全 文 ：形成有发芽能力的成熟种子, 种子的成熟过程不只
是在形态上发生很大变化, 而且在生理生化上也发
生剧烈变化。对桔梗种子成熟过程中生理变化的研
究表明,桔梗种子成熟过程是一个生理特性逐步变
化的过程;种子发育期, 电导率逐渐下降, 细胞膜完
整性趋于完善, 膜的选择透性也不断提高; 此时
POD活性先平缓下降,而后逐渐升高直到种子完全
成熟, 之后又下降;而 MDA 的量随着种子的成熟老
化有一个逐步积累的过程。值得注意的是, 当种子
发育到开花后的第 61天时,其总体生理性能达到最
佳状态,保护酶活性最高可有效消除自由基对种子
造成的伤害,细胞膜完整性最好,可有效防止由于细
胞内容物的大量外渗而引起的种子带菌, 此时种子
活力和发芽率也达到最高值, 之后随着种子的田间
腐蚀老化,各项指标迅速劣变,因此认为开花后61 d
收获的种子其性能达到最佳状态。
严一字[ 10]等研究了桔梗种子成熟过程中千粒
质量、成熟度变化及与发芽率的关系后认为, 千粒质
量最大时的种子发芽率也最高, 这一结论与笔者的
研究结果不符, 可能是由于研究中所用材料不同引
起的。本研究表明随着种子不断成熟千粒质量不断
增加,开花后 55 d 达到最大, 但此时种子发芽率仅
为 531 0%,而桔梗的最高发芽率出现在开花后的第
61天;开花后 55~ 61 d千粒质量开始逐渐下降, 但
发芽率却迅速上升, 61 d时达到最大为 931 3%。这
种现象提示桔梗种子达到形态成熟后, 在其内部可
能还需经历一个复杂的生理后熟过程, 才能达到种
子的完全成熟, 完成生理后熟作用的时间在开花后
55~ 61 d, 完成这一过程约需 6 d。
种子千粒质量在开花后 55 d达到最大之后开
始下降,千粒质量下降的原因可能与桔梗种子的生
理后熟作用有关, 种子后熟作用发生在秋季,此时气
候已由暖入寒,季节变化引起桔梗物质生产逐渐减
慢、生长停止,地上部分开始变黄枯萎, 而此时储存
在植株中的有机物质主要流向桔梗的主要代谢库根
部,而不是种子; 另一方面,种子后熟过程中呼吸作
用急剧加强,种子贮存物被大量消耗而使种子变轻,
造成千粒质量下降。
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啶虫脒在枸杞中的残留动态分析
周 峰1 , 于 晶1 ,李卫建2 ,陈 君1* ,徐 荣*
( 11 中国医学科学院北京协和医学院 药用植物研究所,北京 100193; 21 农业部环境质量监督检验测试中心,天津 300191)
摘 要:目的 研究啶虫脒在枸杞中的残留动态。方法 采用气相色谱法, 样品经乙腈提取, 弗罗里矽色谱柱净
化,采用 H P-5 柱, 载气为氮气,体积流量 1 mL / min; 进样口温度 200 e 、柱温 180 e 、检测器 320 e 。结果 样品
的添加回收率为 891 5% ~ 931 5% , RSD 为 21 19%。啶虫脒在枸杞中的半衰期为 21 16 d,施药 14 d 后残留量降至
91 3 Lg/ kg, 最终残留在 41 0 Lg / kg 以下。结论 在正常喷药浓度的加倍剂量1 000倍条件下, 根据不同标准,枸杞
的安全采收间隔期为 5~ 9 d 以上。
关键词:啶虫脒; 枸杞;残留动态; 气相色谱法
#303#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
* 收稿日期: 2008- 05-28基金项目:科研院所社会公益研究专项( 2004DIB1J039)作者简介:周 峰( 1984 ) ) ,男,中国医学科学院药用植物研究所 06级硕士研究生,研究方向为药用植物栽培与保护。
T el : (010) 62820904 E-mail: f eng5412@ 1261 com
* 通讯作者 陈 君 T el: ( 010) 62899731 E- mail: junzichen@ 2631 com
中图分类号: R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2009) 02-0303-03
枸杞为茄科植物宁夏枸杞 L y cium bar bar um
L1 的成熟果实。由于枸杞的果、叶、枝梢鲜嫩,营养
丰富,因此易遭受多种病虫危害,其中尤以枸杞蚜虫
危害为甚,严重时可使枸杞减产 50%以上, 给杞农
造成巨大的经济损失[ 1] 。目前,啶虫脒已被广泛用
来防治果树和蔬菜上的蚜虫[ 2~ 4] ,但用于防治枸杞
蚜虫及其在枸杞上的安全使用研究却未见报道。笔
者于 2006年 6月在宁夏枸杞产区,利用啶虫脒对枸
杞蚜虫进行防治。为了评价该农药的使用对枸杞采
收的安全性等问题,本研究采用气相色谱法对啶虫
脒在枸杞中的残留动态进行了研究,旨在为枸杞的
安全生产提供科学依据, 同时对制定啶虫脒在枸杞
害虫防治中的安全采收间隔期也具有重要的指导
意义。
1 仪器与试剂
Agilent 5890 气相色谱仪 (配有 L-ECD 检测
器) , 匀浆机,氮吹仪、旋涡混合器。
啶虫脒对照品: 质量分数 991 8% (农业部农药
检定所) ; 乙腈、丙酮、醋酸乙酯、甲醇、氯化钠均为分
析纯;弗罗里矽( F lorisil)固相萃取柱( 6 mL, 1 000
mg)。
2 田间试验材料与方法
21 1 试验药剂: 3%啶虫脒乳油( EC,日本曹达株式
会社)。
21 2 试验地点及材料:宁夏永宁, 4年生枸杞(中国
医学科学院药用植物研究所陈君研究员鉴定)。
21 3 试验器具: 鑫达 3WBS ) 16 背负式手动喷雾
器(台州市路桥福达喷雾器厂)。
21 4 防治对象:枸杞蚜( Ap his sp1 )。
21 5 小区设计: 3%啶虫脒乳油正常浓度的加倍剂
量1 000倍和清水空白对照 2个处理,每处理 3个重
复,共 6个小区,每小区 6株, 随机排列,小区间设保
护行。
21 6 施药方法:田间喷雾施药,时间为 2006年 6月
21日上午 9: 00~ 10: 00, 对小区内枸杞按设计浓度
均匀喷药。
21 7 采样:采用一次施药多次采样的方法, 分别于
当天(施药后 1~ 2 h) , 1、3、5、7、10、14、21 d后取成
熟果实,每株按东西南北、上中下均匀采样, 每小区
采枸杞鲜果约 400 g , ) 20 e 低温冰箱保存。
3 分析方法与结果
31 1 气相色谱条件: 色谱柱为 HP-5 柱 ( 30 m @
01 25 mm @ 01 25 Lm) ;载气:氮气,体积流量: 1 mL/
m in;尾吹: 氮气, 体积流量: 60 mL/ min; 分流比:
10 B1, 进样量: 1 LL; 进样口温度: 200 e ; 检测器:
320 e ;柱温: 180 e ,保持2 min, 以15 e / m in升至
280 e ,保持 10 min, 最小检出量为 41 0 pg ;最小检
出质量浓度为 4 Lg/ L。在此条件下的色谱图见
图 1。
t/ min
1-啶虫脒
1-Acetam iprid
图 1 啶虫脒对照品(A)及枸杞施药样品(B)气相色谱图
Fig1 1 GCChromatograms of Acetamiprid ref erence
substance ( A) and L1 barbarum fruits (B)
31 2 样品制备:从 ) 20 e 低温冰箱中取出枸杞样
品,鲜样捣碎备用。
31 3 供试品溶液的制备:准备称取 251 0 g 样品,加
入 501 0 mL 乙腈, 在匀浆机中高速匀浆 2 min后用
滤纸滤过, 滤液收集到装有 5~ 7 g 氯化钠的 100
mL 具塞量筒中,盖上塞子, 剧烈震荡 5 min, 在室温
下静置 30 m in,使乙腈相和水相分层; 吸取 101 0 mL
上层滤液放入150 mL 的烧杯中, 80 e 氮吹近干,用
51 0 mL 丙酮溶解;将弗罗里矽柱用51 0 mL 丙酮-醋
酸乙酯( 2B 1)预淋条件化, 将上述提取液加入柱中,
依次用丙酮-醋酸乙酯( 2B 1) 40 mL、丙酮-甲醇( 1B
1) 10 mL 洗脱, 收集洗脱液, 浓缩至近干, 用丙酮准
确定容至 51 0 mL, 在旋涡混合器上混匀, 供色谱
测定。
31 4 对照品溶液的制备: 精密称取啶虫脒对照品
11 0 mg,加丙酮溶解并定容至 10 mL,摇匀, 制成质
量浓度为 1001 0 mg/ L 的对照品储备液。从中精密
吸取 01 1 mL,置于 50 mL 量瓶中, 加丙酮稀释至刻
度,摇匀,配制成 01 2 mg/ L 对照品溶液。
31 5 标准曲线的绘制:将上述对照品储备液用丙酮
稀释, 配制 01 50、01 20、01 10、01 04、01 008 mg / L 的
对照品溶液系列,进样 20 LL 测定,以质量浓度为横
坐标, 峰面积为纵坐标, 得标准曲线方程为 Y =
99 183 X ) 340173 , r = 01999 8 , 表明啶虫脒质量
#304# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
浓度在 01 008~ 01 5 mg / L 与峰面积有良好的线性
关系。
31 6 精密度试验: 在上述色谱条件下, 精密吸取
01 2 mg / L 啶虫脒对照品溶液 20 LL, 连续进样 5
次,记录峰面积值,其 RSD为 11 09%。
31 7 重现性试验: 精密称取第 5天样品 5 份, 按供
试品溶液的制备方法制备, 依上述色谱条件进行测
定,结果样品中啶虫脒的平均残留为01 188 9 mg/
kg , RSD为 11 97%。
31 8 稳定性试验:将第 5天样品的供试品溶液置室
温下,依建立的色谱条件, 分别于样品处理后 0、2、
4、8 h时进样测定。结果显示, 供试品溶液在室温
下 8 h 内测定结果稳定, 啶虫脒色谱峰面积 RSD
为 11 55%。
31 9 加样回收率试验: 称取 20 g 空白样品于三角
瓶中,加入 11 0 mg / L 的啶虫脒对照品液, 制成 01 2
mg/ kg 的样品, 按 31 3 方法进行处理分析, 结果表
明,枸杞中啶虫脒的平均回收率为 911 5%, RSD 为
21 19%( n= 3) ,符合农药残留分析要求。
31 10 样品残留动态分析:对采回的 8批样品(空白
对照样品与施药样品)按 31 3方法进行处理分析, 残
留动态曲线见图 2。对残留动态数据进行回归处
理,残留动态曲线符合一级动力学方程, 3% 啶
虫脒乳油在枸杞中的残留动态方程为: Ct= 01909 7
e
) 01321 5 t
( r = 01991 1 ) , t 01 5 = 21155 9 d, t 01 9 =
71 164 6 d;施药后 2 h 的原始沉淀量为01 741 7 mg/
kg , 14 d后残留量为 91 3 Lg / kg, 21 d后未检出。
图 2 啶虫脒在枸杞中的消解动态
Fig1 2 Residue trends of Acetamiprid
in L1 barbarum fruits
4 讨论
41 1 枸杞中含有大量糖分和油类,提取液极易产生
乳化现象,加入适量氯化钠,再进行萃取, 可以有效
地防止乳化现象的产生 [ 5] ; 考虑到枸杞中其他成分
对分离效果的影响,在萃取之后又采用过弗罗里矽
柱进行净化,从而得到理想的分离效果。
41 2 枸杞是中华人民共和国卫生部第一批公布的
药食同源品种,除了作为中药材使用外,枸杞还被加
工成药酒、鲜果汁等食品和保健品。目前关于啶虫
脒在枸杞上最大残留限量( MRLs)的研究还很少,
粮农组织/世界卫生组织及我国尚未制定啶虫脒在
枸杞上的 MRLs, 日本的肯列表也未对啶虫脒的
MRLs制定相关标准,美国、加拿大和欧盟等国家只
规定了啶虫脒在水果蔬菜等食品中的 MRLs, 韩国
( 2006年 9月)规定啶虫脒在中药材黄芪和红花上
的 MRLs为 01 1 mg/ kg ,孙楠等[ 6] 参照加拿大健康
部有害物管理协调局( PMRA)所规定的啶虫脒在可
食用菊花叶上的最大残留限量, 将金银花的 MRLs
定为 3 mg/ kg ,但黄芪是根类药材,红花和金银花则
是花类药材, 而枸杞则是果实类药材。枸杞和葡萄
都属于浆果,且均可以加工成酒类和果汁,具有相似
的食用方法,参照加拿大 PMRA( 2005年 7月)在葡
萄上的 MRLs为 01 2 mg/ kg ,代入上式枸杞残留动
态方程中,得出在正常喷药浓度的加倍剂量1 000倍
条件下,采收离施药间隔为 5 d以上, 收获的枸杞是
安全的。参照美国( G/ SPS/ N/ U SA/ 1434/ Add1 1,
2008年 1 月) 规定啶虫脒在矮树浆果亚组上的
MRLs为 01 06 mg/ kg ,安全间隔期为 9 d以上。枸
杞如果作为饮片泡水, 可以参考欧盟茶叶委员会
( ET C, 2007 年 3 月 ) 制定的啶虫脒在茶叶上的
MRLs为 01 1 mg/ kg, 安全间隔期为 7 d以上。
41 3 采用气相色谱法测定枸杞中啶虫脒的残留量,
回收率高,保留时间较短, 分离效果好, 各项指标符
合农药残留分析的要求, 适用于枸杞中啶虫脒残留
的检测和枸杞质量的评价。啶虫脒在枸杞中的残留
动态分析为枸杞的安全生产及评价啶虫脒的安全性
提供科学依据,对制定啶虫脒在枸杞中的安全采收
间隔期也具有重要的指导意义。
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#305#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月