全 文 ：·224· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
TNF—a和IFN一7的生成，发挥免疫促进活性，与以
往研究一致[9]。猪苓多糖与IEL共同培养时，仅在2
mg／mL时可以得到TNF—a和IFN一7水平升高的
结果，而在1、0．5mg／mL时，TNF—a和IFN一7水
平无明显变化，人参多糖则对IEL分泌TNF—a和
IFN一7的水平无明显影响，这可能与多糖的相对质
量浓度过低，不足以活化该部位的Thl细胞，抑或
与Th2细胞活化有关。研究表明[1叩低剂量的抗原
可以导致T细胞介导的主动抑制，当抗原进入黏膜
后，被抗原呈递细胞摄取，经过复杂的加工，呈递，诱
导Th2细胞分泌抑制性细胞因子IL一4、IL一5和
TGF—B等，在这些细胞因子的作用下，引导免疫应
答的主动抑制，导致TNF—a和IFN一了的分泌减少。
猪苓多糖和人参多糖与LPL共同培养时，淋巴细胞
分泌TNF—a和IFN一7的能力均受到不同程度的抑
制。这种抑制的原因可能是：(1)Th2细胞活化，分
泌IL一4、IL一10、TGF—p等抑制因子，使得机体对外
来抗原的特异性的免疫应答被抑制；(2)由于在固
有层的淋巴细胞中CD4+细胞仅有8．06％，使得抗
原的相对水平升高，从而导致CD4+细胞凋亡。
本研究结果说明猪苓多糖和人参多糖对
PBMC和PP淋巴细胞具有活化作用，可以诱导
TNF—a和IFN一7生成；同时在一定的质量浓度下，
引起肠上皮内和黏膜固有层的淋巴细胞的免疫功能
低下，这种低下是否能减少肠道黏膜免疫通常反映
的免疫抑制作用，以及这种免疫影响形成的机制有
待于进一步研究。
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汉防己甲素大鼠在体肠吸收机制研究
张颖1’2，蒋学华p
(1．四川大学华西药学院，四川成都610041；2．四川抗菌素工业研究所，四川成都610051)
摘 要：目的 研究汉防己甲素在大鼠在体肠吸收机制。方法 采用大鼠在体肠段灌流实验，利用紫外分光光度法
和HPI。C法分别测定酚红和汉防己甲素的量，分别研究药物质量浓度和吸收部位对汉防己甲素吸收的影响。结果
在5．4～21．8btg／mL药物质量浓度对小肠吸收速率常数(K。)无影响；各肠段的K。回肠>空肠>结肠>十二指
肠，分别为0．1686、0．1260、0．1254、0．1109h～。结论汉防己甲素的吸收符合一级动力学特征，吸收机制为被
动扩散；汉防己甲素在各肠段均有较好的吸收。
关键词：汉防己甲素；在体肠灌流；吸收速率常数；膜表观渗透系数
中图分类号：R285．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0224—05
收稿日期：2006—06—01
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30271614；30572373)
作者简介：张颖，女，硕士研究生，副研究员，从事药物新制剂研究。
*通讯作者蒋学华Tel：(028)85501370E—mail：jxhl013@vip．163．com
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·225·
Mechanismof ntestinalabsorptionoftetrandrineinrats
ZHANGYin91’2，JIANGXue—hual
(1．westChinaSchoolofPharmacy，SichuanUniversity，Chengdu610041。China：
2．SichuanIndustrialInstituteofAntibiotics，Chengdu610051，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethemechanismsofintestineabsorptionoftetrandrineinrat．
MethodsTheintestineinratwascannulatedforinsituperfusion．UVa dHPLCwereusedtOdetermine
theconcentrationofphen01sulfonphthaleinandtetrandrine，respectively．Theeffectofdrugconc ntration
andabsorptionsiteontheabsorptionhadbeenstudied．ResultsTheconcentrationoftetrandrinef om
5．4tO21．8／19／mLhadnodistinctiveeffecton heabsorptionkineticsofsmallintestine．Theabsorption
rateconstants(K。)were0．1686，O．1260，O．1254，0．1109h1atileum>jejunum>colon>duodenum，
respectively．ConclusionTheabsorptionoftetrandrineiS first—orderprocesswithpassivediffusion
mechanism．TetrandrineiSwellabsorbedatallsegmentsofintestineinrats．
Keywords：tetrandrine；insituperfusion；absorptionrateconstants；apparentpermeabilitycoefficient
汉防己甲素又名粉防己碱(tetrandrine)，是从
防己科植物汉防己AristolochiaobliquaS．M．
Hwang的干燥块根中提取的一种双苄基异喹啉类
生物碱，具有消炎、镇痛、降压、抗纤维化、抗肿瘤等
药理作用，用于治疗高血压、矽肺、肿瘤等疾病，已取
得较好疗效，临床应用前景广泛n]。近年来有学者对
汉防己甲素在犬体内的分布特征和家兔体内药动学
进行研究[2’3]，但有关汉防己甲素的肠吸收机制的研
究未见报道。本实验选用大鼠在体肠灌流的方法建
立了汉防己甲素大鼠肠吸收模型，采用HPLC法测
定汉防己甲素的量，并对汉防己甲素吸收机制及在
大鼠各肠段的吸收动力学特征进行了初步探讨，以
期为汉防己甲素制剂的现代化研究提供生物药剂学
依据。
1仪器、试药及实验动物
LaballianceSeriesⅢ型HPLC仪器(SeriesⅢ
型泵、Model500UV／Vis检测器和7725i进样阀)；
TU一1800紫外可见分光光度计(北京普析通用仪
器有限公司)；PHS--3S型pH计(上海精密科学仪
器有限公司)；HL一2型恒流蠕动泵(上海青浦沪西
仪器厂)；BP210S电子天平(德国Sartorius)；CQ一
205型超声清洗仪(上海超声波仪器厂)；恒温水浴
锅(上海医疗设备总厂)。汉防己甲素对照品(中国
药品生物制品检定所)；汉防己甲素原料(西安山川
生物技术有限公司，批号050923，标示质量分数为
98．87％)；HPLC所用溶剂均为色谱纯；其余为分析
纯。Wistar大鼠，雄性(200±20)g，四川大学动物
实验中心提供，实验前未用任何药物。
2方法
2．1肠循环液中酚红的测定
2．1．1 酚红标准曲线的制备_]：精密移取用1％
Na。CO。溶液配制的质量浓度分别为5、10、20、30、
40、50、60弘g／mL的酚红标准溶液各0．5mL，置刻
度试管中，加0．2mol／LNaOH溶液5mL。以0．2
mol／LNaOH溶液为空白，在558nm处测定吸光
度(A)值，以A值对酚红质量浓度C(pg／mL)进
行线性回归。
2．1．2酚红质量浓度的测定：从大鼠在体肠循环不
同时间点的样品中，分别移取0．5mL，加入0．2
mol／LNaOH溶液5mL，混匀，12000r／rain离心
5rain，以0．2mol／LNaOH溶液为空白，取上清液
在558nm处测定A值。将4值代入标准曲线，计
算酚红质量浓度。
2．2肠循环液中汉防己甲素测定[53
2．2．1色谱条件：BonChrom18色谱柱(250mm×
4．6mm，5pm)；流动相为乙腈一0．05mol／L磷酸盐
缓冲液(pH2．o)(45：55，每100mL中加入0．10
gSDS)；体积流量：1．0mL／min；柱温：30rC；测定
波长：240nm。
2．2．2对照品贮备液的配制：①对照品贮备液A的
配制：取汉防己甲素对照品约10mg，精密称定，流动
相溶解并稀释至100mL，冰箱放置备用。②对照品
贮备液B的配制：取汉防己甲素供试品适量，精密称
定，乙醇溶解并稀释至50mL，冰箱放置备用。
2．2．3空白循环溶液的配制：分取酚红20mg、氯
化钠7．8g、氯化钾0．35g、氯化钙0．37g、碳酸氢
钠1．37g、磷酸二氢钠0．32g、氯化镁0．02g和葡
萄糖1．4g，置1000mL量瓶中，蒸馏水溶解并稀
释至刻度，摇匀，循环前用1mol／L盐酸溶液调pH
为6．0，即得。
2．2．4方法的可行性考察：分别取空白循环液、汉
防己甲素对照品溶液及供试液，进样，在上述色谱条
万方数据
·226· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2,El
件下测定，由图1可见汉防己甲素对照品溶液的
tR一6．7min，供试液的主峰保留时间与汉防己甲素
对照品溶液一致。空白循环液在此色谱条件下无
干扰。
0 Z．5 5．0 y．b 0 z．0 5(J，．o 0 z．0 0．O ，．0
，／rain
图1 空白循环液(A)、汉防己甲素对照品溶液(B)
和供试液(C)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsofbl nkcirculationsolu—
tion(A)，tetrandrine(B)，andsample(C)
2．2．5系统适应性试验：以汉防己甲素的色谱峰计
算，理论塔板数大于4000，对称因子为1．056。
2．2．6汉防己甲素标准曲线的制备：取汉防己甲素
对照品贮备液A0．05、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0
mL置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，进样20
pL，在上述色谱条件下分离测定，记录色谱图与汉防
己甲素峰面积，以质量浓度C(ug／mL)为横坐标，
汉防己甲素峰面积】，为纵坐标进行线性回归。
2．2．7回收率试验：取低、中、高3种质量浓度的对
照品贮备液B各1mL，置100mL量瓶中，用空白
循环液稀释至刻度，分别得质量浓度为5．354、
10．708、21．416ug／mL的溶液，取0．5mL加1mL
流动相稀释，进样20弘L，在上述色谱条件下分离测
定，记录色谱图与汉防己甲素峰面积，以标准曲线计
算质量浓度，以测定质量浓度与加入质量浓度之比
计算回收率。
2．2．8精密度试验：取2．2．7项下3个质量浓度的
待测溶液。以1d内测定同一样品5次的结果计算
日内精密度，以连续5d测定同一样品的结果计算
日间精密度。
2．2．9肠循环液中汉防己甲素的测定：在不同时间
点取大鼠在体肠循环液样品0．5mL，加入1．0mL
2．2．1项下流动相，混匀，12000r／rain离心5min，
取上清液20pL，在2．2．1项色谱条件下测定，记录
色谱图与汉防己甲素峰面积，代入标准曲线计算汉
防己甲素的质量浓度。
2．3大鼠在体肠吸收实验H“1
2．3．1 供试液的配制：取汉防己甲素原料不同量，
用乙醇配制成供试品储备液，分别取不同质量浓度
的供试品储备液1mL，用pH6．0的含酚红的空白
循环液稀释至100mL，得低、中、高3个质量浓度的
汉防己甲素供试液。
2．3．2汉防己甲素在肠循环液中的稳定性考察：取
高、中、低3个质量浓度的汉防己甲素供试液，置
37℃水浴中孵育，分别于0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5
h取样，按2．2．9项下操作测定汉防己甲素在循环
液中的质量浓度变化。
2．3．3肠吸收实验方法：将实验前禁食12h(自由
饮水)，体重(200±20)g的Wistar大鼠，ip戊巴比
妥钠40mg／kg，麻醉后固定。沿腹中线剪开腹腔
(约2．5cm)，对需要考察的部位，于两端插管后结
扎。用注射器将预热至37℃的生理盐水缓缓注入
肠管，洗去肠管内容物至净，再用空气排净残留液
体，然后装好循环装置。取预热至37℃供试液，以
5mL／min流速循环15rain后，将流速调节为2．5
mL／min，立即自灌注液锥形瓶中取两份(每份0．5
mL)，分别测定零时间药物质量浓度和酚红质量浓
度，另向锥形瓶中补加1mL恒温的空白循环液，其
后在不同时间取样并补加空白循环液，循环时间
2．0h。根据酚红质量浓度计算出供试液的体积，根
据每一时间段药物质量浓度和供试液体积的变化计
算出肠循环液中的剩余药量(X)。
2．3．4药物质量浓度对肠吸收的影响：取汉防己甲
素质量浓度为5．36、10．77、21．82p-g／mL的供试
液，分别进行整肠段灌流实验，考察药物质量浓度对
吸收的影响。整肠段考察自十二指肠上端起到回肠
下端止。
2．3．5大鼠肠道各区段吸收情况的考察：用10．73
／ug／mL的供试液分别在十二指肠、空肠、回肠、结肠
4个肠段回流，考察大鼠各肠段的吸收情况。实验观
察的各肠道区段皆取10cm，各肠道区段的划分如
下：十二指肠段幽门开始，空肠段离幽门15cm处
开始，回肠段自盲肠上行20cm开始，结肠段从盲
肠后端开始。
2．3．6 吸收系数的计算nJ]：以小肠循环液内剩余
药量的对数(1nX)对取样时问(f)作图，得到一条
直线(方程为lnX=lnX。一K。t，X。为零时间肠循环
液中药量)，从直线斜率可求吸收速率常数(K。)。计
算吸收半衰期(￡。／2t1／2—0．693／K。)；单位时间吸
收百分率(P)，P一(c。×Vo—C。×V。)／(c。×Vo—
f)×100％(c。：循环液药物初始质量浓度；V。：循环
液初始体积；C。：t时刻循环液药物质量浓度；Vt：t
时刻循环液体积；t：循环液循环时间)；膜表观渗透
系数(P。。。)，P。，，一K。／3600A(A肠吸收面积)。
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·227·
2．3．7肠段面积的测量：肠回流实验结束后，从肠
两端插管处剪下肠段，冲洗后剖开，摊于坐标纸上，
沿肠段边缘剪下坐标纸，冲洗烘干后称质量(彬，)，
剪取lo格(10cm2)坐标纸称质量(Ⅳ：)，计算肠段
面积A(cm2)，EA一(Ⅳ，／w2)×10l。
3 结果
3．1酚红测定方法的考察结果：酚红的标准曲线为
A一0．0167C+0．0032(，z一7)，r一0．9999。线性
范围5～60弘g／mL。酚红低、中、高(5、20、60Pg／
mL)3个质量浓度在pH6．0的肠循环液中的回收
率分别为100．44％、99．70％、99．97％；日内精密度
RSD(以一5)分别为0．64％、0．30％、0．26％；日间精
密度RSD(咒一5)分别为0．76％、0．56％、0．49％，符
合测定要求。
3．2汉防已甲素测定方法的考察结果：汉防己甲素
测定的标准曲线方程为：Y一35072C一64．473
(行一7)，7J一0．9999。线性范围0．5078～10．156
l*g／mL。质量浓度分别为5．354、10．708、21．416
／-g／mL汉防己甲素按2．2．7项条件下测定的平均
回收率(n一3)分别为98．48％、100．76Yoo、
100．46％，RSD分别为0．39％、0．19％、1．16％；按
2．2．8项方法测得的日内精密度RSD(以一5)分别
为0．63％、0．42％、0．80％，日问精密度RSD(以一
5)分别为1．73oA、0．78％、1．34％。汉防己甲素质
量浓度测定方法回收率和精密度均符合要求。
3．3汉防己甲素在空白肠循环液中稳定性：以测定
各时间点质量浓度与0h时质量浓度的比值作为剩
余百分比，结果见表1。各质量浓度的汉防已甲素于
空白循环液中在2．5h内基本稳定。
表1汉防己甲素在空白肠循环液中的稳定性
Table1 Stabilityoftetrandrineincirculation
solutionofi testine
质量浓度／ 剩余百分比／％ RSD／
％
5．354 99．96 99．34 99．32 98．2l 98．02 0．86
10．708 99．53 98．97 98．7l 98．42 98．07 0．72
21．416 99．63 99．48 99．12 98．50 97．82 0．81
3．4药物质量浓度对肠吸收的影响：考察了肠循环
液中含有不同药物质量浓度时，汉防己甲素在小肠
的K。、t1／2、P、r，结果见表2。
对不同药量时的K。进行方差分析，结果表明，
F显著性。可知在5．36～21．82ttg／mI，内，质量浓度
对汉防己甲素在小肠的吸收速率没有影响。
3．5各肠段药物吸收能力比较：大鼠在体肠回流2
h后，不同肠段K。tl／2、P和P。⋯见表3。
表2不同质量浓度汉防己甲素在大鼠在体小肠的
吸收参数(工±S，n一5)
Table2 Absorptionparametersoftetrandrine
atvariousconcentrationsinsmall
intestineofrat(i±s，n一5)
表3 汉防己甲素在大鼠不同肠段吸收参数(i±s，n一5)
Table3 Absorptionparametersoftetrandrineatvarious
intestinesegmentsinrat(；±s．行一5)
对不同肠段K。进行方差分析，结果表明，各肠
段之间的差异有统计学意义。回肠段与其他肠段比
较K。显著大且有统计学意义(P肠K。差异无显著性，十二指肠和空肠K。差异无显
著性，而十二指肠和结肠比较，K。差异有显著性
(P<0．05)。
对不同肠段P进行方差分析，结果表明，各肠
段间的差异有统计学意义(P<0．01)，P依次为十
二指肠<空肠一结肠<回肠。
对不同肠段P。，。进行方差分析，结果表明，F<
F，~。即表明各肠段的P。。，之间没有显著差异，即汉
防己甲素在各肠段的透膜能力相同。
4讨论
4．1酚红一般不被肠道吸收，所以在肠吸收实验中
用于测定肠对水分的吸收，以计算肠循环液中药物
浓度的变化。汉防己甲素在酚红的最大吸收峰558
nm处无吸收，对酚红的紫外测定无干扰。由于肠循
环中汉防己甲素的量较低，选择吸光度较高的240
nm作为HPLC测定的波长。因直接进样测定循环液
汉防己甲素的量精密度较差(RSD>5．o％)，故用两
倍流动相稀释循环液，使汉防己甲素溶于流动相中，
呈离子状态进行测定，日内、日间精密度符合要求。
4．2汉防己甲素为一种生物碱，不能直接溶于循环
液中，故用乙醇配成储备液，再用pH6．0的空白循
环液稀释100倍。在稳定性预试验中发现，汉防己
甲素在pH>7的循环液中稳定性较差(RSD>
万方数据
·228· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
5．0％)，而一般用于在体肠循环的KR液的pH为
7．4。人体正常生理状况下小肠液的pH为5～7，为
保证试验过程中药物的稳定性并尽量贴近人体小肠
的环境，笔者采用pH值为6．0的KR液作为灌流
液进行试验，汉防己甲素在pH值为6．0的空白循
环液中稳定性较好，可以说明在体肠循环中药物质
量浓度的降低是汉防己甲素被肠道吸收的结果。
4．3药物不同质量浓度对汉防己甲素在大鼠小肠
全肠段的吸收无显著影响，且以肠内剩余药量的对
数lnX对取样时间t作图，所得直线的相关系数均
大于0．9，可以初步确定汉防己甲素在小肠的吸收
呈一级动力学过程，吸收机制为被动扩散。药物的
K。和平均每小时吸收量回肠段大于十二指肠、空肠
和结肠；这是由于回肠的环境pH值大于十二指肠
和空肠，汉防己甲素在回肠的解离度小于十二指肠
和空肠，且回肠的面积最大，故吸收较其他肠段好。
本实验中P。。。定义为单位时间单位面积的表观吸收
速率，各肠段P。，。差异无显著性，且均大于1×
10一，说明汉防己甲素在小肠各段和结肠段均有较
好的吸收[8]，适合制备成缓释制剂。
4．4 由于本实验中空白循环液的pH略小于肠道
环境的pH，而汉防己甲素为一种生物碱，所以测得
的K。偏小，吸收半衰期较人体实际值略大，尽管测
定的结果为表观吸收速率常数，但对制剂的开发仍
有一定的指导意义。
4．5研究中药有效成分口服时的吸收特性，是中药
制剂现代化和提高中药口服给药生物利用度的基
础，可以减少剂型设计的盲目性，为剂型的开发提供
科学依据。本实验证明汉防己甲素在小肠各肠段均
有较好的吸收，适合制备成缓释给药系统。
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药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨150076)
摘要：目的探讨对西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐(91ucosinolates，GS)诱导人胃腺癌SGC一7901细胞凋亡的作
用及其可能机制。方法不同质量浓度GS处理人胃腺癌SGC一7901细胞，通过SRB法、细胞形态学观察、流式细
胞仪和激光共聚焦显微镜实验，观察GS对SGC～7901细胞的抑制率，对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果1、10、
100、1000,ug／mL的Gs作用于SGC一7901细胞72h后，抑制了sGC～7901细胞的增殖，其IC50为187．723pg／
mL；300／lg／mL的GS作用SGC一7901细胞24h后，细胞出现早期凋亡的形态；300、600、1200btg／mL的GS作用
于SGC一7901细胞24h后，可见细胞凋亡率分别为(14．54±6．69)％、(10．11±6．25)％、(34．12±13．29)％，并且
G2期细胞数目减少至0，对细胞周期有影响；100、200、300pg／mL的GS作用于SGC一7901细胞24h后，细胞内的
Ca”浓度升高，且随着GS给药剂量的增加而升高。结论GS能够促进人胃腺癌SGC一7901细胞凋亡，影响细胞周
期，此作用可能是GS升高细胞内Ca2+的浓度而达到的。
收稿日期：2006—06—25
基金项目：国家自然科学基金项目(30300284，30400592)；黑龙江省自然科学基金重点项目(ZJY0304)；哈尔滨市科技攻关项目
(2004AA9CNl64)
作者简介：邹翔(1978)，男，医学硕士，助理研究员，研究方向为抗肿瘤药物研究。
Tel／Fax：(0451)84866922／84866001E—mail：zou8663202@163．corn
万方数据
汉防己甲素大鼠在体肠吸收机制研究
作者： 张颖， 蒋学华， ZHANG Ying， JIANG Xue-hua
作者单位： 张颖,ZHANG Ying(四川大学华西药学院,四川,成都,610041;四川抗菌素工业研究所,四川,成
都,610051)， 蒋学华,JIANG Xue-hua(四川大学华西药学院,四川,成都,610041)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)
被引用次数： 9次

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