全 文 ：metabolites f rom multiple cytochrome P450 probe subst rates
in human liver microsome by liquid chromatography/ mass
spect romet ry : application to high2t hroughput screening for
cytochrome P450 inhibition effect of terpenoids [J ]1 Rapi d
Commun M ass S pect rom , 2007 , 21 : 63526431
[ 4 ] 　苏启表 , 和　凡 , 卢宇靖 , 等1 抗肿瘤活性物 SYU IQ25 对 大鼠肝组织细胞色素 P450 基因表达的影响 [J ]1 中国基层医药 , 2006 , 13 (5) : 72127221[ 5 ] 　Deng Y , Bi H C , Zhao L Z , et al . Induction of cytochromeP450s by terpene t rilactones and flavonids of t he Gink gobiloba ext ract EGb 761 in rat s [J ]1 Xenobiotica , 2008 , 38 :46524811
广藿香挥发油对肠屏障功能的保护作用
谢肄聪 ,唐 　方 3
(天津医科大学总医院 中医科 ,天津 　300052)
摘 　要 :目的 　研究广藿香挥发油对缺血2再灌注大鼠肠屏障功能的保护作用。方法 　采用肢体缺血2再灌注模型 ,
观察肠上皮组织形态、肠黏液分泌量及肠黏膜肥大细胞数目 ,检测血浆二胺氧化酶 (DAO) 活性。结果 　与对照组
比较 ,模型组小鼠肠黏膜结构损伤明显 ,肠黏液分泌量明显减少 ( P < 0101) ,肥大细胞数目明显增多 ( P < 0101) ,
血浆 DAO 活性降低 ( P < 0101) 。广藿香挥发油能显著提高肠黏液分泌量 ( P < 0101) ,能显著减少肥大细胞数目
( P < 0105、0101) ,并能降低血浆 DAO 活性 ( P < 0105、0101) ,减轻肠黏膜上皮结构的损伤。结论 　广藿香挥发油
对缺血2再灌注损伤的肠屏障功能的保护作用机制与增加肠黏液分泌量 ,减少肠黏膜肥大细胞数目 ,降低 DAO 活
性并维持正常的肠黏膜上皮结构有关。
关键词 :广藿香挥发油 ; 肠屏障 ; 肥大细胞 ; 二胺氧化酶
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0620942203
　　广藿香 Pogostemon cabl i n (Blanco) Bent h. 为
芳香运脾法的常用、主要药物。广藿香为唇形科刺
蕊草属植物。其味辛 ,微温 ,归脾、胃、肺经 ,具有芳
香化浊 ,开胃止呕 ,发表解暑的功能 ,临床用以芳香
除秽 ,疏通中州 ,恢复脾胃受纳运化。广藿香含挥发
油约 115 % , 广藿香醇为挥发油主要成分 , 占
52 %～57 %。本实验以肢体缺血2再灌注大鼠为模
型 ,通过对肠组织形态学观察 ,肠黏液分泌量、血浆
二胺氧化酶 (DAO) 活性及肠黏膜肥大细胞数目的
测定来阐述广藿香挥发油成分对肠屏障功能的保护
作用。
1 　材料与方法
111 　动物 :一级 Wistar 大鼠 50 只 ,雌雄不限 ;平均
体质量 (250 ±20) g ,购自军事医学科学院四所 ,实
验大鼠适应性平衡饲养 1 周后用于实验。
112 　药品与试剂 :广藿香挥发油 (主要含广藿香醇)
采用蒸馏法提取 ,生药产地广东 ,制成含生药 50
mg/ g 原液 ,由天津达仁堂制药厂提供。投药前用
011 % 羧甲基纤维素钠溶液稀释。磷酸缓冲液 ,012
mol/ L ,p H 7. 2 ,购自北京鼎国生物技术发展中心。
辣根过氧化物酶溶液 ,40μg/ mL ,购自北京鼎国生
物技术发展中心。邻联 (二) 茴香胺 ,5 mg/ mL ,购
自 Sigma 公司。尸胺二氢氯化物溶液 , 1175 mg/
mL ,购自 Sigma 公司。二胺氧化酶 (DAO) 标准
品 ,购自 Sigma 公司。
113 　模型制备 :肢体缺血2再灌注模型制备采用改
良 Yassin 法[ 1 ] 。于造模前 24 h 禁食 ,以 10 % 水合
氯醛 (013 mL/ 100 g) ip 行术前麻醉。约 5 min
后 ,使用统一拉力强度橡皮筋 ,结扎实验大鼠双侧大
腿根部 ,环绕 2 周 ,持续 3 h ,造成双下肢缺血。迅
速解除结扎 ,形成肢体再灌注 , 18 h 后结束实验。
对照组在行腹腔麻醉后 ,不做结扎处理。
114 　分组及给药 :造模前将实验动物随机分为对照
组、模型组各 10 只 ,中药组 30 只。中药组用量按
200 mg/ (kg ·d) 的 10 倍、15 倍、20 倍计算 ,分别为
2、3、4 g/ ( kg ·d) ,每投药组各 10 只。每次 ig
2 mL ,对照组及模型组给予等量 011 % 羧甲基纤维
素钠溶液 ,各组连续 ig 5 d。于实验开始第 6 天 ,模
型组及中药组进行肢体缺血2再灌注造模。对照组
不作任何处理。
·249· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008210206　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :谢肄聪 (1969 —) ,女 ,天津市人 ,副主任医师 ,主要从事中医药消化系统疾病防治及研究工作。
E2mail : xieyicong2006 @126. com3 通讯作者　唐　方　Tel : (022) 60363599 　E2mail : zhongyi3599 @sina. com
115 　光镜标本制备 :实验结束 ,摘取距回肠末端 2
cm 肠组织 ,纵行剖开 ,10 % 中性福尔马林固定 ,常
规脱水 ,石蜡包埋 ,切片 , H E 染色。
116 　黏液染色与结果判断 :同 115 方法摘取标本 ,
以阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应 (ABPAS) 显示肠黏膜
表层黏液量。以红色显示中性黏液物质、蓝色显示酸
性黏液物质、紫红色显示中性和酸性黏液的混合性物
质。应用图像分析系统 ,在低倍镜视野下 ( ×100) 每
个检体随机计测 5 个视野内黏液物质面积 ,计算平均
数。由此计算黏液的面积密度 (黏液物质面积平均
数与单位面积之比的百分数) ,每组各 10 例。
117 　肥大细胞的染色与结果判断 :将回肠末端组织
切片 ,60 ℃烤箱内烘干 8 h。以甲苯胺蓝改良法显
示胞核呈蓝色 ,细胞呈紫红色肥大细胞颗粒。应用
图像分析系统 ,于高倍镜视野下 ( ×400) ,每例检体
随机计数 10 个视野内肥大细胞数。求取平均值作
为每例检体肥大细胞个数 ,每组各 10 例 ,计数结果
以个数/ 视野表示。
118 　血浆二胺氧化酶 (DAO) 活性测定 :依 Ho so2
da 等分光光度检测法测定[2 ] 。
119 　统计学处理 :采用 SPSS 11. 0 统计软件处理 ,
实验结果以 x ±s 表示。
2 　结果
211 　一般形态学观察 :模型组肠黏膜结构明显损
伤 ,主要表现为肠绒毛排列不整 ,绒毛萎缩、增粗 ,部
分绒毛脱落、缺损 ;间质明显充血、水肿、淋巴管扩
张 ,大量炎细胞浸润 ;上皮细胞排列不整 ,变性坏死 ;
网状纤维支架结构破坏。与模型组相比 ,各剂量挥
发油组可显著抑制肠绒毛萎缩 ,间质充血水肿、炎细
胞浸润 ;上皮细胞排列整齐 ,未见细胞变性坏死。见
表 1。
表 1 　各组回肠组织形态学比较 ( n = 10)
Table 1 　Histomorphological comparison of intestinal
in every group of rats ( n = 10)
组　别 例数
肠绒毛排列不整
例数　阳性率/ %
间质水肿
例数　阳性率/ %
大量炎性细胞浸润
例数　阳性率/ %
上皮细胞坏死脱落
例数　阳性率/ %
对照 - 1 10 1 10 0 0 0 0
模型 - 9 90 3 3 8 80 3 3 6 60 3 3 6 60 3 3
广藿香 2 5 50 4 40 2 20 4 40
　挥发油 3 1 10 △△ 1 10 △△ 1 10 △ 0 0 △△
4 1 10 △△ 0 0 △△ 0 0 △△ 1 10 △
　　与对照组比较 : 3 3 P < 0101
　　与模型组比较 : △P < 0105 　△△P < 0101
　　3 3 P < 0101 vs cont rol group
　　△P < 01 05 　△△P < 01 01 vs model group
212 　黏液物质染色结果 :模型组大鼠肠黏液面积较
对照组明显减少 ,挥发油不同剂量药效作用比较 ,结
果显示 ,与低、中剂量相比 ,高剂量可显著提高黏液
量 ( P < 0101) 。挥发油剂量与黏液面积相关分析结
果显示 ,伴随药物剂量的增加 ,黏液面积呈同向增
长。黏液量具有浓度依存性。见表 2。
213 　血浆 DAO 活性 :肢体缺血再灌注后 ,与对照
组相比较 ,模型组大鼠血浆 DAO 活性显著增高
( P < 0101) ;与模型组比较 ,挥发油各组血浆 DAO
活性明显下降 ( P < 0101) 。见表 2。
214 　肥大细胞个数 :由表 2 可见 ,模型组肠黏膜肥
大细胞数与对照组比较明显增高 ,中药各组的肥大
细胞数与模型组比较显著减少。相关分析结果显
示 ,随着挥发油剂量的升高 ,肥大细胞的数目降低 ,
即肥大细胞数与浓度变化呈负相关。
表 2 　各组间黏液物质面积密度、DAO 活性、肥大
细胞数目比较 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Comparison of mucus area density , DAO activity ,
and IMMC number in every group of rats
( x ±s , n = 10)
组 　别
剂量/
(g ·kg - 1 )
黏液面积密度/
%
DAO 活性/
(U ·mL - 1 )
肥大细胞数
对照 - 241 02 ±21 70 01 19 ±0116 81 76 ±01 59
模型 - 141 18 ±21 51 3 3 21 67 ±1117 3 3 151 68 ±21 40 3 3
广藿香挥发油 2 161 82 ±31 73 01 98 ±0176 △△ 131 29 ±11 52 △
3 161 84 ±21 90 △ 11 12 ±0127 △△ 121 74 ±11 98 △△
4 221 02 ±21 07 △△01 53 ±0137 △△ 111 64 ±11 55 △△
　　与对照组比较 : 3 3 P < 01 01
　　与模型组比较 : △P < 0105 　△△P < 0101
　　3 3 P < 0101 vs cont rol group
　　△P < 01 05 　△△P < 01 01 vs model group
3 　讨论
　　肠屏障功能是肠道的一个重要特征。肠道黏膜
本身是维持肠屏障功能完整性的基础和主要屏障。
肠黏膜直接或间接损伤所致的肠道黏膜屏障损伤和
肠通透性增加是引起肠源性细菌和内毒素易位的主
要原因。其结果可触发全身炎症反应和多器官功能
衰竭 (MODS) 。因此 ,寻找和建立肠屏障保护的治疗
方法与有效药物 ,近年来日益受到临床医师的重视。
广藿香以芳香除秽 ,疏通中州 ,恢复脾胃受纳、
运化之能为功效。广藿香富含挥发油成分 ,如广藿
香酮、广藿香醇 ,及萜类、黄酮类、醇、酚、酮、醛等类
物质。实验研究证实 ,广藿香挥发油成分有良好的
抗菌作用[3 ,4 ] ,协调和促进胃肠运动功能[5 ] ,增加大
鼠胃部纵、环行肌条的张力及运动指数[6 ] ,促进消化
吸收[7 ] 。提示芳香类药物调整胃肠运动 ,增进肠吸
收 ,可能与调节及保持肠组织的屏障功能有关。为
·349·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
此 ,本研究以广藿香挥发油成分作为实验药物 ,依据
肠黏膜具有高代谢与绒毛微血管丰富 ,对血流不足
表现敏感的生理特点 ,选用肢体缺血2再灌注大鼠模
型 ,自肠组织结构 ,肠黏液分泌 ,血浆 DAO 活性及
肠黏膜肥大细胞数目等方面 ,对广藿香挥发油对肠
屏障保护的药理作用进行了初步探讨。本实验结果
显示 ,肢体缺血2再灌注引发的肠系膜血流减少、绒
毛低灌注 ,使肠壁各层组织结构发生明显损伤。而
广藿香挥发油成分可有效抑制缺血2再灌注导致的
肠黏膜上皮结构损伤 ,保护肠黏膜上皮的完整性。
附着于肠黏膜表面含量丰富的肠黏液 ,是润滑
黏膜、包融和捕获细菌 ,阻止致病菌对黏膜损伤的重
要防御屏障。模型组大鼠肠黏液分泌量减少表明 ,
缺血和再灌注的双重外源性损伤导致肠黏膜损伤。
广藿香挥发油成分可明显提高中药组大鼠肠黏液
量 ,并且具有显著的浓度依赖性。广藿香挥发油对
肠黏膜的保护作用 ,还包括通过促进肠黏膜分泌功
能 ,提高肠道自身防御体系。
DAO 是存在于人类和哺乳动物小肠黏膜表层
的细胞内酶 ,当肠道黏膜细胞受损时便可释放入血 ,
外周血中 DAO 活性是反映黏膜上皮细胞成熟和完
整性的血浆标志物 ,故血浆 DAO 的活性能较准确
地反映小肠黏膜细胞的完整性和损伤程度[ 8 ,9 ] ,并
可用于肠黏膜屏障功能的监测[10 ] 。模型大鼠伴随
血浆 DAO 活性显著升高 ,提示肠黏膜上皮组织破
坏 ,肠黏膜机械屏障功能受损。广藿香挥发油对黏
膜结构的改善与血浆 DAO 活性的降低呈一致性 ,
能有效减轻肠黏膜损害。说明其对肠上皮细胞的保
护作用 ,是通过对上皮细胞结构和功能的整体调节
所实现的。
肠黏膜肥大细胞存在于肠道黏膜固有层 ,与肠
神经、血管毗邻。肥大细胞的增多可导致促炎反应
的加剧。另外 ,近期学者们对肠缺血2再灌注损伤研
究中发现 ,应用肥大细胞膜稳定剂可减轻局部及全
身炎症反应[11 ,12 ] 。本研究通过特殊染色对肠黏膜
肥大细胞进行量化的观察与分析 ,发现肠屏障损伤
后肥大细胞数目明显增多 ,广藿香挥发油可减少肢
体缺血2再灌注模型大鼠的肥大细胞数量 ,且肥大细
胞的增多与用药浓度呈显著负相关。由此说明广藿
香挥发油对肠免疫屏障的保护作用在于通过减少肥
大细胞数量抑制细胞因子的释放 ,减轻相关的病理
过程程度 ,达到保护肠屏障的作用。
本研究结果表明 ,广藿香挥发油成分对肠黏膜
机械屏障的作用主要表现在对黏膜结构的保护作
用 ,其有益于肠上皮细胞的完整性 ,维持机械屏障功
能的正常 ,从而对肢体缺血2再灌注后肠屏障功能具
有保护作用。同时进一步揭示了肥大细胞参与肠屏
障损伤 ,为深入了解肠黏膜免疫系统变化在缺血2再
灌注损伤发生中的作用及为防治肠屏障功能损伤提
供了新途径。本研究不仅为广藿香挥发油具有保护
肠屏障功能提供了实验依据 ,同时也为以广藿香挥
发油为主要成分的相关制剂的临床应用提供了理论
依据。
参考文献 :
[ 1 ] 　Yassin M M I , Barros D S A , Parks T G , et al . Lower limb
ischemia2reperfusion injury alters gast rointestinal st ructure
and function [J ]1 B r J S urg , 1997 , 84 : 1425214291
[ 2 ] 　Hosoda N , Nishi M , Nakagawa W , et al . St ructural and
functional alterations in t he gut of parenterally or enterally
fed rat s [J ]1 J S urg Res , 1989 , 47 : 12921331
[ 3 ] 　苏镜娱 , 张广文 , 李　核 , 等1 广藿香精油化学成分分析与
抗菌活性研究 [J ]1 中草药 , 2001 , 32 (3) : 20422051
[ 4 ] 　张广文 , 蓝文键 , 苏镜娱 , 等1 广藿香精油化学成分分析与
其抗菌活性 [J ]1 中草药 , 2002 , 33 (3) : 21022121
[ 5 ] 　李永渝 , 魏　玉 , 李莉娟 , 等1 藿香、大黄等 CCB 中药影响
胃肠运动功能的机制探讨 [J ]1 中国中西医结合外科杂志 ,
1997 , 3 (3) : 18721901
[ 6 ] 　Tang F , Noda H , Yoshimura M , et al . The effect s of water
ext ract of Pogostemi Herba on intestinal mucosa of mice wit h
zinc abnormality [J ]1 J T radit Med , 1995 , 12 : 292371
[ 7 ] 　邱赛红 , 陈立峰 , 柳克玲 , 等1 芳香化湿药开胃作用机理的
实验研究 [J ]1 中药药理与临床 , 1995 , 11 (4) : 242271
[ 8 ] 　黎君友 , 吕　艺 , 付小兵 , 等1 二胺氧化酶在创伤后肠道损
伤中变化及意义 [J ]1 中国危重病急救医学 , 2000 , 12 : 4822
4841
[ 9 ] 　黏君友 , 孙世荣 , 薛立波 , 等1 烧伤后二胺氧化酶活性变化
[J ]1 中华整形烧伤外科杂志 , 1997 , 13 (1) : 402421
[ 10 ] 　Kamei H , Hachisuka T , Nakao M , et al . Quick recovery of
serum diamine oxidase activity in patient s undergoing total
gast rectory by oral enteral nut rition [J ]1 A m J S urg , 2005 ,
189 (1) : 382431
[ 11 ] 　Dib M , Zhao X , Andersson R , et al . Mast cell cont ribute to
early pancreatitis2 induced systemic endot helial barrier dys2
function [J ]1 Pancreatology , 2002 , 2 (4) : 39624011
[ 12 ] 　甘小亮 , 黑子清 , 罗刚健 , 等1 肥大细胞膜稳定剂对肠缺血
再灌注小肠组胺、MDA 和 SOD 的影响 [J ]1 中国病理生理
杂志 , 2008 , 24 (1) : 15321561
·449· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月