全 文 ：·414· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
表1 大补阴丸对CJ—S。致敏小鼠T、B淋巴细胞活性及血清中抗ds—DNA、ss—DNA抗体水平的影响(；±s，一一10)
Table1 EffectofDabuyinPillonT，Biymphocytesactivitiesands—DNA，ss—DNAantibodylevels
inserumofCJ—S13lsensitizedmice(；士s，n=10)
与正常组比较：+P<0．05一P<0．01；与模型组比较：△△P<0．01
。P<0．05。’P<0．01vsnormalgroup：△△P
甲亢、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝炎等，目
前尚无满意的治疗药物，因此研究和开发低毒高效
控制自身免疫性疾病的新药是国际发展趋势。大补
阴丸是中医滋补肾阴的经典名方，临床上发现用其
治疗某些自身免疫疾病疗效肯定，但目前相关实验
研究较少，在肝炎的治疗研究中也未见相关报道。
本实验结果表明，大补阴丸可明显减轻CJ—SⅢ
致敏小鼠肝脏自身免疫性炎症反应，而且可降低血
清中抗ds—DNA、SS—DNA抗体水平。表明大补阴丸
对CJ—SⅢ所致自身免疫反应有改善作用。此外，大
补阴丸对CJ—Sm致敏小鼠异常亢进的脾细胞增殖
反应具有明显的调节作用，提示大补阴丸对CJ—Sm
致敏小鼠自身免疫性病理变化的改善作用与其纠正
整体免疫功能失调有关。而且和地塞米松组相比也
有其特点，其T、B淋巴细胞活性接近正常水平
(P>0．05)，而地塞米松组T、B淋巴细胞活性降至
正常以下(P<0．05)。提示中药大补阴丸的免疫抑
制作用较缓和。
本实验初步揭示了大补阴丸对自身免疫疾病的
免疫调节作用，由于只设了一个成人常用剂量组，所
以可在此基础上加设大、小两个剂量，以便摸索出一
个最佳剂量。并且可以继续追踪分离具有改善CJ—
Sm致敏小鼠免疫功能状态的大补阴丸中的活性组
分，并以肝炎小鼠为模型进行进一步研究，从而为大
补阴丸治疗肝炎等自身免疫性疾病打下基础。
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山楂叶抽提物对人脐静脉内皮细胞中过氧化氢的清除作用
兰文军，郑筱祥+
(浙江大学生物医学工程与仪器科学学院，浙江杭州 310027)
H。O：可引发细胞膜中的不饱和脂肪酸脂质发
生过氧化反应、破坏细胞膜；还能诱发细胞凋亡
(apoptosis)，促使DNA链断裂，从而损伤细胞，参
与多种病理机制。Chatterjee等[13报道，山楂的叶和
花的总抽提物WSl442有抗氧化作用。本实验研究
了富含黄酮的山楂叶抽提物对人脐静脉内皮细胞
(humanumbilicusveinendothelialcel ，HUVEC)
中H：O：的清除作用，以探讨此抽提物抗氧化作用。
1材料
流式细胞仪(FACSort，BD，美国)；微板读取
仪(Microplatereader550，Bio—Rad，美国)；紫外
分光光度计(GeneQuantPro，AmershamPhar a—
cia，英国)；PI染料(Caltag，美国)；H：O：试剂盒和
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)试剂盒购自南京
收稿日期：2004—06—07
作者简介：兰文军(1971～)，男，江苏泰州人，博士研究生，研究方向为肿瘤和心血管药物(中药)的体外筛选与评价。
Tel：(0571)87932962E—mail：lanwenjun0522@hotmail．com
*通讯作者
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·415·
建成生物工程公司；山楂叶抽提物(含80％总黄
酮)，由浙江省药品鉴定所提供；胰酶购自Difco公
司(美国)；RPMI1640培养基购自Gibco公司(美
国)；24孔培养板为Nunc公司产品(丹麦)。
2 方法
2．1 HUVEC的收集[2]：健康产妇的脐带来自浙江
大学医学院附属妇幼医院。清洗脐带，0．25％胰酶
消化内皮细胞，温育15min后，PBS液清洗；将胰酶
消化液和PBS清洗液1300r／min离心10min，收
集细胞；细胞在24孔培养板(含10％小牛血清的
RPMI1640培养基)中培养至融合状态备用。
2．2 HUVEC的处理：细胞培养在24孔培养板中，
除正常组细胞外，其余各实验组加H。O：于细胞培养
上清液中(终浓度为20mmol／L)并孵育细胞0．5
h；移去上清液，清洗细胞，重新加入含10％小牛血
清的RPMI1640培养基(完全培养基)；山楂叶抽
提物大、中、小剂量组分别加入终质量浓度为20、
10、1ffg／mL山楂叶抽提物。培育8h，进行流式细
胞术检测(每组3复管)、GSH—Px和H。O：检测(每
组6复管)。
2．3 H。O。定量检测：收集1×106HUVEC，加入
200ffL0．5％TritonX一100，摇匀，作用2min；
2500r／min离心10min后，取上清液200肛L；按
试剂盒说明书，制备空白管、标准管和测定管，微板
读取仪于405nm处测定吸光度(A)值。样本中
H。O。含量按下式计算。
H202一(A测定A空自)／(A标准一A空自)×标准品浓度×测
试样本体积
2．4 GSH—Px活性检测
2．4．1酶促反应A值测定：收集1×106HUVEC，
加入200ffL0．5％TritonX一100，摇匀，作用2
min；2500r／min离心10min后，取上清200肛L；
按试剂盒说明书，制备非酶管、样本管、标准管和空
白管，用微板读取仪于415nm处测定A值。
2．4．2细胞总蛋白定量[3]：收集1×106HUVEC，
加入200肛L0．5％TritonX—100，摇匀，作用2
min；加入Laemmli样品缓冲液(20％SDS、10％
甘油、60mmol／LTris，pH6．8)1mL；样品置
70℃加热10min，2500r／min离心10min后，取
上清液；紫外分光光度法测定蛋白含量。
总蛋白一1．55A280一0．76A260
2．4．3样本中GSH—Px活力：计算公式如下。
GSH—Px活力单位一(A非酶管--Am管)／(A标准管一A空自管)×
标准管浓度／(反应时间×蛋白含量)
2．5 细胞毒(细胞死亡率)检测：收集1×106HU—
VEC；用PBS配50ffg／mLPI染料浓缩液，取PI
浓缩液100弘L，加入到1mL的细胞液中，放置5
min。采用流式细胞仪携带的CellQuestTM软件进行
FL2红色荧光通道检测和数据分析。为了设定分析
用Marker，同时准备未染色的细胞。
2．6统计分析：结果以z±S表示，两样本均数比较
采用Student—t检验。
3 结果
山楂叶抽提物对H。O。预处理的HUVEC中
H。O。含量、GSH—Px活性及细胞毒作用的影响，结
果见表1。10、20ffg／mL山楂叶抽提物剂量依赖性
地降低H。O：预处理的HUVEC中的H。O：含量，与
模型组比较差异显著(P
较差异显著(P
HUVEC，细胞死亡率与模型组比较差异显著(P<
0．01)。1ffg／mL山楂叶抽提物组各项指标与模型
组比较差异均无显著性。
表1 山楂叶抽提物对H：O：诱导的HUVEC中H：o：含量、
GSH—Px活性和细胞毒的影响(x±s)
Table1 EffectofhawthornleafextractonH202level，
GSH—Pxactivity。andcytotoxicityofHUVEC
inducedbyH202(z±s)
组别 剂量， H202“m。l 死亡率／％
／(根．Ⅲ--。I一1)
GSH-Px／(U‘g-1)
与模型组比较：一P
以往研究表明，山楂的叶和花的总抽提物
WSl442有抗氧化作用口]，且植物中所含的黄酮被
认为是天然的抗氧化剂n]。本实验以H。O。诱导的
HUVEC为模型，研究了山楂叶抽提物(含80％总
黄酮)对HUVEC中H。O：的清除作用，结果显示，
山楂叶抽提物降低了HUVEC中的H。O：含量，表
明山楂叶抽提物可清除HUVEC中的H：O。。
消除H。O。的抗氧化防御体系分为酶系和非酶
系，前者主要是GSH—Px、过氧化氢酶(CAT)；后者
主要是一些蛋白、还原型谷胱甘肽(GSH)和维生
素E[51等。GSH—Px可将三肽的谷胱甘肽转化为其
万方数据
·416· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
氧化形式(2GSH+H。O：-+GSSG+2H：O)，由此能
清除H。O。。本实验观察了山楂叶抽提物对HUVEC
中GSH—Px活性的影响。结果显示，在H。O。处理
HUVEC后，加入富含黄酮的山楂叶抽提物可以促
进GSH—Px的活性，表明山楂叶抽提物可通过调控
GSH—Px活性，清除HUVEC中的H。O：。
在本实验结果中，富含黄酮的山楂叶总抽提物
可剂量依赖性地降低H。O。预处理的HUVEC中的
H。O。含量。然而，此抽提物激活HUVEC的GSH—
Px活性却是以非剂量依赖方式。这些结果提示：富
含黄酮的山楂叶总抽提物可能还通过其他途径降低
HUVEC中的H：O：含量。本实验还应用流式细胞
术，研究了山楂叶抽提物对H。O。所致细胞毒的抑制
作用。结果显示，富含黄酮的山楂叶抽提物可以抑制
H。O。所致HUVEC的损伤，提示此抽提物可通过清
除HUVEC中过量H。O：而起到细胞保护作用。
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八昧锡类散不同途径给药治疗大鼠溃疡性结肠炎的药效对比研究
刘端勇h2，赵海梅2，赵宁3，赵林华3，贾红伟3，肖诚3，吕 诚3，赵红艳3，何颖辉2，辛增平2，吕爱平1’铲
(1．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330077；2．江西中医学院，江西南昌330006；
3．中国中医研究院基础理论研究所，北京100700)
八味锡类散具有清热解毒、消肿止痛之功。常用
于内有蕴热、外感时邪引起的瘟疫白喉、咽喉肿痛及
溃疡性结肠炎(UC)等的治疗，用于治疗uc时常
用的方法是声。和灌肠，但究其两种不同途径给药
治疗uc的疗效和作用机制对比分析鲜见报道，本
实验即从此角度出发，对二者进行对比实验研究。
1材料与方法
1．1动物及分组：新西兰家兔8只(中国药品生物
制品检定所实验动物中心)。清洁级健康SD大鼠
72只(北京大学医学部实验动物科学部)，雌雄各
半，体重(160±i0)g，随机分成正常组、灌胃模型
组(模型I组)、灌肠模型组(模型Ⅱ组)、八味锡类
散灌胃治疗组(治疗I组)、八味锡类散灌肠治疗组
(治疗Ⅱ组)、柳氮磺吡啶组(阳性对照组)，每组12
只，常规饲养3d后使用。
1．2 主要药物及试剂：八味锡类散每支1g(北京
同仁堂股份有限公司，批号4100008)；柳氮磺吡啶，
每片0．25g(上海三维制药有限公司，批号
200403C09)；盐酸氯胺酮注射液(Jz海第一生化药
业有限公司，批号951020)；CD4、CD8单克隆抗体
(BDBiosciences公司产品)；CD4、CD8免疫组化试
剂盒(SANTA公司产品)；完全弗氏佐剂(Sigma
公司产品)；肿瘤坏死因子一a(TNF—a)免疫组化试
剂盒(武汉博士德生物工程有限公司产品)。
1．3仪器：Leica图像分析仪和Qwinl00图像分析
处理系统(德国Leica公司)；EPICS(XL)流式细
胞仪(美国Coulter公司)；SABA全自动生化仪
(意大利SABA公司)。
1．4造模方法：按文献方法进行[1]。抗原乳化液的
制备：取家兔分离结肠黏膜，加适量生理盐水置组织
捣碎机中捣碎，于一20℃下保存24h后，溶冻，再
以4000r／min离心30min，取其上清液即抗原原
液并测得其蛋白质量浓度(14．5g／L)。取抗原原液
与等量完全弗氏佐剂混匀为10mg／mL溶液，然后
用注射器反复抽吸、充分乳化，制成抗原乳化液。大
鼠致敏与处理方法：除正常组外，其他各组大鼠均予
收稿日期：2004—05—11
基金项目：江西省企业创新基金(2003—239)
作者简介：刘端勇，男，江西中医学院国家工程研究中心2002级方剂专业硕士研究生。
*通讯作者Fax：(010)64013896Tel：(olo)64067611E—mail：lap@jzjt．com
万方数据
山楂叶抽提物对人脐静脉内皮细胞中过氧化氢的清除作用
作者： 兰文军， 郑筱祥
作者单位： 浙江大学,生物医学工程与仪器科学学院,浙江,杭州,310027
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 5次
参考文献(5条)
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