全 文 ：中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1031·
药理与I临床
通腑醒神胶囊对急性缺血损伤大鼠脑钠离子通道基因表达的影响
尤劲松1，胡建芳1，汪峰1，危建安2，韩凌2
(1．广州中医药大学第二附属医院神经一科，广东广州 510120；2．广州中医药大学
第二附属医院中心实验室，广东广州 510120)
摘要：目的探讨通腑醒神胶囊对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用是否与调节神经细胞膜上
Na离子通道基因表达有关。方法观察通腑醒神胶囊治疗对大脑中动脉阻塞模型大鼠各时间点神经功能缺损评
分、脑含水量、脑梗死体积的影响；运用荧光定量RT—PCR技术检测各组动物损伤侧及健侧大脑神经细胞膜上Na
离子通道a亚基基因各亚型(Navl．1、Navl．2、Nayl．3、Navl．7、Navl．8)mRNA在不同时间点的表达水平。结果
治疗组在1、2、3、7d时神经功能缺损评分，3d时脑含水量，3、7d时的脑梗死体积均较模型组低，差异显著(P<
0．01)；治疗组损伤侧脑组织在1、2d时Navl．1mRNA表达水平高于模型组，其中2d时差异显著(P<0．05)，但
低于健侧、假手术组及对照组(P达水平与健侧、假手术组及对照组相比，在各时间点均未见显著性差异(P>O．05)。结论通腑醒神胶囊对缺血性
神经细胞具有保护作用，可能与调节Navl．1表达有关。
关键词：通腑醒神胶囊；脑缺血损伤；钠离子通道基因
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1031—05
EffectsofTongfuXingshenCapsulaonexpressionofs diumchannelg nes
inratswithacuteischemicbrainjury
YOUJin—son91，HUJian—fan91，WANGFeni91，WEIJian-an2，HANLin92
(1．TheFirstDepartmentofNeurology，theSecondAffiliatedHospital，GuangzhouUniversityofTraditionalChinese
Medicine，Guangzhou510120，China；2．TheCentralL boratory，theSecondAffiliatedHospital，
GuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine，Guangzhou510120，China)
Abstract：ObjectiveTostudytherelationshipbetweentheeuralprotectionofT ngfuXingshen
Capsulaandthexpressionofs diumchannelg nesinratswithacuteischemicbrain jury．Methods
Theneurologicimpairmentscore，brainw tercontent，andinfarctvolumewereobservedatdifferenttime
pointsintherightmiddlecerebralarteryocclusion(MCAo)rats．Usingfluore cencequantitativeRT—
PCRtechniquetomeasurethexpressionofs diumchannelg nes(Navl．1．Nayl．2，Navl．3，Navl．7，
andNayl．8)mRNAinbothinjuredancontralateralhemispheresatdifferenttimepoints．ResultsAt1，
2，3，and7 time—points，theneurologicimpairmentscoresofratsinTongfuXingshenCapsulagroup
werelowerthanthoseinmodelgroupwithsignificantdifferences(PwatercontentofratsinTongfuXingshenCapsulagroupwasdecreasedsignificantly(尸withmodelgroup．At3and7dtime—points，theinfarctvolumeofratsinTongfuXingshenCapsulagroup
wasignificantlylowerthanthoseinmodelgroup(P<0．01)．At1 and2dtime—points，theexpressionof
Navl．1mRNAininjuredh misphereofratsinTongfuXingshenCapsulagroupwashigherthanthatin
modelgroupespeciallysignificantat2d imepoint(Pside，Sham—operatedgroup，andnormalcontrolgroup(P<0．05)．However，therewerenosignifcant
differencesamongthe xpressionofNavl．2，Navl．3，Navl．7，andNavl．8mRNAininjuredand
contralateralhemispheresofallgroupsatallobservedtime-points(P>0．05)．ConclusionThefindings
suggestthatheneuralprotectionofT ngfuXingshenCapsulaonischemicinjurybrainmaybe·contributes
toregulatethexpressionofNayl．1sodiumchannelg ne．
Keywords：TongfuXingshenCapsula；ischemicbrainjury；sodiumchannelg nes
收稿13期：2007—10-26
基金项目：国家n然科学基金项目(30400583)
作者简介：尤劲松(1973---)，男，医学博上，副主任医师，主要从事脑血管疾病的中西医结合临床及实验研究。
Tel：(020)81887233—34530E—mail：youjs73@yahoo．corn．cn
万方数据
·1032· 中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
中风急性期以标实为主，腑实证为常见证候，其
病机特点是痰热腑实、气血逆乱，采用通腑法治疗中
风，可以明显提高临床疗效。通腑醒神胶囊是广东省
中医院中医脑病中心根据多年临床实践研制而成的
处方，由番泻叶、虎杖、人工牛黄等组成，具有通腑醒
神、豁痰开窍的功能。本课题组在承担的“九五”、“十
五”攻关课题中均使用通腑醒神胶囊作为中风急性
期综合治疗方案中的主要药物，应用于中风急性期
伴有痰热腑实证候的患者的治疗，经多中心临床验
证，临床疗效显著，有降低患者并发症和并发症致死
率、致残率，提高生活质量等作用[1]。
脑缺血时，电压门控钠离子通道开放导致的钠
离子内流可以促进兴奋性氨基酸等神经递质的释
放，进而导致钙内流，从而损伤神经细胞。电压门控
钠离子通道，由a和j3亚基组成，a亚基为钠通道的
主亚基，编码n亚基的为一个多基因家族，啮齿类动
物有10种亚型(Navl．1～Navl．9，Nax)存在于中
枢∽J。p亚基为辅助亚基，有p1、p2、p33种亚型[3】。在
脑缺血损伤中，钠通道的不同亚型可能起着不同的
作用n]。实验研究表明，缺血脑损伤可能导致电压依
赖性的钠通道某些亚型选择性的减少，而一些钠离
子的特异性阻断剂具有神经保护作用[5]。为进一步
明确通腑醒神胶囊的药理作用机制，本研究探讨了
通腑醒神胶囊对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤
模型的神经保护作用，试图从调节神经细胞膜上钠
通道a亚基各亚型基因表达的异常来诠释通腑法治
疗急性缺血性中风的可能作用机制。
1材料
1．1实验动物：SPF级雄性SD大鼠192只，体质量
250～300g，由广州中医药大学动物实验中心提供。
1．2 仪器、试剂与药品：动物手术器械、直径
0．22～O．28mm渔线、微动脉夹、PE7000全自动荧
光定量PCR仪等；逆转录试剂盒、PCR扩增试剂盒
购于Invitrogen公司；Na+通道各亚型引物及探针
由上海生工生物有限公司合成。通腑醒神胶囊由广
东省中医院药剂科提供[采用紫外分光光度法测定
药品中总蒽醌苷的量及薄层扫描法测定大黄素的量
来控制药品质量[6]，本实验所用通腑醒神胶囊含总
葸醌苷(8．085土0．055)mg／g，含大黄素(O．974士
0．040)mg／g]。
2方法
2．1动物分组与给药：SPF级雄性SD大鼠192
只，随机分为对照组(挖一12)、假手术组(n一48)、
模型组(以一66)、通腑醒神胶囊治疗组(简称治疗
组，7z一66)。通腑醒神胶囊按大鼠每日1．5g／kg计
算药量(按胶囊药剂量)，按动物系数折算相当于
70kg成人临床剂量的3倍。均于术后麻醉清醒后，
每日分两次ig给药(2mL)或蒸馏水2mL，上、下
午各1次。
2．2 大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型制备：参照
Koizumi[71线栓法稍作修改，栓塞右侧大脑中动脉，
2h后拔出线栓约1．5cm长度形成再灌注。术中及
清醒前均给予头灯(100W)照射，保持肛温36℃
左右，室温25℃。假手术组渔线插入颈总动脉深度
为0．5am，其余操作均同手术组。各组动物如有死
亡应及时补充。
2．3观察指标
2．3．1 神经病学评分：参照Longa5分制评分标
准口]。累计1分以上即为成功模型。0分者为模型不
成功，剔除，并及时补充。动物清醒后观察拔线时、再
灌注12h、1d、2d、3d、7d时的神经功能缺失评分。
2．3．2脑含水量的测定：模型组、治疗组及假手术
组于术后1、3、7d时间点各取6只大鼠，对照组取
第7天时间点大鼠6只，断头取脑，去除脑表面的硬
脊膜、小脑及脑干部分，立即用微量精密天平称取脑
湿质量，然后放置烘箱里，80℃烘72h至恒质量，
计算脑含水量[脑含水量=(湿质量一千质量)／湿质
量×100％]。
2．3．3梗死体积的判定：模型组和治疗组大鼠在缺
血再灌注后1、3、7d时间点各取6只断头取脑，
置一20℃冰箱固定15min，除去额极，每间隔2
mm做连续冠状切片5片，置人2％TTCPBS(pH
7．4)溶液中，37℃恒温避光孵育15～30min，正常
组织染色成红色，梗死灶染成白色，后将脑片置于
10％福尔马林液中固定24h后拍照并用图像分析
仪计算出脑片上梗死灶体积与大脑半球体积的百分
比。梗死体积计算参照Swanson等方法[9]。
2．3，4Na离子通道各亚型mRNA表达的实时定
量RT—PCR检测：模型组、治疗组及假手术组大鼠
于术后12h、1d、2d、3d、7d各取6只，对照组取第
7天时间点大鼠6只，断头处死，取距额极5mm的
2mm厚大脑冠状切面层，分别取梗死侧及对侧提
取总RNA，合成eDNA按试剂盒说明操作。Na离子
通道a亚基各亚型引物及探针序列均按文献方法合
成[1⋯，阳性标准品由英韦创津公司提供。采用不同浓
度的阳性标准品(浓度分别为1×107、1×106、1×
105、l×104拷贝／mL)制作标准曲线，荧光定量RT—
PCR反应总体积50弘L，循环条件：50℃、2min，
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1033·
95℃、10min，40个循环(90℃、15S，60℃、60s)。 3．1 治疗组及模型组大鼠在不同时间点神经功能
PCR仪在反应结束后。将参照标准曲线，计算各组不 缺损评分：治疗组及模型组大鼠拔线时的平均神经
同时间点Na离子通道a亚基各亚型基因表达的起始 功能缺损评分无显著性差异(P>o．05)。假手术组
拷贝数(以RNA拷贝数的对数表示表达水平)。 未出现明显神经功能缺损症状。再灌注损伤后12h
2．4统计学方法：计量资料数据用z±s表示，两样时两组大鼠的神经功能缺损评分亦未见显著性差异
本均数间比较采用t检验，多组总体比较用方差分 (P>0．05)，而再灌注1、2、3、7d时治疗组大鼠的
析，两两比较用q检验。统计分析用SPSS13．0软 神经功能缺损评分均低于模型组，具有显著性差异
件完成。 (P<0．01)，结果见表1。
3结果 3．2各组大鼠在不同时间点脑含水量比较：由表2
表1治疗组及模型组大鼠不同时间点神经功能缺损评分比较
Table1 Comparisonofneurologicimpairmentscoreofratsbetweentreatmentgroups
andmodelgroupsatdifferenttimepoints
与模型组比较：一P<0．01
’’P表2各组大鼠在不同时间点脑含水量的比较(工土j，弹一6)
Table2 Comparisonofbrainwatercontent
ofratsamonggroupsatdifferent
timepoints(；±s，一一6)
与假手术组及对照组比较：。P<0·05～P与模型组比较；zxp。PAP可见，造模后模型组及治疗组大鼠平均脑含水量在
1 d时即明显升高，与假手术组及对照组相比，差异
显著(P<0．05、0．01)，3d时的脑含水量最高，7d
时两组的脑含水量与假手术组及对照组相比无明显
差异(P>O．05)。而治疗组的脑含水量在3d时与
模型组相比有明显下降(P何时间点与对照组相比均无明显差异(尸>0．05)。
3．3治疗组与模型组大鼠在不同时间点脑梗死体
积比较：经TTC染色后，脑梗死区呈白色，正常脑
组织呈现红色，两组大鼠在手术后1d的平均脑梗
死体积无显著性差异(P>O．05)，而治疗组在3、7
d时的脑梗死体积明显低于模型组(P果见表3。
3．4钠通道a亚基Navl．1亚型在不同时间点的表
达水平：造模12h后即可见模型组和治疗组大鼠损
表3治疗组及模型组大鼠在不同时间点脑梗死体积
比较(i士s，露一6)
Table3 Comparisonofinfarctvolumeofrats
betweentreatmentgroupsandmodel
groupsatdifferenttimepoints
(；±j，万一6)
与模型组比较：一P。。P伤侧Nayl．1mRNA表达水平的降低，与健侧、对
照组及假手术组相比差异显著(P<0．05)，以后继
续下降，2d时最低，以后逐渐上升；3d时仍稍低于
正常，但与健侧、对照组及假手术组相比差异无显著
性(P>0．05)；7d时基本正常，与健侧、假手术组
及对照组相比，均未见显著性差异(P>0．05)。与同
时间点的模型组相比，2d时治疗组损伤侧Navl．1
mRNA的表达水平有所升高(P损伤侧Navl．1mRNA的表达水平在各个时间点
与健侧及与对照组相比均未见显著性差异(P>
0．05)，结果见表4。
3．5 不同组别大鼠脑组织Navl．2、Navl．3、
Navl．7、Navl．8mRNA在不同时间点表达水平：
治疗组、模型组、假手术组在各时间点Navl．2、
Navl．3、Navl．7、Navl．8mRNA的表达水平损伤
侧与健侧及对照组相比均无明显差异(P>O．05)。
万方数据
·1034· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7,el
表4 Navl．1在各组别不同时间点表达水平比较(i士s，万一6)
Table4 ComparisonofNavl．1mRNAexpressioningroupsatdifferenttimepoints(i士j。打一6)
与治疗组健侧、模型组健侧、假手术组及对照组双侧比较；’P’P△△p4讨论
通腑醒神胶囊是一种治疗中风急性期痰热腑实
证的制剂，其中以番泻叶通腑泄浊为君药，虎杖活血
祛瘀、清热通下为臣药，人工牛黄化痰、开窍醒神为
佐，诸药共奏下腑实、清瘀热、化痰开窍的功效。研究
表明通腑醒神胶囊对中风病急性期痰热腑实证模型
的卒申经体征和粪便于结、烦躁、鼻分泌物多、喉中痰
鸣等痰热腑实证有明显治疗作用[1¨。梁伟雄等[12]研
究表明通腑醒神胶囊能减轻脑出血大鼠脑组织的病
理形态学改变，促进血肿吸收，减轻脑水肿，减轻脑
组织受压，改善微循环和脑组织供血供氧，促进脑组
织修复而达到改善神经功能的目的。本研究结果亦
表明通腑醒神胶囊能减轻局灶性脑缺血再灌注损伤
大鼠3d时的脑含水量，对脑水肿高峰的形成有抑
制作用，减少3、7d时的脑梗死体积，减轻神经功能
缺损症状，具有保护急性缺血性脑损伤作用。
本研究发现模型大鼠损伤侧Navl．1mRNA
的表达在缺血再灌注12h时即明显下降，与健侧、
假手术及对照组相比具有显著性差异，以后继续下
降，2d时达最低峰，3d时仍稍低于健侧，但无统计
学差异，7d时恢复正常。这与YAO等[1们研究
MCAo后大鼠脑损伤侧Navl．1mRNA的表达在
6h即下降，48h达最低峰的结果相一致，表明局灶
性脑缺血再灌注损伤早期(48h内)时确实存在
Nayl．1mRNA表达的下调，其下调的机制可能由
于缺氧时持续Na十内流导致细胞兴奋性增高而引
起大脑对缺氧产生的兴奋性毒性的一种即刻反应，
是机体对缺氧的一种自我保护机制。但是持续的
Navl．1基因的下调可能与减慢大脑神经生理的恢
复有关，而Na+通道阻滞剂在随后的阶段(缺血再
灌注损伤后24～48h时)可以逆转Na+通道基因
表达的下调，从而发挥神经保护作用[5]。与模型组相
比，通腑醒神胶囊治疗后可明显逆转2d时Navl．1
基因表达的下降(P以调节神经细胞膜上Navl．1mRNA基因的表达
失调，逆转缺血性Navl．1mRNA基因表达的过度
下调，使其功能恢复正常，防止持续的Navl．1
mRNA基因表达下调所带来的神经损害。研究结果
同时表明，局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠脑损伤
侧Na离子通道a亚基的其他亚型(Navl．2、
Nayl．3、Navl．7、Navl．8)mRNA的表达在观察时
间点内与健侧相比并未出现明显差异(P>O．05)。
这与YAO等[1叼的研究发现Navl．2mRNA的表
达在MCA024h时亦有明显下调的结果不太一
致，其原因尚有待进一步研究。
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香加皮羽扇豆烷乙酸酯对人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响
单保恩1，赵连梅1，艾军2，何兰欣2，陈书红3，丁春艳1
(1．河北医科大学第四医院科研中心，河北石家庄050011}2．河北省肿瘤研究所，河北石家庄050011；
3．华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北石家庄050015)
摘要：目的研究香加皮中提取的羽扇豆烷乙酸酯(CPLA)对正常人外周血淋巴细胞和吞噬细胞免疫调节功能
的影响。方法 无菌分离人外周血淋巴细胞和巨噬细胞，加入PHA和不同质量浓度的CPLA，MTT法检测其对淋
巴细胞增殖及巨噬细．胞对食管癌细胞株ECA一109生长的影响；RT—PCR法检测CPI。A对7一干扰素(INF一7)
mRNA表达的影响；El。ISA法检测CPLA作用后淋巴细胞和巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子一a(TNF—a)、白
细胞介素一2(IL一2)等细胞因子分泌的变化。结果5～40btg／mLCPLA能明显增强PHA活化的人外周血淋巴细
胞的增殖(P<0．01)；20、40／19／ml。的CPLA能使淋巴细胞IFN一7mRNA的表达水平明显升高(P<0．01)；用
CPLA处理后的巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤功能明显增强(P<0．01)，并证实了该作用可能与CPLA促进巨噬细
胞分泌TNF—a增多有关；CPLA能促进淋巴细胞产生IL一2和TNF—a，并呈现浓度依赖性(P<0．01)。结论
CPLA能增强人外周血淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能，发挥抗肿瘤作用。
关键词：CPLAf外周血；淋巴细胞；增殖；抗肿瘤免疫
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1035一05
EffectofCortexPeriplocaelupaneac tateonimmunoregulation
ofhumanperipheralbloodiymphocytes
SHANBao—anl，ZHAOLian—meil，AIJun2，HELan—xin2，CHENShu—hon93，DINGChun—yanl
(1．ResearchCenter，TheFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011，China；2．HebeiProvincial
CancerInstitute，Shijiazhuang050011，Chi al 3．NewDrugResearchandDevelopmentCo．，L d．
ofNorthC inaPharmaceuticalCorporation，Shijiazhuang050015，China)
Abstract：ObjectiveEffectofCorlexPeriplocae1upaneacetate(CPI。A)onimmun regulationof
humanperipheralbloodymphocyteswastudied．MethodsLymphocytesfromhumanperipheralblood
wereisolatedanco—incubatedwi hphytohemagglutin(PHA)anddifferentco centrationofCPLA．The
effectofCPLAontheproliferationoflymphocytesandphagocytosisofmacrophagetothegrowthof
humanesophagealcarcinomacellsECA一109weremeasuredbvMTTmethod．EfleetofCPI。AonIFN一7
mRNAexpressionwasdeterminedbyusingRT—PCR．TNF—aandIL一2secretioninsupernatantof
lymphocytesandmacrophagecultureafterCPI。Atreatmentw redeterminedwithE1。ISAassay．Results
Theproliferationoflymphocyteswasenhancedby5—40／19／mLCPI。Aafteractivationoftheproliferation
oflymphocytesfromhumanperipheralbloodwithPHAinadosedependentmanner(尸expressionoflFN一7mRNAinlymphocyteswasenhancedby20and40ug／mLCPLA(P<0．01)．CPLA
couldstrengthenthemacrophagetoinhibittheproliferationofes phagealcarcinomacellssignificantly
(P<0．01)，whichmayberelatedwithTNF—aproduction．TheproductionofIL一2andTNF—aby
lymphocytesouldbeaugmentedbyCPLAtreatmentinadosedependentma ner(PCPLAcouldregulatetheimmuneresponseoflymphocytesandmacrophagefromhumanperipheralblood，
whichmayberelatedwithkillingcarcinomacells．
收稿日期：2007—12—14
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30371753)；河北省自然科学基金资助项目(C200400061o)；河北省高校强势特色项月
作者简介：单保恩(1962一)，男．河北邯郸人，博上，教授，博士生导师，主要研究疗向为肿瘤基因诊断与免疫生物治疗、抗肿瘤，￡物治疗。
Tel：(0311)86095283Email：baoenshan@yahoo．com．cn
万方数据
通腑醒神胶囊对急性缺血损伤大鼠脑钠离子通道基因表达的
影响
作者： 尤劲松， 胡建芳， 汪峰， 危建安， 韩凌， YOU Jin-song， HU Jian-fang， WANG Feng
， WEI Jian-an， HAN Ling
作者单位： 尤劲松,胡建芳,汪峰,YOU Jin-song,HU Jian-fang,WANG Feng(广州中医药大学第二附属医
院神经一科,广东广州,510120)， 危建安,韩凌,WEI Jian-an,HAN Ling(广州中医药大学第
二附属医院中心实验室,广东,广州,510120)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
被引用次数： 1次

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12.梁传雄;陈根成;黄燕 通腑醒神胶囊对高血压性脑出血大鼠脑组织病理及超微结构的影响[期刊论文]-广州中医
药大学学报 2002(01)

引证文献(1条)
1.代允义.黄汉津.王小同.郑国庆 三化汤对大鼠脑梗死区钠离子通道表达的影响[期刊论文]-中华临床医师杂志
（电子版） 2011(14)


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