全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1197·
蝎皮蛋白质组分对正常小鼠免疫功能的影响
张 莉，吴 立，吕 扬，杜冠华‘
(中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所，北京 100050)
摘要：目的研究蝎皮蛋白质组分对正常小鼠免疫功能的影响，为蝎皮开发利用和发现新的活性物质提供实验
依据。方法 采用刃天青和MTT法检测蝎皮水溶性总蛋白(STP)、总角蛋白(STKP)及水溶性蛋白组分Ⅱ
(STPⅡ)对正常小鼠T、B淋巴细胞转化、NK细胞杀伤活性的作用。结果STP和STKPig给药后，小鼠脾T淋
巴细胞增殖反应高于正常对照组，但只有STP小剂量组与对照组比较差异显著(P结果显示STKP大、小剂量均可加强增殖反应，与对照组比较差异极显著(P<0．05、0．01)。STP和STKP大、小
剂量组NK细胞杀伤活性与对照组相比有升高趋势。STPⅡ两个剂量组100、200mg／kgig给药均能明显抑制正常
小鼠T、B淋巴细胞增殖反应，与对照组相比差异极显著。STPⅡ大剂量组NK细胞杀伤活性与对照组相比有降低
趋势，但无统计学意义。结论STP和STKP具有一定的提高免疫功能的作用，STPⅡ则具有抑制免疫功能的活
性。揭示蝎皮蛋白质组分具有免疫调节药理活性，值得深入研究。
关键词：蝎皮蛋白质组分；正常小鼠；免疫功能
中图分类号：R286．95 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)08—1197—04
Effectsofscorpiontegumentpro einon mmunefunctioninnormalmice
ZHANGLi，WULi，LUYang，DUGuan-hua
(InstituteofMateriaMedica，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnion
MedicalCo lege，Beijing100050，China)
Abstract：ObjectiveTostudyeffectsofscorpiontegumentprotein(STP)onimmunologicalfunction
innormalmiceandprovideexperimentaldataforsearchingnewcompounds．MethodsR sazurinand
MTTassaywereusedtodetecttheffectsofscorpiontegumentwater—solubleprot in，scorpiontegument
keratinprotein(STKP)andSTPcomponentⅡ(STPⅡ)onthetransformationofTandBlymphocytes，
andNKcellactivityinnormalmice．ResultsByigSTPandSTKP，theproliferationesponseofTlym—
phocyteinmurinespleenwashigherthanthatinnormalcontrolgroup，whileonlytherewasignificant
differencebetweenlow—dosefSTPgroupcomparedwiththenormalcontrolgroup(P<0．001)．Adminis—
trationofSTKPbyiginbothlarge—·andsmall——dosegroupsalsosignificantlyincreasedBlymphocytespro——
liferationresponse(PandSTKPgroupscomparedwiththenormalcontrolgroup．However，STPⅡ(100and200mg／kg)
showedextremelyinhibitoryeffectsonTandBlymphocyteproliferationesponse．STPⅡ(200mg／kg)
couldinhibitac ivityofNKcell，buttherewasnosignificantdifferencecomparedwiththecontrolgroup．
ConclusionSTPandSTKPpossesspotentialimmuno——improvingeffectsandSTPII hasimmuno——suppres——
siveeffects．ItindicatesthatSTPhastheimmuno—regulatingactiv tythatshouldbestudiedfurtherly．
Keywords：scorpiontegumentprotein(STP)；normalmice；i munologicalfunction
全蝎是传统医学中常用中药，主要是指东亚钳
蝎ButhusmartensiiKarsch的干燥体，性味辛平，具
有熄风止痉、攻毒、散结、通络止痛之功效。蝎毒或全
蝎具有抗惊厥、抗癫痫、抗肿瘤、镇痛、抗血栓、促进
心率加快等多方面的作用。而关于东亚钳蝎在生长
过程中主要代谢产物蝎皮所含成分及其药理活性尚
未见报道。本课题组从蝎皮中提取到相对分子质量
大于8000的水溶性总蛋白和总角蛋白，并进一步
分离得到13个组分，体外药理实验发现均能显著
促进T、B淋巴细胞增殖反应和NK细胞活性L1j。为
了进一步探讨蝎皮蛋白质组分的药理活性，以期从
中发现新的活性物质，本实验观察东亚钳蝎的蝎皮
收稿日期：2004—11—28
基金项目：国家自然科学基金资助项且(30171148，3001161940)；国家中医药管理局中医药科技研究专项(02—03ZP08)
作者简介：张莉(1972--)，女，河南安阳市人，副研究员，博士，研究方向为药物发现与中药机制研究。
Tel：(010)63165184Fax：(010)63165184E—mail：zhangli@imm．ac．cn
*通讯作者杜冠华Tel：(010)63165184Fax：(010)63165184E—mail：dugh@imm．ac．cn
万方数据
·1198· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
蛋白质组分体内给药对正常小鼠免疫功能的影响。
1材料
1．1 药品与试剂：2～6年生蝎子皮由江苏海门市
家养蝎子技术咨询服务站提供。葡聚糖凝胶
SephadexG一50填料，中国医学科学院血液学研究
所生产。伴刀豆球蛋白A(ConA)，Sigma公司产
品。脂多糖(LPS)购自华美生物有限公司。RPMI一
1640培养液，BIBCL公司产品，完全1640培养液含
青霉素100U／mL、链霉素100／一g／mL、谷氨酰胺2
mmol／L、10％胎牛血清。其余试剂均为市售分析纯。
1．2 动物和细胞株：BALB／c小鼠，雌性，体重
18～22g，购自中国医学科学院动物研究所繁育场。
Yac一1细胞、小鼠NK敏感细胞株，购自中国医学科
学院基础医学研究所细胞中心。
1．3仪器：Flustar微板多功能测定仪，德国BMG
公司生产。
2 方法
2．1 蝎皮蛋白质组分的制备：蝎皮粉碎，加蒸馏水
搅拌4h，静置沉淀，上清液于4℃、8000r／min离
心10min。取上清液抽滤，得透明液体。沉淀经反复
水抽提至提取液硫酸铵盐析呈阴性。合并上清液得
总蛋白液，加入硫酸铵至90％进行盐析，4℃下静
置48h，可见淡黄色絮状沉淀。总蛋白液经6000r／
min离心10min，收集沉淀，去离子水溶解，18℃
下温和搅拌3h促溶，待蛋白质完全溶解后离心，条
件同上，收集上清蛋白液，下层沉淀加入蒸馏水继续
溶解，搅拌促溶、离心，收集上层蛋白溶液。合并上清
蛋白溶液，4。C下透析除盐，透析完全后，浓缩冻干
得水溶性总蛋白(简称STP)。以牛血清白蛋白为标
准品，Foline酚法测定STP质量分数为49．76％。
另取STP1g，加去离子水溶解后，分多次加样
到SephadexG一50凝胶色谱柱上，蛋白质量浓度为
10mg／mL。以去离子水洗脱，体积流量1．0mL／
min。洗脱组分于紫外检测仪280nm处检测，按检
测峰分部收集流出组分，获得水溶性蛋白组分II
(STPⅡ)，冻干待用。以牛血清白蛋白为标准品，Fo—
line酚法测定STPⅡ质量分数为64．18％。
提取水溶性蛋白剩余的全部残渣烘干，得到淡
黄色粉末，加入巯基乙酸(14tool／L)一尿素(8mol／
L)溶液，NaOH调节溶液pH值至10，室温搅拌48
h。静置沉淀弃上清液，8000r／rain离心8min，抽
滤，滤液用醋酸调节pH至中性后透析去除尿素，每
天换水3次，3d后透析完全，浓缩冻干得总角蛋白
粉末(简称STKP)。以牛血清白蛋白为标准品，Fo—
line酚法测定STKP质量分数为50．31％。
2．2 T、B淋巴细胞转化实验：实验分两批进行。第
1批：取50只BALB／c小鼠，随机分为正常对照组、
STP大、小剂量(200、100mg／kg)、STKP大、小剂
量(200、100mg／kg)组，每组10只小鼠。第二批：
取30只BALB／c小鼠，随机分为正常组、STPⅡ
大、小剂量(200、100mg／kg)组，每组10只小鼠。
两批动物均ig给药，连续两天，每12h1次，共3
次。实验结束后，常规无菌取小鼠脾脏，轻轻研磨，过
200目钢网，RPMI1640培养液洗1次，2000r／min
离心5min，弃上清液。细胞沉淀用双蒸水、双盐水
(1．8％NaCl溶液)各洗1min，破坏红细胞，离心
后弃上清液。完全1640培养液调细胞浓度至2．5×
106／mL，每孔100扯L，种于96孑L板，同时加ConA
(终质量浓度5／tg／mL)或LPS(终质量浓度5p-g／
mL)，每孔100弘L。另设空白对照孑L(未加诱导剂)，
37℃、5％CO。孵育72h，培养结束前4h，加刃天青
10弘L(终质量浓度5／lmol／L)，培养结束后，测定
荧光强度(激发波长530nm，发射波长590nm)，
并按下列公式计算淋巴细胞刺激指数：
刺激指数一实验孔荧光值／对照孑L荧光值
2．3 NK细胞杀伤活性测定：实验分组及给药方式
同2．2项。实验结束后，按上述方法获取脾细胞，用
完全1640培养液调细胞浓度至5×106／mL，另取
Yac一1细胞，完全1640培养液调细胞浓度至5×
105／mL，分别种于96孔板。设以下组别：效应细胞
组(脾细胞，每孔100_f上L)、靶细胞组(Yac一1细胞，
每孔100肛L)，实验(效应细胞和靶细胞)组(脾细
胞和Yac一1细胞，每孔各100肛L)。37℃、5％CO：孵
育24h后，培养结束前4h加MTT(终质量浓度
500／,g／mL)，培养结束后测吸光度(A)值。按下列
公式计算杀伤率：
NK细胞杀伤率一鱼丝型d；超麴[二婪塑×100％
』1靶细胞
2．4统计：数据以z±S表示，组间比较采用t检验。
3 结果
3．1 STP和STKP对正常小鼠免疫功能的影响：
见表1。STP和STKPig给药后，小鼠T淋巴细胞
增殖反应高于正常组，但只有STP小剂量组与正常
组比较差异极显著(P应结果显示STKP大、小剂量均可加强增殖反应，
与正常组比较差异显著(P还表明STP和STKP有提高NK细胞杀伤活性的
趋势。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1199·
3．2 STPⅡ对正常小鼠免疫功能的影响：见表2。
STPⅡ两个剂量组ig给药均能明显抑制正常小鼠
T、B淋巴细胞增殖反应，与正常组相比差异极显
著。STPⅡ大剂量组NK细胞杀伤活性与正常组相
比有降低趋势，但无统计学意义。
．表1 STP和STKP对正常小鼠免疫功能的
影响(；±S，n=10)
Table1 EffectsofSTPandSTKPonimmunological
functionofnoriliaImice(；+s。n一10)
删。篡警。，淼淼蒜我
正常
STP
STKP
一 1．13士o．12 1．10±o．0636．52士15．OO
100 1．36±o．08⋯1．06±o．1726．8 ±10．66
200 1．23±0．17 1．05±0．0943．39±17．65
100 1．11±0．12 1．25±0．17”41．28±12．48
200 I．24±0．13 1．27±0．10’+40．04±19．04
与正常对照组比较：。P+P<0．05’+P表2 STPⅡ对正常小鼠免疫功能的影响(j±s，n—10)
Table2 EffectsofSTPⅡonimmunologicalfun tion
ofnormalmice(j±S，即=10)
与正常组比较：一P’’P4讨论
早在宋代《开宝本草》中记载全蝎已应用于临
床，言其性喜走窜，凡肝经诸风，疮疡肿毒及风湿痛
等皆可用之。现代临床上也多用全蝎治疗疼痛、癫
痫、肿瘤等。研究认为全蝎抗肿瘤或镇痛的主要活性
成分为蝎毒，采用有机溶剂超声提取，离子交换柱色
谱，提纯后，发现蝎毒为多肽类成分，相对分子质量
为18000、26000、28000[2]，包括神经毒素I、神经
毒素Ⅱ、抗癫痫活性的多肽、镇痛性多肽如蝎毒素m
等。药理实验表明蝎毒对急性渗出性炎症作用明显，
对慢性增生性炎症有一定作用，但对以过敏性反应
为主的炎症作用不明显[3“]。蝎毒中提取的抗癌多肽
可提高H。。荷瘤小鼠的免疫功能、增加NK细胞活
性、淋转指数。蝎毒提取物尚能促进神经受损修复和
再生口]。目前除蝎毒外未见全蝎其他活性成分的报
道，蝎皮是东亚钳蝎生长过程中的代谢产物，每隔一
段时间钳蝎就要蜕一次皮，每蜕一次皮增加一龄，7
龄蝎才为成蝎，因此在东亚钳蝎长成成蝎的过程中
可获得大量蝎皮。为了探讨蝎皮是否含有活性物质，
本实验对提取的蝎皮蛋白质组分在免疫功能方面的
影响作了初步研究。
。
本实验结果表明，从蝎皮中提取的STP和
STKP体内给药后，对小鼠T淋巴细胞增殖反应有
促进作用，但只有STP小剂量组与正常对照组比较
差异显著。对小鼠B淋巴细胞增殖反应，STKP
100、200mg／kg均有促进活性，与正常组小鼠比较
差异显著，STP组作用不显著。STP和STKP各剂
量组NK细胞杀伤活性与对照组相比有升高趋势。
STPⅡ两个剂量组体内给药后能明显抑制正常小
鼠T、B淋巴细胞增殖反应，与对照组相比差异极显
著，STPⅡ大剂量组NK细胞杀伤活性与对照组相
比也有降低趋势。ConA诱导的T淋巴细胞增殖反
应代表了机体的细胞免疫功能，而LPS刺激的B
淋巴细胞增殖反映了机体的体液免疫功能。由此可
见，STP和STKP在一定程度上对正常小鼠免疫功
能，特别是细胞免疫功能显示增强活性，而STP中
分离的组分STPⅡ则具有较强的免疫抑制作用。
前期的体外实验结果显示，从蝎皮中获得的13
个蛋白质组分均可显著促进T、B淋巴细胞的增殖
反应，其中STPⅡ的促进作用与对照组相比较差异
极显著[1]。结合体内外实验结果可见，STP和STKP
能够增强免疫功能，所分离的组分可能也多具有免疫
促进作用。STPⅡ体外提高淋巴细胞增殖反应而体
内抑制淋巴细胞转化，分析可能与其代谢后产物发挥
免疫抑制活性等原因有关，但尚需进一步验证。另有
研究表明全蝎和蝎身煎剂能够抑制小鼠网状内皮系
统对碳粒的廓清作用和血清溶血素的形成，说明全蝎
对非特异性免疫和体液免疫有抑制作用[6]，全蝎乙醇
提取物ig给药具有抗大鼠足趾肿胀、肉芽肿的作
用口]。分析认为全蝎的抗炎作用可能与蝎皮内含有免
疫抑制成分有关。本实验结果提示，蝎皮蛋白质组分
既含有免疫促进成分也含有免疫抑制成分，值得深入
研究，有望从中发现新的免疫活性物质。
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龙葵碱对荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响
季宇彬，王宏亮，高世勇
(哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨 150076)
摘 要：目的观察龙葵碱对s。和H：。荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响。方法将sm和Hz。荷瘤小鼠分
为龙葵碱37．50、18．75、9．37mg／kg组、阴性对照组和环磷酰胺(30mg／kg)组，各组SC给药。利用激光共聚焦扫
描显微镜，分别测定各组肿瘤细胞中的DNA和RNA。结果龙葵碱(37．50、18．75mg／kg)组对S-so和Hzz小鼠肿
瘤细胞RNA和DNA的比值均有明显的降低作用。结论龙葵碱降低S。。。和Hzz小鼠肿瘤细胞RNA和DNA的
比值可能是其抗肿瘤作用机制之一。
关键词：龙葵碱；肿瘤细胞；DNA；RNA
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)08—1200—03
EffectofsolanineonDNAandRNAintumorcelloftumor—bearingmice
JIYu—bin，WANGHong—liang，GAOShi—yong
(PostdoctoralPr gramme，InstituteofMateriaMedica，HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveToobserveth ffectsof olanineoDNAandRNAlevelintumorcellofS180
andH22tumor—bearingmice．MethodsS180andH2zmiceweredividedintosolanine(37．50、18．75，and
9．37mg／kg)groups，negativecontrolgroupandcytoxan(30mg／kg)group，whomweregivendrugsby
SC．LevelsofRNAandDNAintumorcellmembraneinev rygroupswereexamined，respectivelybylaser
scanningconfocalmicrotechnictechnology．ResultsSolanine(37．50、18．75mg／kg)groupseducedthe
ratioofRNAandDNAintumorcellofbothS】80andH22mice．ConclusionSolaninecanreducetheratio
ofRNAandDNAintumorcellofS180andH22mice，whichmaybeoneofthemechanismsofsolanine
7
S
antitumoreffect．
Keywords：solanine；tumorc ll；DNA；RNA
龙葵碱是从茄科植物龙葵SolanumigrumL．
的全草或未成熟的果实中提取分离出的一种生物
碱。前期研究发现龙葵碱能显著延长H。。荷瘤小鼠
的生存时间[13，并能显著降低H。。荷瘤小鼠肿瘤细
胞膜流动性及膜蛋白水平[2]。为进一步研究龙葵碱
抗肿瘤作用机制，本实验研究龙葵碱对荷瘤小鼠肿
瘤细胞RNA和DNA的影响。
1材料
1．1 药物：龙葵碱(质量分数99．5％)，由黑龙江
省药品检验所提供；环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有
限公司，批号：03081321。
1．2动物及瘤株：昆明种小鼠，体重(20±2)g，雌
雄各半，购于哈尔滨医科大学动物中心，许可证号
001010006。S。。。和H：。瘤株购于黑龙江省肿瘤医院。
1．3试剂及仪器：吖啶橙(AO，MolecularProbes，
Inc．)；生理盐水；细胞计数板：激光扫描共聚焦显微
镜，德国Leica；HH—S恒温水浴；LD。一2A型台
式低速离心机(北京医用离心机厂)；QL一861型
涡旋混合振荡器(上海博停经贸有限公司)；尤尼
柯紫外可见分光光度计。
2方法
2．1 分组、给药与造模：选用成熟昆明种小鼠50
收稿日期：2004—12-05
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30400591，30271598)；黑龙江省自然科学基金资助项目(D2004—13，C0309)；哈尔滨市青年科
学基金资助项目(2004AFQXJ035)；哈尔滨市科学研究基金(2004AFQXJ034)
作者简介：季宇彬(1956一)，男，博士，教授，博士生导师，研究方向为分子药理学与肿瘤药理学。
万方数据
蝎皮蛋白质组分对正常小鼠免疫功能的影响
作者： 张莉， 吴立， 吕扬， 杜冠华， ZHANG Li， WU Li， L(U) Yang， DU Guan-hua
作者单位： 中国医学科学院,中国协和医科大学药物研究所,北京,100050
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(8)
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