全 文 ：大理大学学报
JOURNAL OF DALI UNIVERSITY
第1卷 第8期 2016 年8月
Vol.1 No.8 Aug. 2016
［DOI］10. 3969 / j. issn. 2096-2266. 2016. 08. 001
［基金项目］国家自然科学基金资助项目（81260632；81450053）；云南省教育厅科学研究基金资助项目（2014Z132）
［收稿日期］2016-02-28 ［修回日期］2016-04-06
［作者简介］邵维莉，硕士研究生，主要从事药理学研究 .
*通信作者：张海珠，副教授 .
松塔（Pinecone）系松科（Pinaceae）松属（Pinus）
植物的球果，别名松果、松球，其植物来源有华山
松、云南松、红松、油松及思茅松等。研究发现松塔
中的一些抗癌活性成分具有抗肿瘤、抗菌及抗病毒
作用〔1-2〕并有高效、低毒的特点〔3-4〕。并且，SAKAGA⁃
MI等〔5〕还提出松塔提取物中的抗肿瘤、抗HIV、抗菌
活性成分可能是多糖的耦合物。此外，随着研究的
深入，郭美仙等〔6〕研究发现云南松松塔提取物对乙
醇损伤大鼠肝细胞有一定的抗氧化作用，于冬梅
等〔7〕及刘中禄等〔8〕最近研究表明云南松提取物具
有一定抗癌活性和抑制肝癌细胞增殖的作用，高
浓度下对正常肝细胞和小鼠淋巴细胞毒性小。
NAGASAWA等〔9〕还报道了日本白松松塔提取物降
低小鼠乳汁中乳房肿瘤病毒（MMTV）含量的作用。
因此，本实验以有关松塔的各项研究为基础，大胆推
测云南松松塔是通过影响机体免疫系统从而改善机
体的状况，探讨云南松松塔乙醇提取物（YN-DEF）
对正常小鼠的免疫功能的影响，为进一步研究云
南松的药用开发提供理论依据。
1 试验材料
YN-DEF（云南松松塔）：采自大理州漾濞县，经
大理大学药学与化学学院生药学教研室段宝忠副
教授鉴定为松科属植物云南松（Pinus yunnanensis
Franch.）的松塔乙醇提取物；IgA、IgM、IgG、C3、C4
酶联免疫检测试剂盒（MABTECH生物公司）、盐
酸左旋咪唑（广东南国药业有限公司，批号：
20150115），XFA6000动物血细胞分析仪用稀释液
（南京普朗医疗设备有限公司，批号：PD1501）；HB
探针清洗液（南京普朗医疗设备有限公司，批号：
PB9407）；ANI-3D溶血剂（南京普朗医疗设备有限
公司，批号：PF24020），HB含酶清洗液（南京普朗医
疗设备有限公司，批号：PB7501）。
昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由昆明
医科大学动物实验中心提供，动物合格证号为
SCXK（滇）2011-0004。
酶标分析仪（基因有限公司，Gen5型），全自动
动物血细胞分析仪（南京普朗医疗设备有限公司，
型号XFA6000）。
2 方法
2.1 动物分组与给药 分组：50只小鼠，实验组设
置为正常组，阳性对照组，给药高剂量组、中剂量
组、低剂量组，共5组。雌雄各半，每组10只。
云南松松塔提取物对正常小鼠免疫功能的影响
邵维莉 1，吴道勋 1，李 杨 1，2，刘 熙 1，刘光明 1，张海珠 1，2*
（1.大理大学药学与化学学院，云南大理 671000；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，
云南大理 671000）
［摘要］目的：研究云南松松塔提取物对正常小鼠免疫功能的影响。方法：昆明种小鼠灌胃给予高、中、低剂量（400、200、100
mg/kg）的松塔提取物，阳性对照药左旋咪唑（25 mg/kg），连续给药10 d后，处死小鼠，测定小鼠血清中免疫球蛋白 IgA、IgM、IgG
和补体C3、C4的含量，测全外周血细胞数，计算脾脏指数和胸腺指数。结果：云南松松塔提取物能增加外周血中的免疫球蛋白
IgA、IgM、补体C4的含量和白细胞数，与正常组相比差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论：云南松松塔提取物对正常小鼠的
免疫功能有一定的增强作用。
［关键词］云南松；松塔；正常小鼠；免疫球蛋白；补体；外周血细胞
［中图分类号］R285 ［文献标志码］A ［文章编号］2096-2266（2016）08-0001-03
1
大理大学学报总第8期 医学
给药：正常组给予生理盐水，0.2 mL/10 g；阳性
对照组盐酸左旋咪唑（0.2 mL/10 g）25 mg/kg；给药
高剂量组、中剂量组、低剂量组（0.2 mL/10 g），分别
以400、200、100 mg/kg给药，各组连续给药10 d。
2.2 检测指标 末次给药后禁食12 h，从眼内眦静
脉取血，取20 μL全血测白细胞、红细胞、血小板；剩
余全血分离血清，置-20 ℃冰箱保存备用，颈椎脱臼
处死小鼠取肝组织匀浆。取其胸腺和脾脏称量，计
算脾脏指数和胸腺指数：脾脏指数=脾脏重量
（mg）／小鼠体重量（g），胸腺指数 =胸腺重量
（mg）／小鼠体重量（g）；分别用血清检测免疫球蛋
白 IgA、IgM、IgG和补体C3、C4。
2.3 数据分析 采用SPSS21.0分析软件进行统计
学分析，数据用（ xˉ ± s）表示，各组均数的比较用单因
素方差分析（One-Way ANOVA），P<0.05为差异具有
统计学意义。
3 结果与分析
3.1 云南松松塔提取物对正常小鼠外周血免疫球
蛋白的影响 给药组与正常组对比，云南松松塔提
取物高、中、低剂量组对正常小鼠外周血中的免疫
球蛋白 IgA差异均有统计学意义（P<0.05），与阳性
对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；低剂量
组还呈现出对免疫球蛋白 IgM的增强作用，与正常
组比较差异具有统计学意义（P<0.05），而与阳性对
照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；此外，各给
药组对 IgG的变化无论是与阳性组比较还是与正常
组比较均无明显影响（P>0.05），但 IgG随着浓度的
增加呈增加趋势，呈一定的量效关系。见表1。
表1 云南松松塔提取物对正常小鼠血清中
免疫球蛋白的影响（ xˉ ± s）
组别
正常组
阳性对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
剂量 /(mg/kg)
—
25
100
200
400
IgA/(g/L)
0.191±0.093
0.274±0.047a
0.273±0.018a
0.294±0.054a
0.256±0.040a
IgM/(g/L)
0.255±0.068
0.263±0.032
0.320±0.084a
0.263±0.038
0.284±0.064
IgG/(g/L)
0.036±0.032
0.044±0.027
0.032±0.008
0.046±0.016
0.054±0.026
注：与正常组比较 aP < 0.05。
3.2 云南松松塔提取物对正常小鼠外周血中补体
的影响 给药组与正常组比较，各组均对正常小鼠
外周血中的补体C4有显著性的增加作用，且差异具
有统计学意义（P<0.05），但其增加作用并不随浓度的
增加呈逐渐递增或递减趋势。与阳性对照组比较，虽
然中、高剂量组并无明显差异性，但与低剂量组比较
差异具有统计学意义（P<0.05）。此外，针对各给药组
对补体C3的影响，无论是与阳性对照组比较还是和
正常组比较差异均无统计学意义（P>0.05），但随着
浓度的增大，其作用呈逐渐增加的趋势，构成一定的
量效关系。见表2。
表2 云南松松塔提取物对正常小鼠外周血清中
补体的影响（ xˉ ± s）
组别
正常组
阳性组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
剂量/（mg/kg）
—
25
100
200
400
C3 /(g/L)
0.739±0.425
0.557±0.374
0.666±0.084
0.698±0.193
0.786±0.183
C4/ (g/L)
0.045±0.017
0.050±0.019
0.071±0.011a b
0.064±0.012a
0.062±0.018a
注：与正常组比较 aP<0.05；与阳性组相比 bP<0.05。
3.3 云南松松塔提取物对正常小鼠免疫器官指数
的影响 给药组与正常组和阳性组比较，云南松松
塔提取物对正常小鼠胸腺指数和脾脏指数作用均
不明显，且差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。
表3 云南松松塔提取物对正常小鼠免疫器官
指数的影响（ xˉ ± s）
组别
正常组
阳性组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
剂量 /（mg/kg）
—
25
100
200
400
胸腺指数/（mg/g）
3.54±1.45
2.73±1.05
2.77±0.90
2.71±1.11
2.86±2.00
脾脏指数/（mg/g）
3.82±1.83
3.02±0.87
3.31±1.28
2.95±2.21
3.21±0.72
3.4 云南松松塔提取物对正常小鼠外周血细胞的
影响 给药组与正常组比较，云南松松塔提取物对
正常小鼠白细胞数有增加的作用，其中高剂量的增
加差异具有统计学意义（P<0.05），但与阳性对照组
比较差异无统计学意义（P＞0.05）；而各给药组与阳
性对照组及正常组比较，对红细胞和血小板的影响
差异均无统计学意义（P>0.05）。见表4。
2
总第8期 第1卷邵维莉，吴道勋，李 杨，等 云南松松塔提取物对正常小鼠免疫功能的影响
表4 云南松松塔提取物对正常小鼠外周血细胞的
影响（xˉ ± s）
组别
正常组
阳性组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
剂量/
（mg/kg）
—
25
100
200
400
白细胞/
（109个/L）
2.50±0.97
3.17±1.50
2.85±0.89
2.51±0.97
3.96±1.17a
红细胞/
（1012个/L）
7.74±0.49
7.22±0.48
7.46±0.55
7.10±1.11
7.07±0.84
血小板/
（109个/L）
952.20±261.41
1 001.77±243.89
939.33±288.80
823.77±380.81
904.77±202.43
注：与正常组比较 aP<0.05。
4 讨论
IgA、IgM、IgG免疫球蛋白作为机体的主要效应
分子，在免疫系统中免疫球蛋白具有免疫防御、免
疫监视和免疫自稳的作用，在血清和体液中的免疫
球蛋白的含量可随着疾病的发生而改变；而C3、C4
补体则既可参与机体的特异性免疫也可参与机体
的非特异性免疫的调节，故免疫球蛋白和补体在机
体中含量直接影响着机体的免疫功能，两者含量的
测定结果均可成为反映机体免疫状态的两个重要
指标。由上述实验结果显示，云南松松塔提取物选
择性地提高了免疫球蛋白 IgA、IgM及C4补体的含
量，表明松塔提取物对正常小鼠体液免疫和体内非
特异性免疫有一定的调节作用。研究中还发现，云
南松松塔提取物对正常小鼠的外周白细胞数有明
显的增加作用，所以云南松松塔提取物对增强固有
免疫也有一定的效果。但对免疫器官指数没有明
显的影响，与史志婷等〔10〕研究松塔提取物对小鼠急
性毒性实验结果相同。
实验结果表明，云南松松塔对增强正常小鼠的
免疫功能有一定的作用。以此实验为基础，进一步
探讨云南松松塔增强免疫的作用，将会为今后选择
治疗获得性或非获得性免疫低下疾病有效药物，提
供一个参考依据。
［参考文献］
〔1〕施贵荣，郭美仙，李冬梅，等 . 思茅松松塔化学成分研
究〔J〕.大理学院学报，2014，13（2）：1-2.
〔2〕侯芳玉，孙延波，盛学成，等 .松籽壳酸性多糖生物学作
用的研究〔J〕.中草药，1995（4）：193-196.
〔3〕吴道勋，刘璐，王莹，等 .云南松松塔中原儿茶酸提取工
艺的研究〔J〕.大理学院学报，2014，13（4）：4-7.
〔4〕吕永俊，王士贤，彭芳，等 .松果有效成分研究Ⅵ红松与
油松松塔及松子壳的抗癌活性〔J〕. 大理学院学报，
2008，7（2）：1-3.
〔5〕SAKAGAMI H，KAWAZOE Y，KOMATSU N，et al. Antitu⁃
mor，antiviral and immunopotentiating activities of pine
cone extracts：potential medicinal efficacy of natural and
synthetic lignin-related materials（review）〔J〕. Anticancer
Res，1991，11（2）：881-888.
〔6〕郭美仙，李冬梅，刘光明，等 .云南松松塔提取物含药血
清对乙醇损伤大鼠肝细胞的抗氧化作用〔J〕.中国实验
方剂学杂志，2015，21（20）：103-106.
〔7〕于冬梅，李冬梅，刘熙，等 .云南松松塔提取物对人肝癌
细胞增殖的影响〔J〕. 时珍国医国药，2014，25（12）：
2835-2837.
〔8〕刘中禄，吕铁钢，张永亮 .松子壳多糖对小鼠主要免疫细胞
功能的影响〔J〕.中国比较医学杂志，2010，20（10）：33-37.
〔9〕NAGASAWA H，IWAI Y，IWAI M，et al. Suppression by a
pine cone extract of Pinus parviflora Sieb et Zucc of mammary
tumour virus in milk of mice〔J〕. Anticancer Res，1992，12
（3）：845-847.
〔10〕史志婷，刘熙，张海珠 .云南松松塔抗HIV-1活性提取物
急性毒性实验研究〔J〕.大理学院学报，2014，13（8）：4-6.
（责任编辑 李 杨）
The Effect of Pinecone Extract of Pinus Yunnanensis on Immune Function of Normal Mice
Shao Weili1, Wu Daoxun1, Li Yang1，2, Liu Xi1, Liu Guangming1, Zhang Haizhu1,2*
（1. College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China; 2.Yunnan Provincial Key Laboratory ofEntomological Biopharmaceutical R&D, Dali, Yunnan 671000, China）
〔Abstract〕Objective: To study the effect of pinecone extract of Pinus Yunnanensis on immune function of normal mice. Methods:Kunming mice were administered high, middle and low dose of pinecone extract（400,200,100 mg/kg）, 25 mg/kg Levamisole by gavageand the mice were sacrificed after 10 days. The content of immunoglobulin IgA, IgM, IgG, complement C3 and C4 in mice serum wasmeasured; the amount of peripheral blood cell, spleen index, and thymus index were measured as well. Results: The pinecone extractof Pinus Yunnanensis could increase immunoglobulin IgA, IgM, complements C4 and WBC in peripheral blood content. Compared withnormal group, the difference reflects statistical significance（P< 0.05）. Conclusion: The pinecone extract of Pinus Yunnanensis canenhance the immune function of normal mice .
〔Key words〕Pinus yunnanensis；pinecone；normal mice；immunoglobulin；complement；peripheral blood cell
3