定制剂中麻黄的有效成分盐酸麻黄碱。盐酸麻黄
碱的线性范围为 41 7~ 751 5Lg / ml,平均回收率为 1001 05% , RSD 为 21 21% ( n= 6)。结论 建立的定性和定量方
法均具有专属性好、准确可靠和简便的特点, 能有效的对哮喘宁片进行质量控制。
关键词:哮喘宁片; 麻黄;五味子; 远志;薄层色谱; 盐酸麻黄碱;高效液相色谱
中图分类号: R286. 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2009) 05 0736 03
哮喘宁片是由麻黄、太子参、五味子、远志、胆南
星、石膏、洋金花和甘草组成的复方制剂, 具有镇咳
定喘,消炎化痰的功效, 主要用于支气管哮喘, 慢性
咳嗽,气急。哮喘宁片收载于5中华人民共和国卫生
部药品标准6中药成方制剂第 4册,由于该部颁标准
要求已经偏低, 故对原标准进行了再研究。本研究
经过多次摸索, 增订了麻黄、五味子、远志药材的薄
层色谱鉴别,同时采用高效液相色谱法对方中有效
成分盐酸麻黄碱进行了定量分析研究, 获得了满意
的效果。
1 仪器与材料
Agilent 1100高效液相色谱仪, VWD检测器,
Agilent 1100化学工作站, Met ter AE 100型电子天
平, M ett le XS 205型电子天平, KQ ) 200VDB 型双
频数控超声波清洗器(功率 120 W, 频率 40 kHz) ,
GAMAG薄层色谱扫描摄像系统。
盐酸麻黄碱(批号: 714-8501)、五味子甲素(批
号: 0764-9804 ) 对照品, 五味子 ( 批号: 120922-
200505)、远志(批号: 120989-200304)对照药材均由
中国药品生物制品检定所提供; 薄层色谱用硅胶 G
和硅胶 GF 254为青岛海洋化工厂生产; 乙腈、甲醇为
色谱纯,水为超纯水,其他试剂为分析纯。哮喘宁片
及各阴性对照样品均为广州中一药业有限公司
提供。
2 薄层色谱鉴别
21 1 麻黄的薄层色谱鉴别:取本品 15 片, 研细, 加
浓氨试液 20 滴, 再加氯仿 10 mL, 加热回流 1 h, 滤
过,滤液蒸干, 残渣加甲醇 1 mL 使溶解, 作为供试
品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品, 加甲醇制成 1
mg/ mL 的溶液, 作为对照品溶液。照薄层色谱法
( 5中国药典62005年版一部 附录 Ö B)试验,吸取上
述两种溶液各 5 LL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板
上,在用浓氨试验预饱和的展开缸里, 以甲苯-氯仿-
甲醇( 5 B20 B2)为展开剂, 展开,取出,晾干,喷以茚
三酮试液, 105 e 加热至斑点显色清晰[ 1] , 结果见图
1。可见供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置
上,显相同颜色的斑点,阴性对照色谱在相应位置上
无干扰。
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1~ 3-哮喘宁片 4-盐酸麻黄碱对照品 5-阴性对照
1 ) 3-Xiaochuanning Tablet s 4- eph edrine h ydrochloridum
reference sub stance 5- negat ive sample
图 1 哮喘宁片中麻黄的薄层色谱图
Fig. 1 TLC Chromatogram of Herba Ephedrae
in Xiaochuanning Tablets
#736# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
* 收稿日期: 2008- 09-25 作者简介:庾燕珍( 1981 ) ) ,女,广东广州人,制药助理工程师,理学学士,毕业于中国药科大学,研究方向为药品质量标准研究。
T el : (020) 82091902 E-mail: fis h3130@ 21cn. com
21 2 五味子的薄层色谱鉴别: 取本品 15 片, 研细,
加氯仿20 mL,加热回流 30 m in,滤过, 滤液蒸干, 残
渣加氯仿 1mL 使溶解,作为供试品溶液。取五味子
对照药材 1 g 同法制成对照药材溶液。再取五味子
甲素对照品,加氯仿制成 1 mg / mL 的溶液, 作为对
照品溶液。照薄层色谱法( 5中国药典62005年版一
部附录Ö B)试验,吸取上述3种溶液各 5 LL,分别
点于同一硅胶 GF 254薄层板上, 以甲苯-醋酸乙酯
( 9B 1)为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外灯 ( 254
nm)下检视[ 1] , 结果见图 2。可见供试品色谱中, 分
别在与对照药材、对照品色谱相应的位置上, 显相同
颜色的斑点,阴性对照色谱在相应位置上无干扰。
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1~ 3-哮喘宁片 4-五味子对照药材 5-五味子甲素对照品
6-阴性对照
1 ) 3-Xiaochu annin g T ab let s 4-Fr uctus S chi san drae
5-deox yschiz andrin reference su bstance 6-negat ive sample
图 2 哮喘宁片中五味子的薄层色谱图
Fig. 2 TLC Chromatogram of Fructus Schisandrae
in Xiaochuanning Tablets
21 3 远志的薄层色谱鉴别:取本品 20 片, 研细, 加
盐酸无水乙醇溶液( 10y 100) 30 mL, 水浴加热回流
30 min, 取出,放冷,滤过, 滤液加水 45 mL, 用氯仿
提取 2次,每次 30 mL, 合并氯仿液,蒸干, 残渣加醋
酸乙酯 1 mL 使溶解, 作为供试品溶液。另取远志
对照药材 1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱
法( 5中国药典62005年版一部附录 Ö B)试验, 吸取
上述两种溶液各 5 LL,分别点于同一硅胶 G薄层板
上,以氯仿-丙酮-正已烷-乙酸( 15B 3B 01 3B 01 5)为
展开剂,展开,取出, 晾干,喷以 8%香草醛无水乙醇
溶液与硫酸乙醇溶液( 7 y10)按 1 B 10的比例配制
而成的溶液[ 2] , 105 e 烘至斑点清晰, 结果见图 3。
可见供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置
上,显相同的紫罗兰色斑点,阴性对照色谱在相应位
置上无干扰。
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1~ 3-哮喘宁片 4-远志对照药材 5-远志阴性对照
1 ) 3-Xiaochuanning T ablet s 4-Rad ix P olyg alae
5-negat ive sample
图 3 哮喘宁片中远志的薄层色谱图
Fig. 3 TLC Chromatogram of Radix Polygalae
in Xiaochuanning Tablets
3 盐酸麻黄碱的测定
31 1 色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
( 200 mm @ 41 6 mm , 5 Lm) ; 01 02 mo l/ L 磷酸二氢
钾(加 01 1%三乙胺和 01 1%磷酸)-乙腈( 95 B 5)为
流动相;检测波长为 207 nm;进样量 10 LL。
31 2 对照品溶液的制备:精密称取盐酸麻黄碱对照
品适量,加 01 1 mol/ L HCl溶液制成 10Lg/ mL 的
溶液,即得。
31 3 供试品溶液的制备: 取重量差异项下的本品,
研细,取 11 0 g,精密称定,置 50 mL 具塞锥形瓶中,
精密加入浓氨试液 1 mL 使湿润, 再精密加入 25
mL 二氯甲烷,称定质量,超声处理 30 m in, 放冷,称
定质量,用二氯甲烷补足减失的质量,滤过,取续滤
液 10 mL,置 25 mL 蒸发皿中,加入1 mL 盐酸乙醇
溶液( 1 y20) ,低温蒸干, 残渣加盐酸乙醇溶液( 1 y
20)适量使溶解, 转移至 25 mL 量瓶中, 加 01 1
mol/ L HCl溶液洗涤容器并稀释至刻度, 摇匀, 用
01 45 Lm微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。
31 4 阴性对照溶液的制备: 按处方及制法,制成缺
麻黄药材的阴性对照样品。取相当于供试品的量,
按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
31 5 线性关系考察: 精密量取 01 094 4 mg / mL 盐
酸麻黄碱对照品溶液 01 5、1、2、4、6、8 mL,置 10 mL
量瓶中, 加 01 1 mol/ L HCl至刻度, 摇匀。分别精
#737#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
密吸取 10 LL, 注入液相色谱仪, 进样测定。以质量
浓度为横坐标, 测得的峰面积为纵坐标,绘制标准曲
线,得回归方程: Y= 22 9371 242 7 X+ 31 528 8, r=
01 999 94。结果表明, 盐酸麻黄碱在 41 7 ~ 751 52
Lg/ mL 与其峰面积呈良好的线性关系。
31 6 专属性试验: 精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶
液、供试品溶液和阴性对照溶液各 10 LL,分别注入
液相色谱仪,进样测定,见图 4。结果未见阴性对照
品溶液对试验有干扰。
1-盐酸麻黄碱
1- ephedrine hydrochloridum
图 4 盐酸麻黄碱对照品(A)、哮喘宁片( B)和阴性对照
样品(C)的 HPLC图谱
Fig. 4 HPLC Chromatograms of ephedrine hydroch-
loridum ( A) , Xiaochuanning Tablets (B) ,
and negative sample ( C)
31 7 精密度试验:取同一份供试品溶液重复进样 5
次, 测定盐酸麻黄碱峰面积, 计算, 其 RSD 为
01 87%。
31 8 重现性试验:取批号 20071205样品 6份,制备
供试品溶液,进样测定,结果计算得盐酸麻黄碱平均
质量分数为 01 7183 mg/ g, RSD为 21 75%。
31 9 稳定性试验:取同一份供试品溶液, 分别在 0、
2、4、8 h进样测定盐酸麻黄碱峰面积值,计算, 结果
RSD为 11 00%,表明供试品溶液制备后 8 h内测定
基本稳定。
31 10 回收率试验: 取批号 20071205 的供试品 6
份,每份 01 5 g ,分别精密加入 01 090 6 mg/ mL 盐酸
麻黄碱对照品溶液 5 mL, 制备供试品溶液, 进样测
定,计算盐酸麻黄碱的回收率。结果平均回收率为
1001 05%, RSD为 21 21%
31 11 样品测定: 取哮喘宁片 (规格 01 35 g /片) 4
批,每批 2份,制备供试品溶液, 另取盐酸麻黄碱对
照品溶液 2份,进样测定,用外标法计算样品中盐酸
麻黄碱的质量分数,结果见表 1。
表 1 哮喘宁片中盐酸麻黄碱的测定结果(n= 2)
Table 1 Determination of ephedrine hydrochloridum
in Xiaochuanning Tablets ( n= 2)
批 号 盐酸麻黄碱/ ( m g #片- 1)
20071205 0. 257 3
SZ080101 0. 224 7
SZ080102 0. 222 1
SZ080103 0. 231 4
4 讨论
在远志的薄层色谱鉴别中, 曾尝试多种展开系
统和显色剂,发现斑点分离不好, 显色效果不理想,
最终以氯仿-丙酮-正已烷-乙酸( 15 B 3B 01 3B 01 5)
展开,以 8%香草醛无水乙醇溶液与硫酸乙醇溶液
( 7 y10)按 1B 10的比例配制而成的溶液显色, 色谱
清晰,样品斑点分离良好。
在测定中,采用回流提取、超声提取等多种提取
方法进行了试验, 比较了不同时间超声提取,在流动
相上比较了 ¹ 01 05 mo l/ L 磷酸二氢钠-甲醇不同比
例, º磷酸盐缓冲液( 2 g 磷酸二氢钾+ 2 mL 三乙
胺+ 2 mL 磷酸)-甲醇( 30 B 70) , »01 02 mol/ L 磷
酸二氢钾溶液(含 01 1%三乙胺, 用磷酸调 pH 值至
21 7)-乙腈( 96 B 4) , ¼ 01 02 mol/ L 磷酸二氢钾(加
01 1%三乙胺和 01 1%磷酸)-乙腈( 95 B 5) , 结果以
¼ 01 02 mol/ L 磷酸二氢钾 (加 01 1% 三乙胺和
01 1%磷酸)-乙腈( 95 B 5)为流动相效果最好, 供试
品中盐酸麻黄碱峰达到基线分离,峰形对称,保留时
间适中。对不同色谱柱进行了考察, 取同一供试品
溶液进行测定,分别考察使用Waters At lantisR C18
( 150 mm @ 41 6 mm, 5 Lm)、Kromasil 100-5 C18
( 200 mm @ 41 6 mm, 5 Lm)和 Alltech Allt ima C18
( 150 mm @ 41 6 mm , 5 Lm) 3 种色谱柱对盐酸麻黄
碱测定的影响。实验表明,不同厂家色谱柱对测定
结果的影响很小。
参考文献:
[ 1] 中国药典[ S] . 一部. 2005.
[ 2] 刘友平,万德光. 薄层扫描法测定远志中远志皂苷元的含量
[ J] .中草药, 2000, 31( 7) : 512-514.
#738# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月