全 文 ：·1498· 中草鸯ChineseTraditionalandHerlmlDrugs第38告第10期2007年10月
大孔吸附树脂纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸的研究
姚干，何宗玉，闫光凡，粱亦龙，谢婷婷，陶建
(重庆邮电大学生物信息学院，重庆400065)
摘 要：目的研究大孔吸附树脂纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸的动态吸附与解吸工艺，为工业化生产提供参
考。方法采用高教液相色谱法测定齐墩果酸和熊果酸的量I运用静态吸附与解吸试验对树脂型号进行筛选．结合
单因索试验优选女贞子齐墩果酸和熊果酸的纯化操作条件。结果HPD-100树脂对齐墩果酸和熊果酸的吸附与解
吸性能较好；吸附的优化条件为树脂床径高比1-6，料液质量浓度0．20g(生药)／mL，体积流量2BV／h和吸附容
量2．4mL／g(树脂)，最佳解吸条件为乙醇体积分数80％，体积流量2BV／h和溶剂用量4BV}产品中齐墩果酸、熊
果敢的质量分数分别为25，21％、15．65％。转移率分别达98．64“、§8．58％。结论HPD一]00可有效地富集，纯化
女贞子中齐墩果酸和熊果酸。
关键调：女贞子I齐墩果酸f熊果酸}大孔吸附树脂
中圈分类号：R284．2{R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2007)10—1498—04
Purificationofaleanolicac dandursolicacidfromFructusLigustriLucidi
bymacroporousresin
YAOGan，HEZong—yu，YANGuang—fan，LIANGYi—long，XIETing—ting，TAOJian
(CollegeotBioirdormation，ChongqmgUniversityofPostsandTelecommunications，Chongqing400065fhina)
Keywords：FructusLigustHLucidi；aleanolicacid；ursolieacid；macroporousresin
。
女贞子系木犀科植物女贞Ligustrumlucidum
Ait．的干燥成熟果实，为常用的补益肝肾中药，齐
墩果酸和熊果酸是其主要有效成分。以往女贞子皂
苷类成分的提取纯化工艺研究仅以单一成分齐墩果
酸作为定量指标“)。本实验采用高效液相色谱法同
时测定齐墩果酸和熊果酸o]，以二者的比吸附量或
解吸率之和作为评价指标[33，优选大孔吸附树脂纯
化女贞子中齐墩果酸和熊果酸的工艺条件。
1仪器与材料
Waters1525型高效液相色谱仪；AG285分析
天平(瑞士MetderToledo)；SHQT一8自动液相色
谱分离色谱仪(上海)；R502一B旋转蒸发仪；zPD一
150型振荡培养器；L～550型台式低速大容量离心
机；KQ一3200B超声波清洗器。FL一1、FL一2、SA一1
大孔吸附树脂，天津欧瑞生物科技有限公司}ADS一
7、ADS一8大孔吸附树脂，天津南开和成科技有限公
司；HPD一100。HPD一450、HPD一600大孔吸附树脂，
沧闸宝思化工有限公司。甲醇为HPLC色谱纯，其
余试剂均为市售分析纯。齐墩果酸(批号110709—
200304)和熊果酸对照品(批号110742—200304)均
购自中国药品生物制品检定所。女贞子购自重庆康
济医药有限公司，由重庆邮电大学生物信息学院同
光凡副教授鉴定为木犀科植物女贞￡．1ucidumAit．
的干燥成熟果实。
2方法与结果
2．1 齐墩果酸和熊果酸的HPLC法测定
2．1．1色谱条件：KromasilC18色谱柱(250mill×
4．6mm，5btm)；流动相：乙腈一甲醇一水一乙酸胺
(70l 16．5±13．5：0．5)；体积流量：lmL／min；检
测波长：215nm；进样量：10HL。
2．1．2标准曲线的绘制：精密吸取齐墩果酸和熊果
酸混合对照品甲醇溶液(质量浓度均为lmg／mL)
0．4、0．8、1．2、1．6、2．0mL，定容至5mL，进行
HPLC分析。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐
标，绘制标准曲线，得回归方程。齐墩果酸Y；
4 387．91X～22．09，r一0．99994。线性范围：0．08～
0．40mg／mL；熊果酸Y=2964．38X一20．84，r=
0．9991。线性范围：0．08～0．40mg／mL。
2．2吸附原液的制备：采用HPLC法测得女贞子药
材中齐墩果酸和熊果酸的质量分数分别为0．765％、
0．475％。取女贞子药材适量，粉碎成20目，加8倍量
收穑13期：2007—0I一¨
荐妻磊界：曩庆-邮]-电(1大970学--博)十,男启,盏萧禽擘跫：岔蛊乏要?譬望茎耋贵季拿著著霎露譬善：}j8：等况5制42及9)中药新药研究，
Tel：(023)6247tz86E-mail：cdyaogan@sina．coin
万方数据
中苹菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第10期2007年10胄
80％乙醇回流提取3次，每次1．5h，台并提取液，回
收乙醇，剩余物用蒸馏水充分溶解，离心，取上清液作
为吸附原液(质量浓度以生药计为0-4g／mL)。以下
各项试验根据具体情况调整药液质量浓度。
2．3大孔吸附树脂型号的选择
2．3．1静态吸附性能比较：根据齐墩果酸和熊果酸的
理化性质和树脂的吸附性能，选用FL一1、FL一2、SA-1、
ADS一7、ADS一8、HPD一100、HPD一450、HPD一6008种
型号树脂进行试验。临用前，取不能过65目药典筛的
树脂，按说明书方法预处理后使用。精确称取树脂5g，
置100mL碘量瓶中，加入质量浓度为0．2g／mL药
液50mI．，120r／min振摇(30℃)，每隔lh从上清液
中取样，进行HPLC法分析，计算比吸附量[比吸附
量一(吸附前药液质量浓度一吸附后药液质量浓度)×
药液体积／大孔吸附树脂质量]。以比吸附量为纵坐标，
时间为横坐标，绘制静态吸附曲线。从图1可以看出，
在前3h内，树脂吸附速率随时问的延长而快速升高，
而后渐趋饱和，5h后基本达到吸附平衡。在静态吸附
饱和状态下，HPD一100的比吸附量最大，SA一1、ADS一
7次之，均明显高于其他s种树脂。
t／h
圈1静态吸附曲线
Fig．1Staticadsorptioncurve
2．3．2静态解吸性能比较：将已吸附了齐墩果酸和
熊果酸的SA—l、ADS7和HPD一100树脂滤过，除去
水渡，置碘量瓶中，加入60％乙醇50mL，120r／min
振摇(30℃)，每隔1h从上清液中取样，进行HPLC
法分析，计算解吸率[解吸率=(洗脱液质量浓度×
洗脱液总体积)／吸附总量x100％]。以解吸率为纵
坐标，时间为横坐标，绘制静态解吸曲线。由图z可
知，60％乙醇均可不同程度地将齐墩果酸和熊果酸
从3种树脂上解吸下来。其中，HPD一100的解吸率
最大，解吸能力最强，优于其余2种树脂。
综合比吸附茸和解吸率两项指标，选用HPD—
100富集、纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸。
2．4 HPD一100吸附女贞于中齐墩果酸和熊果酸的
影响因素研究：将适量HPD一100湿法装柱(柱规格：
100
专
嚣80
譬
60
t／h
图2静态解吸曲线
Fig．2StaticdesorptioncurVo
50cm×2era)，取300mL药液按径高比、质量浓
度、体积流量和pH值的不同水平进行动态吸附，吸
附完毕后，加2BV蒸馏水洗脱，收集流出液，进行
HPLC法分析，计算比吸附量。
2．4．1径高比对吸附效果的影响：固定质量浓度
0．2g／mL、体积流量2BV／h，考察树脂床径高比为
1；3、1l 4、1I 5、1l 6、1l 7、1I 8、1：9的比吸附
量。从图3可以发现，HPD一100富集齐墩果酸和熊果
酸的能力随径高比的降低而提高。当径高比为1；6
时，比吸附量达到最大，此后随着径高比的降低，比吸
附量逐渐下降。原因可能是随着径高比的降低，药液
流动的阻力增加，影响了齐墩果酸和熊果酸在树脂床
内部的扩散，故径高比宜控制在1：6左右。
F5
，
舅4
＼
型。
孽
茁2
I
径商比
圈3径高诧与比蹶附量的关系
Fig．3Relationshipbetweenratioofheightviadiame-
terandcomparativeiflassofadsorption
2．4．2质量浓度对吸附效果的影响：固定体积流量
2Bv／h、径高比1t 6，考察药液质量浓度为0．08、
0．12、0．16、0．20、0．24、0．28、0．32g／mL的比吸附
量。从图4可以看出，HPD一100富集齐墩果酸和熊
果酸的能力随着质量浓度的增加而提高。当质量浓
度为0．20g／mL时，比吸附量达到最大，此后随着
质量浓度的增加，比吸附量逐渐下降。原因可能是随
着质量浓度的增加，与齐墩果酸和熊果酸竞争吸附
的杂质量也随之增加，比吸附量相应减少，故质量浓
瑚，o哪删黔煺黯艘
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万方数据
·1500· 中草嚆ChineseTraditionalandHerlmlDrugs第38卷第10期2007年10月
质量浓度／(rag‘mL-1)
圈4齐墩果酸和熊累酸的质■浓度与比吸附量的关系
Fig．4Relationshipbetweenco centrationofolea olie
acidandursollcacidandcomparativemass
ofadsorption
度宜控制在0．20g／mL左右。
2。4．3体积流量对吸附效果的影响：固定质量浓度
0．20g／mL、径高比ll 6，考察体积流量为1、1．5、
2、2．5、3、3．5、4BⅣ／h7个水平的比吸跗量。由图5
可知，HPD一100富集齐墩果酸和熊果酸的能力随体
积流量的增加而降低。原因可能是如果体积流量过
大，一部分齐墩果酸和熊果酸来不及被树脂吸附便
流出树脂床。当体积流量为2BV／h时，齐墩果酸和
熊果酸的比吸附量较大，低于该值时，比吸附量未见
明显增加。虽然较低的体积流量对吸附有利，但会延
长操作周期，对生产不利，故体积流量宜控制在2
BV／h左右。
停积流量／(BV·h叫)
田5体积流量与比吸附量的关系
Fig．5Relationshipbetweenluentvolumeand
comparativemassofadsorption
2．4．4pH值对吸附效果的影响：固定质量浓度
0．Z0g／mL、树脂床径高比1l 6和体积流量2BV／
h，考察pH值为3．31、4．33，5．32、6．35、7．34、8．36
的比吸附量。从图6可以看出，HPD一100富集齐墩
果酸和熊果酸的能力随着pH值的增加而提高。当
pH值为6．35时，比吸附量达到最大，此后随着pH
值的增加，齐墩果酸和熊果酸的比吸附量逐渐下降，
故药液pH值宜控制在6．35左右。
pH僵
图6 pH与比吸附量的关系
Fig．6RelationshipbetweenHvalueandcomparative
massofadsorption
根据上述各项单因素实验结果，确定HPD一100
吸附女贞子中齐墩果酸和熊果酸的优化条件为：径
高比1：6、质量浓度0．20g／mL、pH6．35、体积流
量zBV／h。按该条件进行3次重复性试验，结果齐
墩果酸、熊果酸的比吸附量分别为3．75mg／g(RSD
为0．77％)、2．33mg／g(RSD为0．65％)。
2．5吸附容量的考察：按上述优化条件，取300mL
药液加入树脂床(含50gHPD一100树脂)中。收集
30份流出液(5mL／份)，进行HPLC弦分析，分别
计算流出液中齐墩果酸和熊果酸的质量浓度(C)。
以冼脱体积为横坐标，齐墩果酸和熊果酸之和的c／
c。为纵坐标，绘制吸附泄漏曲线。图7表明，流份25
中齐墩果酸和熊果酸的之和C／Co为流份24的
8．51倍，明显表现出泄漏现象，按每段流份5mL计
算，总上样体积为120mL，即1gHPD一100的最佳
吸附容量为2．4mL，相当于0．6g生药。
。】2
，
。04
o
0 08 1．6 24 3．2
洗脱体积／BV
图7吸附泄膏曲线
Fig．7Adsorption—leakageentve
2．6洗脱液乙醇体积分数的考察：按上述优化条
件，将120mL药液加入树脂床中，吸附完毕后，依
次用0、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、
80％、90％乙醇进行洗脱(体积流量2BV／h)，溶媒
用量以相应的终点洗脱液颜色变浅(在56013m处
无紫外吸收)为度。分别收集洗脱液，进行HPLC法
万方数据
中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDr gs第38卷第10期Z007年10月·15 1·
分析，计算齐墩果酸和熊果酸的累积解吸量。从图8
可以看出，齐墩果酸和熊果酸主要集中在30％～
80％乙醇洗脱液中，蒸馏水和90％乙醇洗脱液中很
少。因此确定洗脱工艺为上样后先以蒸馏水2BV
洗脱杂质后，继以80％乙醇洗脱树脂床中的齐墩果
酸和熊果酸。
■
督
琏
嚣
磷
己耳停积分嚣／％
重8乙醇体积分散对齐墩果酸和熊果酸解吸效累影响
Fig．8Elatingefficiencyofdifferentco centration
ofethanolto eanolicac dandursolicacid
2．7解吸曲线的绘制：按上述优化条件，将IZ0mL
药液加入树脂床中，吸附完毕后，先用2BV蒸馏水
洗脱，继以80％乙醇进行洗脱，收集30份乙醇洗脱
液(10mE／份)，进行HPLC法分析，计算洗脱液质
量浓度。以洗脱体积为横坐标，质量浓度为纵坐标，
绘制解吸曲线。图9表明，流份21的质量浓度为流
份20的1／30倍，表明此时树脂床中的齐墩果酸和
熊果酸基本解吸完全。按每段流份10mL计算，溶
媒用量为200mL，相当于4倍树脂床容积。提示解
吸溶媒最佳用量为4BV。
理后总量／处理前总量×100％]。采用相同方法进行
3次重复试验。结果，过柱前、后干膏平均收率分别
为13．60％(RSD为0．88跖)、2．44％(RSD为
0．82％)，平均精制度为5．57(RSD为0．72％)；齐
墩果酸、熊果酸过柱前质量分数分别为4．59％
(RSD为1．31％)、2．85％(RSD为1，05％)，过柱后
分别为25．21％(RSD为1．31％)、15．65％
0．55“)、98．58％(RSD为0．59％)。
3讨论
不同产地来源的女贞子药材中，皂苷类有效成
分以齐墩果酸为主，但熊果酸也占1／5以上[I]。因
此，对女贞子进行质量评价时，有必要将齐墩果酸与
熊果酸分离测定，工艺研究也应同时兼顾两种成分。
女贞子皂苷类有效成分的定量控制在《中国药
典》采用薄层扫描法，规定了齐墩果酸的下限，但操
作繁琐，精密度和重现性较差。齐墩果酸和熊果酸的
结构与性质类似，在HPLC法检测时，若以甲醇一水
为流动相，齐墩果酸和熊果酸分离度仅为1．1，分离
效果不理想，一般需分别测定，工作量和试验误差均
会增加。实验以乙腈一甲醇一水一乙酸胺(70；16．5：
13．5，0．5)作为流动相“]，图谱基线平稳，分离度大
于1．5，二成分基线分离，操作简化、方法可靠，定量
准确、快速。
关于女贞子皂苷类有效成分的制备，目前国内
主要有3种生产工艺口]：醇提一酸水解法、醇提一酸碱
反复处理法和醇提一酸碱处理法，存在或收率不高、
或耗时较长、或操作复杂等缺点，而且仅以齐墩果酸
作为评价的指标成分。这样，女贞子中的另一有效成
分熊果酸就有可能提取不充分，造成资源浪费，故有
必要在工艺中同时考虑熊果酸的收率及质量分数。
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B
6
4
2^．．1E品m)，世蛙栅《
万方数据
大孔吸附树脂纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸的研究
作者： 姚干， 何宗玉， 闫光凡， 梁亦龙， 谢婷婷， 陶建， YAO Gan， HE Zong-yu， YAN
Guang-fan， LIANG Yi-long， XIE Ting-ting， TAO Jian
作者单位： 重庆邮电大学生物信息学院,重庆,400065
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(10)
被引用次数： 9次
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