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Application of on-line detection and analytical technique by NIR in quality control of water extracting process of Anshen Bunao Liquid.

NIR在线检测监控安神补脑液水提过程的研究



全 文 :[6 ]  Yan Z Y , Gary W. Optimiz at ion in Dug Discovery in vit ro
Methods [ M ]. Totowa : Humana Press Inc. ,2004.
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NIR在线检测监控安神补脑液水提过程的研究
吕琳昂1 ,2 ,师  涛1 ,2 ,杨辉华2 ,梁琼麟2 ,王义明2 ,罗国安2 3 
(1. 江西中医学院 ,江西 南昌  330004 ; 2. 清华大学分析中心 ,北京  100084)
摘 要 :目的  建立近红外光谱快速测定安神补脑液提取过程中有效成分的方法。方法  按照厂家工艺实验室模
拟安神补脑液水提过程 ,近红外在线检测并对提取物进行 HPLC 法测定 ,获取提取液的近红外 (NIR) 光谱信息与
提取物中的代表活性成分二苯乙烯苷、淫羊藿苷的信息 ,采用偏最小二乘法建立 NIR 与 HPLC 信息间的关系。结
果  校正模型相关系数分别为 01953 8、01975 6 ,预测样本集的误差均方根 ( RMSEP)分为 01048 7、01043 2。结论
本法操作简便、快速 ,可用于安神补脑液水提过程质量监控。
关键词 :安神补脑液 ;近红外 ;偏最小二乘法
中图分类号 :R28412 ;R286102    文献标识码 :A    文章编号 :025322670 (2009) 0220224205
Application of on2l ine detection and analytical technique by NIR in quality control of water
extracting process of Anshen Bunao Liquid.
L Β Lin2ang1 ,2 , SH I Tao1 ,2 , YAN G Hui2hua , L IAN G Qiong2lin2 , WAN G Yi2ming2 , L UO Guo2an2
(1. J iangxi University of Traditional Chinese Medicine , Nanchang 330004 , China ; 2. Analysis Center ,
Tsinghua University , Beijing 100084 , China)
Abstract : Objective  To develop a novel met hod for fast determination of the active component s in t he
ext ract s of Anshen Bunao Liquid wit h near inf rared (N IR) spect ro scopy. Methods  The samples in this
experiment were simulated according to t he manufacture p rocess. H PL C was used to determine t he con2
tent s of stilbene glycoside and icariin in t he ext ract s of Anshen Bunao Liquid. N IR spect ra of t he samples
were collected in range of 4 000 —12 500 cm - 1 . Multivariate calibration models based on PL S algorit hm
were developed to correlate t he spect ra and corresponding values determined by HPL C. Results  The core2
lation coefficient s of t he calibration models were 01953 8 and 01975 6 , and the RSE for stilbene glycoside
and icariin were 01048 7 and 01043 2 , respectively. Conclusion  The proposed met hod is simple and rapid ,
and used to quality cont rol of Anshen Bunao Liquid.
Key words : Anshen Bunao Liquid ; N IR ; PL S
  安神补脑液收载于《中华人民共和国卫生部药
品标准》中药成方制剂第 21 册 ,由制何首乌、淫羊
藿、大枣、甘草、干姜等中药精制而成 ,主要用于治疗
神经衰弱症、神经官能症、头痛、脑血管病恢复期、更
年期综合征等病证。安神补脑液中二苯乙烯苷和淫
羊藿苷的 HPL C 法测定已有报道[1 ,2 ] 。本研究以安
神补脑液提取过程为例 ,实验室模拟其工艺提取过
程 ,以近红外在线检测 ,并采用 HPL C 法测定所采
集样品的二苯乙烯苷和淫羊藿苷 ,采用偏最小二乘
( PL S)法建立近红外 (N IR)光谱信息与 H PL C 色谱
信息间的关系 ,探讨安神补脑液水提液中二苯乙烯
苷和淫羊藿苷的快速测定方法 ,以用于中药提取过
·422· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008206215   
基金项目 :国家“十一五”科技支撑计划项目 (2006BAI08B04201) ;国家 973 中医理论专项 (2005CB523503)
程的在线检测及质量控制。
1  材料与仪器
Bruker IFS 28/ N 型傅立叶变换近红外光谱仪
(德国布鲁克光学仪器公司) ,随机附带 O PU S 光谱
采集和处理软件。Shimadzu 2010A 高效液相色谱
仪 (配有 SPD —M10A 型二极管阵列检测器、四元
梯度泵、在线脱气装置、自动进样器) ; CL ASS —V P
色谱工作站 (日本岛津科技有限公司) :BP211D 型
电子天平 (十万分之一 ,德国 Sartorius 公司) 。
制首乌、淫羊藿、大枣、甘草均由吉林敖东延边
药业股份有限公司提供 ,经北京大学药学院陈世忠
教授鉴定 :二苯乙烯苷对照品 (中国药品生物制品检
定所 ,批号 110844 - 200606) ;淫羊藿苷对照品 (中
国药品生物制品检定所 ,批号 110737 - 200413) ;乙
腈 (色谱纯 ,美国 Fisher 公司) ,去离子水 (自制) ,甲
酸 (分析纯 ,北京化工厂) 。
2  方法与结果
211  样品的制备 :按处方剂量称取制首乌 125 g ,淫
羊藿 125 g ,大枣 25 g ,甘草 125 g ,置 5 000 mL 圆底
烧瓶中 ,按厂家提供的工艺回流提取 ,一煎 8 倍量水
提取 215 h ,二煎 8 倍量水提取 2 h ,三煎 6 倍量水提
取 1 h ,在提取过程中每隔 8 min 取约 10 mL 提取
液 ,同时补充同温同量的水。连续提取 3 次 ,作为安
神第一、二、三批样品 ,共获得提取液样品 122 个。
分别取 2 mL 提取液直接过 0145 μm 滤膜 ,进行
H PL C 法侧定。剩余提取液进行近红外光谱扫描 ,
光谱范围为 12 500~4 000 cm - 1 ,采用 N IR 扫描仪
自带软件中的 PL S 方法进行回归建模。
212  样品中的二苯乙烯苷和淫羊藿苷的 HPL C 法
测定[ 1 ,2 ]
21211  色谱条件 :Agilent HC C18色谱柱 (50 mm ×
416 mm , 5μm) ;流动相 :乙腈 (A)2012 %甲酸水溶
液 (B) ,梯度洗脱 , 0~ 36 min , 5 % A ~ 37 % A ;
36~46 min , 37 %A~95 %A ; 46~50 min , 95 %A :
50~60 min ,5 %A ;进样量 : 10μL ;体积流量 : 110
mL/ min ;检测波长 :278 nm ;柱温 :25 ℃。
21212  标准曲线的制备 :精密称取二苯乙烯苷对照
品 11353 mg ,置 25 mL 棕色量瓶中 ,加甲醇溶液溶
解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 54112μg/ mL 二苯乙
烯苷对照品溶液。精密吸取 54112μg/ mL 二苯乙
烯苷对照品溶液 2、5、10、15、20、25μL ,注入高效液
相色谱仪 ,测定峰面积。以进样量为横坐标 ,峰面积
值为纵坐标 ,求得回归方程 Y = 157 351 374180 X +
117 119158 , r = 01999 8。结果表明二苯乙烯苷在
011082~113530μg 与峰面积呈良好的线性关系。
精密称取淫羊藿苷对照品 21228 mg ,置 25 mL
棕色量瓶中 ,加甲醇溶液溶解并稀释至刻度 ,摇匀。
精密量取 2 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得 17182μg/ mL 淫羊藿苷对照品溶液。
精密吸取 17182μg/ mL 淫羊藿苷对照品溶液 1、10、
15、25、40、60μL ,注入高效液相色谱仪 ,测定峰面
积。以进样量为横坐标 ,峰面积值为纵坐标 ,求得回
归方程 Y = 331 584 468156 X + 49 647167 , r =
01999 9。结果表明淫羊藿苷在 010178~11069μg
与峰面积呈良好的线性关系。
21213  测定 :取安神补脑液模拟样品摇匀 ,2 000
r/ min 离心 5 min ,过 0145μm 滤膜 ,取续滤液 ,即得
供试品溶液。分别取安神补脑液模拟样品供试品溶
液和对照品溶液各 10μL 注入高效液相色谱仪 ,测
定 ,计算 ,结果 122 个样品中二苯乙烯苷和淫羊藿苷
的质量浓度分布范围为 : 0103~1103、0103~0183
mg/ mL 。
213  安神补脑液模拟样品中指标性成分的近红外
光谱测定[ 3~7 ] : 采用 Bruker 光谱仪器公司 F T —
N IR 型 MPA 光谱仪 ,对上述 122 个提取液样本 ,在
光程 2 mm 下测定其透射光谱 ,光谱范围 12 500~
4 000 cm - 1 ,波数间隔 4 cm - 1 ,每张光谱为 20 次测
定值取平均 ,光谱图见图 1。
cm - 1
图 1  安神补脑液提取液的 NIR光谱图
Fig. 1  NIR Spectra of extract in Anshen Bunao Liquid
采用 Bruker 公司 O PU S 化学计量学软件的
PL S 方法对 N IR 光谱与二苯乙烯苷、淫羊藿苷的质
量浓度进行多元回归分析 ,以交叉验证均方根误差
(RMSECV)最小优化回归模型对校正集考察其均
方根误差 ( PMSEE) 和决定系数 R2 ,对预测集考察
其均方根误差 ( RMSEP)和 R2 。一个好的 PL S 模型
具有小的 RMSRCV 值 , RMSEE 与 RMSEP 相当 ,
接近于 1 的 R2 值 ,以及大小合适的 PL S 维数 (分量
·522·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
数) D 值。
  RMSE = 1
n
∑ni = 1 ( y i - y^ i ) 2
其中 y^ i 为样本的性质的预测值 , y i 为样本的性质的真值 , n
为样本个数。
214  光谱预处理方法的选择 :分别用一阶导、二阶
导、多元散射校正 (MSC) 不同预处理方法对近红外
光谱进行预处理 ,结果见表 1。其中最小 - 最大归
一化法得到的模型效果最好 ,所以选择该方法作为
光谱的预处理方法。
215  光谱波段选择 :根据光谱预处理给出的结果 ,
在光程 2 mm、采用最小2最大归一化预处理条件下 ,
进一步考察不同波数范围下 PL S 建模方法的效果 ,
结果见表 2、3。可见波数选择对建模效果具有至关
重要的影响。二苯乙烯苷、淫羊藿苷建模的最优波
数范围分别为 9 74616~ 7 49719 cm - 1 、5 77717 ~5 44919 cm - 1 。表 1  不同预处理方法的 PLSR模型 RMSECVTable 1  PLSR Model’s RMSECV by takingvarious preprocessing methods预处理方法 RMSEC/ (mg ·mL - 1)二苯乙烯苷 淫羊藿苷最小2最大归一化 0. 043 0. 038没有光谱预处理 0. 050 0. 039消除常数偏移量 0. 512 0. 042减去一条直线 0. 509 0. 044矢量归一化 0. 502 0. 041多元散射校正 0. 475 0. 043一阶导数 0. 522 0. 045二阶导数 0. 63 0. 057一阶导数 + 减去一条直线 0. 0605 0. 049一阶导数 + 矢量归一化 0. 0587 0. 044一阶导数 + MSC 0. 0641 0. 052
表 2  PLS在不同波数范围下二苯乙烯苷建模的 RMSECV值
Table 2  PLS Model’s RMSECV of stilbene glycoside in different wave number ranges
波数范围/ (cm - 1)
RMSECV/
(mg·mL - 1)
11 995. 2~7 497. 9 0. 065
7 501. 8~6 097. 9 0. 061
11 995. 2~6 097. 9 0. 054
6 101. 7~5 449. 9 0. 051
11 995. 2~7 497. 9、
6 101. 7~5 449. 9
0. 049
7 501. 8~5 449. 9 0. 060
11 995. 2~5 449. 9 0. 050
5 453. 7~4 597. 5 0. 162
11 995. 2~7 497. 9、
5 453. 7~4 597. 5
0. 147
7 501. 8~6 097. 9、
5 453. 7~4 597. 5 
0. 082
11 995. 2~6 097. 9、
5 453. 7~4 597. 5
0. 091
6 101. 7~4 597. 5 0. 148
波数范围/ (cm - 1)
RMSECV/
(mg·mL - 1)
11 995. 2~7 497. 9、
6 101. 7~4 597. 5
0. 149
7 501. 8~4 597. 5 0. 081
11 995. 2~4 597. 5 0. 087
9 746. 6~7 497. 9、
5 777. 7~5 449. 9 
0. 043
4 601. 4~4 246. 5 0. 106
11 995. 2~7 497. 9、
4 601. 4~4 246. 5
0. 075
7 501. 8~6 097. 9、
4 601. 4~4 246. 5 
0. 053
11 995. 2~6 097. 9、
4 601. 4~4 246. 5
0. 048
6 101. 7~5 449. 9、
4 601. 4~4 246. 5 
0. 077
11 995. 2~7 497. 9 6、
101. 7~5 449. 9
0. 067
波数范围/ (cm - 1)
RMSECV/
(mg·mL - 1)
7 501. 8~5 449. 9、
4 601. 4~4 246. 5 
0. 053
11 995. 2~5 449. 9、
4 601. 4~4 246. 5
0. 048
5 453. 7~4 246. 5 0. 111
11 995. 2~7 497. 9、
5 453. 7~4 246. 5
0. 133
7 501. 8~6 097. 9、
5 453. 7~4 246. 5 
0. 082
11 995. 2~6 097. 9、
5 453. 7~4 246. 5
0. 085
6 101. 7~4 246. 5 0. 111
11 995. 2~7 497. 9、
6 101. 7~4 246. 5
0. 135
7 501. 8~4 246. 5 0. 082
11 995. 2~4 246. 5 0. 083
216  建立校正模型并运用模型预测未知样品 :为进
一步检验建模效果 ,对 3 批 122 个提取液样品 ,在光
程 2 mm、最小2最大归一化预处理、最优波数范围
9 74616~7 49719、577717~5 44919 cm - l 下 ,随机
选取其中 101 个样本建模 ,用其余 21 个样本预测 ,
结果如见表 4。
217  药材产地对建模结果的影响 :取不同产地及批
号的药材分别制备样品供试品溶液 ,共制得样品 3
批 ,按照其制备次序命名为安神第四、五、六批。测
定样品中有效成分的质量浓度 ,取各个批次的一煎
19 个样品扫描其近红外光谱建模 ,建模结果见表 5。
结果显示 ,不同产地药材间建模结果影响不大 ,说明
本方法可行。另取安神第一批 19 个样本用 25 m 长
光纤扫描其近红外光谱与之前短光纤一煎 19 个样
品建模结果做以比较 ,见表 6。结果表明 ,光纤长度
对建模结果影响不大 ,实际生产中可以忽略。
3  讨论
鉴于中药成分复杂 ,中药复方成分更为复杂 ,在
·622· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
表 3  PLS在不同波数范围下淫羊藿苷建模的 RMSECV值
Table 3  PLS Model’s RMSECV of icariin in different wave number ranges
波数范围/ (cm - 1)
RMSECV/
(mg·mL - 1)
11 995. 2~7 497. 9 0. 050
7 501. 8~6 097. 9 0. 082
11 995. 2~6 097. 9 0. 056
6 101. 7~5 449. 9 0. 053
11 995. 2~7 497. 9、
6 101. 7~5 449. 9
0. 038
7 501. 8~5 449. 9 0. 074
11 995. 2~5 449. 9 0. 050
5 453. 7~4 597. 5 0. 154
11 995. 2~7 497. 9、
5 453. 7~4 597. 5
0. 118
7 501. 8~6 097. 9、
5 453. 7~4 597. 5 
0. 101
11 995. 2~6 097. 9、
5 453. 7~4 597. 5
0. 093
6 101. 7~4 597. 5 0. 147
波数范围/ (cm - 1)
RMSECV/
(mg·mL - 1)
11 995. 2~7 497. 9、
6 101. 7~4 597. 5
0. 120
7 501. 8~4 597. 5 0. 102
11 995. 2~4 597. 5 0. 090
9 746. 6~7 497. 9、
5 777. 7~5 449. 9 
0. 041
4 601. 4~4 246. 5 0. 116
11 995. 2~7 497. 9、
4 601. 4~4 246. 5
0. 072
7 501. 8~6 097、
4 601. 4~4 246. 5
0. 058
11 995. 8~6 097. 9、
4 601. 4~4 246. 5
0. 060
6 101. 7~5 449. 9、
4 601. 4~4 246. 5 
0. 085
11 995. 2~7 497. 9、
6 101. 7~5 449. 9
0. 065
波数范围/ (cm - 1)
RMSECV/
(mg·mL - 1)
7 501. 8~5 449. 9、
4 601. 4~4 246. 5 
0. 061
11 995. 2~5 449. 9、
4 601. 4~4 246. 5
0. 059
5 453. 7~4 246. 5 0. 121
11 995. 2~7 497. 9、
5 453. 7~4 246. 5
0. 106
7 501. 8~6 097. 9、
5 453. 7~4 246. 5 
0. 097
11 995. 2~6 097. 9、
5 453. 7~4 246. 5
0. 087
6 101. 7~4 246. 5 0. 122
11 995. 2~7 497. 9、
6 101. 7~4 246. 5
0. 108
7 501. 8~4 246. 5 0. 098
11 995. 2~4 246. 5 0. 086
表 4  运用模型预测未知样本
Table 4  Result of modeling on test of unseen samples
二苯乙
烯苷
D
RMSEE
( RMSEP)
R2 淫羊藿苷 D
RMSEE
( RMSEP)
R2
校正集
预测集
5
010563
010487 01 953 801 959 8 校正集预测集 5 01 039 301 043 2 01975 601963 8
表 5  不同产地及不同批次药材之间对实际样品预测
结果的影响
Table 5  Resuit of different habitats and different
batches on test of practical samples
成分      产地        R2    RMSECV





安神第一批 四川 0609001   01 993 1   01 021 8
安神第二批 四川 0609007   01 992 0   01 020 6
安神第三批 贵州 0605012   01 982 8   01 020 1
安神第四批 贵州 0605008   01 987 7   01 021 9
安神第五批 安徽 0608007   01 996 3   01 022 3
安神第六批 安徽 0608011   01 982 6   01 021 8




安神第一批 吉林 051005    01 993 1   01 020 8
安神第二批 吉林 051008    01 991 2   01 020 6
安神第三批 陕西 0603001   01980 8   01 020 l
安神第四批 陕西 0603012   01 982 7   01 021 1
安神第五批 甘肃 0502003   01 994 3   01 020 3
安神第六批 甘肃 0502012   01 985 6   01 020 8
实际工艺生产中较难控制其有效成分的量。本实验
根据实际物系所建立的两个模型可良好的预测安神
补脑液水提液中的二苯乙烯苷和淫羊藿苷的量。此
  表 6  不同光纤长度对谱图的影响
Table 6  Result of different lengths of f iber
成分
短光纤 长光纤
R2 RMSECV R2 RMSECV
二苯乙烯苷 0. 993 1 0. 021 8 0. 913 4 0. 074 6
淫羊藿苷 0. 975 5 0. 036 2 0. 913 4 0. 074 6
外 ,本实验还根据指纹图谱各峰的归属 ,对安神补脑
液中的其他药材的有效成分也进行了建模 ,亦取得
了良好的结果 ,可用于指导中药复方在提取过程中
有效成分的快速检测和质量控制。
光谱范围和光谱处理方法的选择对所建模型的
精确度影响很大 ,应对各种情况分析结果进行对比 ,
以选择合适的光谱范围和处理方法。本实验还比较
了不同产地及不同批次药材之间对建模的影响 ,结
果差异小。此外 ,考虑到实际生产中用 25 m 长光
纤进行扫描光谱图谱时信号是否会衰减 ,本实验比
较了长光纤与短光纤的建模效果 ,结果差异不大 ,说
明本实验建立的方法可行 ,为中药的在线检测提供
参考。
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川芎挥发油中藁本内酯在大鼠体内的药动学研究
刘  洋1 ,胡连栋2 ,唐 星3 3 
(1. 郑州大学药学院 ,河南 郑州  450000 ; 2.河北大学药学院 ,河北 保定  071002 ;
3. 沈阳药科大学 ,辽宁 沈阳  110016)
摘  要 :目的  测定川芎挥发油中藁本内酯在大鼠体内的药动学。方法  采用 RP2HPLC 法 ,以蛇床子素为内标物
测定大鼠口服川芎挥发油的β2环糊精包合物后藁本内酯的血药浓度 ,使用 3P97 药动学软件计算其药动学参数。
结果  藁本内酯在大鼠体内符合二室模型 ,主要的药动学参数 : tl/ 2 (α) 为 (11429 ±11161) h , tl/ 2 (β) 为 (61877 ±
21275) h , t (peak)为 (31401 ±11951) h ,AUC 为 (70187 ±25192) μg/ mL ·h。结论  以蛇床子素为内标 ,RP2HPLC
法能够准确、灵敏地测定藁本内酯在大鼠体内的药动学。
关键词 :川芎 ;藁本内酯 ;蛇床子素 ;药动学 ;反相高效液相色谱
中图分类号 :R286102    文献标识码 :A    文章编号 :025322670 (2009) 0220228203
Pharmacokinetics of l igustil ide in Ligusticum chua nxiong essential oil in rats in vivo
L IU Yang1 , HU Lian2dong2 , TAN G Xing3
(1. College of Pharmacy , Zhengzhou University , Zhengzhou 450000 , China ; 2. College of Pharmacy , Hebei University ,
Baoding 071002 , China ; 3. Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016 , China)
Abstract : Objective  To investigate t he i n v ivo p harmacokinetics of ligustilide in L i g usticum chuan2
x ion g essential oil af ter ig administ ration in rat s. Methods  The concent ration of ligustilide in plasma of
rat s af ter ig administ ration ofβ- cyclodext rin compound in L . chuanx iong enssential oil was determined by
RP2H PL C method wit h t he osthole as t he internal standard. The plasma concent ration2time curve was
plotted. The main p harmacokinetic parameters of ligustilide were obtained by 3P97 sof tware. Results  Li2
gustilide in rat s fit s t he two compart ment s model and the main p harmcokinetic parameters were as follows :
tl/ 2 (α) , ( 11429 ±11161) h ; tl/ 2 (β) , ( 61877 ±21275) h ; t (peak) , ( 31401 ±11951) h ; and AUC were
(70187 ±25192) μg/ mL ·h , respectively. Conclusion  RP2H PL C Met hod wit h osthole as t he internal
standard is accrurate , sensitive , and rapid for t he st udy on p harmacokinetics of ligustiliden in rat s i n vi vo.
Key words : L i g usticum chuanx ion g Hort . ; ligustilide ; ost hole ; p harmacokinetics ; RP2H PL C
  藁本内酯为伞形科植物川芎 L i g usticum
chuan x iong Hort . 挥发油的主要活性成分 ,具有较
强的抗胆碱作用 ,是评价川芎药材及其制剂的重要
依据之一[1~4 ] 。近年来随着研究的深入 ,发现藁本
内酯是一个很有发展前途的化合物 ,相比于川芎中
的川芎嗪、阿魏酸等成分而言 ,藁本内酯的研究更有
必要深入化[ 5 ] 。由于藁本内酯稳定性问题十分突
出 ,因此其药动学的研究报道鲜见。本研究采用
CO2 超临界萃取技术提取川芎中的挥发油成分 ,测
定其中藁本内酯 ,并采用β2环糊精包合技术将挥发
油固化和稳定化后给大鼠灌胃 ,选择合适的内标物
测定了藁本内酯大鼠口服后的体内药动学[ 6 ] 。
1  仪器与试药
CL C —6A 型日本岛津高效液相色谱仪 ,SPD —
6AV 型检测器 ,Anasta 色谱工作站 , T GL —16B 型
超速离心机 (上海安亭科学仪器厂) , YKH —Ⅲ快速
混合器 (江西医疗器械厂) 。
藁本内酯对照品 (自行提纯 ,经 GC2MS 分析质
·822· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008205216   
作者简介 :刘 洋 (1980 —) ,女 ,河南省新乡市人 ,讲师 ,从事基因药物给药系统研究工作。
Tel :13673638040  E2ma i l :liuyang8016 @l26. com