全 文 ：·940· 中草焉ChineseTradlUonala dHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
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RP—HPLC法测定草乌中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱
赵英永“2，崔秀明”，张文斌1，苗华3，戴云2
(1．文山三七研究院天然药物研究所，云南文山663000；2．云南民族大学化学与生物技术学院
云南昆明650031；3．南阳师范学院，河南南阳473061)
草乌属毛茛科植物北乌头Aconitumkusnezofi
fiiReichb．的干燥块根，具有祛风除湿、温经止痛的
功能，用于风寒湿痹、心腹冷痛，麻醉止痛等o]。主要
含有中乌头碱、乌头碱、次乌头碱等二萜类生物碱，
它们既是其有效成分，也是其毒性成分。本实验采用
HPLC方法测定3种生物碱，方法简便、快速，结果
准确。
1仪器、药品与试剂
ShimadzuI。c一10A高效液相色谱仪，包括
LC--10ATvp溶剂输送泵，SCL--10Av系统控制
器，sPD10Avp紫外可见检测器，CTO10Avp
柱温箱，DGU12A在线真空脱气机，Class—up工
作站；中船七院二六所超声波清洗机，KL009袖
珍数显笔式酸度计。
中乌头碱、乌头碱、次乌头碱对照品质量分数分
别为98．5％、99．3％、99．2％，由中国科学院昆明植
物研究所提供；乙腈为色谱纯，三重蒸馏水(自制)，
其他试剂为分析纯；草乌药材来源见表1，经中国科
学院昆明植物研究所标本馆李锡文研究员鉴定。
2色谱条件
色谱柱：KormusilC18(250mm×4．6mm，5
pm)；流动相：乙腈一醋酸铵缓冲溶液(pH10，5)
(60：40)；体积流量：1．0mL／min；检测波长；240
nili；柱温?30℃。
3方法与结果
3．1对照品溶液的制备：精密称取对照品用乙腈配制
成中乌头碱0．14mg／mL、乌头碱0．068mg／mL、次
乌头碱0．124mg／mL的混合对照品溶液，冷藏备用。
3．2供试品溶液的制备：精密称取草鸟(块根)粉末
0．4g，置于磨口的三角瓶中，加入10％氨溶液0．4
mL，搅拌均匀，加入10mL乙醚，超声30min后补
加5mL乙醚，加入适量的氧化铝，放置过夜，滤过，
分别用5mL的乙醚洗涤3次滤渣．合并醚液，挥
干，用乙腈洗涤残渣定容为5mL，冷藏备用。
3．3分离效果考察：取上述对照品溶液与供试品溶
液，在上述色谱条件下进行，获得色谱图(图1)表
明：中乌头碱、乌头碱、次乌头碱能达到基线分离，分
离度≥1．5，可见3种生物碱问的分离效果较好，且
无其他成分干扰。K止
o 5””2025珊，n5 10”2025”
sl一中乌头碱S2鸟头碱$3-敬乌头碱
S1mesaconitineS2一aconitineS3hypaconitine
图1对照晶(A)和草乌样品(B)
HPLC色谱田
Fig．1HPLCChromatogramsfreferencesubshnees
(A)andRa ixAconitiKusnezoffii(B)
3．4线性关系的考察：精密吸取对照品溶液分别采用
2、5、10、15、20儿的进样量，按上述色谱条件测定峰
面积；以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样质量为
横坐标，绘制标准曲线，得回归方程分别为：中乌头碱
Y一529275X+56975，r一0．9991；乌头碱Y=859
404X+43376，r=0．9992；次乌头碱Y一68851
x+692 8，r=0．9990。线性范围分别为：0．03～
肇萋品羿：誓饕某：捣5)，男，河南开封人，硕士研究生，主要从事有机化学和天然药物化学的研究工作。
。通讯作者T“崔；(0秀87明6ⅪT88ell5：3(。687E6)8m8a8illt523h7a。￥!霈：isnaan．qcl03m7@vlpsi∞com
万方数据
中草鸯 cMn描eTr削jHon引粕dHer／mlDrugs第37卷第6期2006年6月·941-
0．30、0．0015～O．015、0．025～0．25mg／ml。。
3．5精密度试验：精密吸取样品(4号)溶液各10
pL，重复进样5次，记录峰面积，结果为中乌头碱、乌
头碱、次鸟头碱RSD分别为0．6％、0．6％、1．5％。
3．6重现性试验：取同一供试品(4号)5份，分别按
上述方法进行供试品的制备，测定，记录峰面积，结
果中乌头碱、乌头碱、次乌头碱的RSD分别为
I．4％、I．1％、1．7％。
3．7稳定性试验：取草乌供试品溶液，分别在0、2、
4、8、12、24、36h，按前述测定方法进行测定，记录峰
面积，结果中乌头碱、乌头碱、次乌头碱的RSD分别
为0．7％、1．4％、1．5％。
3．8 回收率试验：取已测量的草乌样品粉末0．2g
5份，精密称定，每份分别加入中乌头碱、乌头碱、次
乌头碱对照品适量，照供试样品溶液的制备项下操
作，进样测定，结果中乌头碱、乌头碱、次乌头碱的回
收率分别为98．9％、97．4％、98．4％，RSD分别为
0．9％、1．2％、1．1％。
3．9最低检测限的确定：将混合对照品稀释到合适
的质量浓度，使峰高约为噪音的3倍，结果中乌头
碱、乌头碱、次乌头碱检测限分别为0．301、0．314、
0．298pg／mL。
3．10系统适应性：按照上述处理样品的方法处理
10个不同产地的样品，在上述色谱条件下分别测
定，结果均以中乌头碱峰计算理论塔板数。结果表明
理论塔板数以中乌头碱峰计算不低于4200。
3．11样品测定：吸取供试品溶液10pL按上述条
件注入液相色谱仪，测定冶§果见表1。
4讨论
4．1 检测波长选择：有的文献报道在230llm检
测[2]，有的文献报道在235nm检测‘33等不同的检测
波长，本实验考察了230～260nm检测波长检测情
况，在230nm的检测波长峰面积很小，通过乌头生
物碱光谱测定吸收峰为236nm，但是波长短，杂质
及其他的成分干扰大，而在240am检测，峰面积最
大，达到基线分离，基线也更稳定，确定检测波长为
240nm。
4．2离子强度的选择；考察了0．01、0．03、0．05、
0．07mol／L醋酸铵配制的流动相，结果0．01、o．03、
0．07mol／I。醋酸铵配成的流动相得到的峰形较宽，
分离度小，0．05mol／L醋酸铵溶液得到的峰型及分
离度较好。
4．3流动相的选择：考察了甲醇一磷酸盐缓冲溶液
(pH6．8)、乙腈0．2％冰醋酸缓冲液及乙腈醋酸铵
哀1样品测定结果抽一3)
Table1 Determinationofsamples(一3)
编号来源崭一，蹦苏⋯蹦0彘一，“
缓冲溶液(pH10．5)(60：40)的条件流动相，在甲醇
与缓冲溶液配比条件下发现随着有机相的比例的增
加3种乌头生物碱峰型变窄、变高，但是保留时间越
来越小与其他的成分混合在一起不能分开。在75：25
的配比3种生物碱能够分开，但是次乌头碱的峰型变
宽。分离效果不是最佳。此外，通过稳定性试验可知3
种生物碱在甲醇中非常不稳定，所以不宜使用甲醇作
为流动相及溶剂。在乙腈一缓冲液(o．2％冰醋酸，用三
乙胺调pH9．4)配比条件下，只有在65：35的配比
3种乌头生物碱峰型较好，但是分离度小，测定样品
时，有时由于受到其他成分的干扰部分样品不能分
开。而在乙腈醋酸铵缓冲溶液(pH10．5)(60：40)
的配比的条件下，峰窄、峰型对称，且中乌头碱与乌头
碱、乌头碱与次乌头碱分离度均大于1．5，能够达到
较好的分离效果。因此，与文献已报道的测定方法”J
相比，具有峰窄、峰型对称、基线稳定、杂质及其他成
分干扰小、分离度大的特点。
4．4采用高效液相色谱法测定草乌生药中乌头碱、
乌头碱、次乌头碱，该方法灵敏、快速、准确，适用草
乌生药中生物碱的检测，可以作为草鸟类药材资源
评价及质量标准的依据。
4．5 由样品的测定结果可知，不同产地的草乌药
材，3种生物碱的量差异较大。这为草乌类药材资源
评价及质量标准研究提供了参考数据。
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番石榴叶的质量标准研究
朱长福1，同利琪1，柯向梅1，王国振2，严玉平1，由会玲1
(t．河北医科大学，河北石家庄050091；2，河北瑞生药业有限公司，河北石家庄050085)
番石榴叶为桃金娘科植物番石榴Psidiumg a-
胛OaL．的干燥叶及带叶嫩茎。收载于《广西中药材
标准》，在布朗语称“麻果”。具有健胃消食、涩肠止
泻、杀虫止痒、收敛止血的作用。番石榴具有很好的
降低血糖作用和抗轮状病毒作用口’⋯。原药材标准仅
有来源及性状鉴别标准，相关报道显微和薄层色谱
鉴别研究一“，本实验研究薄层鉴别方法时发现采用
方法比较好，结果与其不同；并进行槲皮素的测定方
法研究，以便有效控制药材质量。
1仪器与试药
药材购于安国市杏林中药有限公司，经河北省
药品检定所牛小莲主任药师鉴定；KQ一250B型超
声波清洗器，上海昆山，LC—lOATvp高效液相色
谱仪(岛津)；UV一160A型紫外一可见分光光度计
(岛津)；槲皮素(批号100819905，中国药品生物制
品检定所)；甲醇为色谱纯；其余为分析纯。
2薄层色谱鉴别
方法l：依照曾玉兰报道方法操作”J，称取番石
榴叶粉末约1g，加70％乙醇20mI。，再加盐酸1
mI。，回流2h，离取上清液作为供试品溶液；另取槲
皮素对照品，加甲醇制成0．02mg／mL的溶液，作为
对照品溶液。分别吸取上述两种试液各5止，分别
点于同一以羧甲基纤维素为黏合剂的硅胶H薄层
板上，以甲苯氯仿丙酮一甲酸(8：5：7：1)为展开
荆，展开．取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在紫外光
灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品相
应的位置(Rf0．78)上，显相同黄绿色荧光斑点，与
报道基本一致。
方法2：称取番石榴叶粉天约0．3g，加甲醇10
mL，超声处理25min，离取上清液，蒸干，加甲醇1
m1，溶解作为供斌品溶液；另取槲皮素对照品，加甲
醇制成0．02mg／mL的溶液作为对照品溶液。分别
收稿日期：2005一∞一12
吸取上述两种试液各5,uL，分别点于同一以羧甲基
纤维索为黏台剂的硅胶G薄层板上，以甲苯一氯仿
丙酮～甲酸(8：5：7：1)为展开剂，展开9cm，取
出，晾干，喷以氯化铝试液，在紫外光灯(254am)下
检视。供试品色谱中有7个斑点，在与对照品相应的
位置(Rf0．75)上，显相同黄绿色荧光斑点，在Rf0．
17处有一黄色荧光斑点，在Rf0．25处有一蓝色荧
光斑点，在Rf0．42处有一污黄色荧光斑点，在Rf
0．83处有一玫红色荧光斑点，在Rf0．9处有一蓝
色荧光斑点，在Rf0．95处有一亮白色荧光斑点，显
示特征斑点，分离效果较好。见图1。
1～3样品4，5槲发幂
1 3一samples4，5quercetinu
图1番石榴叶TLC图(254rim)
Fig．1TLCChromatogramofFoliumPsidii(254rim)
3药材中槲皮素的测定‘钉
3．1色谱条件与适应性：色谱柱：C，。(5pm，250
mm×4．6mm，IntersilODS3，61。SciencesI )；用
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇0．5％磷酸
溶液(58：42)为流动相；检测波长为370nm。理论
板数按槲皮素峰计算，应不低于3000。
3．2溶液的制备：精密称取槲皮素对照品，加甲醇
制成0．103mg／mL的溶液，作为母液备用；取番石
万方数据
RP-HPLC法测定草乌中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱
作者： 赵英永， 崔秀明， 张文斌， 苗华， 戴云
作者单位： 赵英永(文山三七研究院天然药物研究所,云南,文山,663000;云南民族大学化学与生物技术
学院,云南,昆明,650031)， 崔秀明,张文斌(文山三七研究院天然药物研究所,云南,文山
,663000)， 苗华(南阳师范学院,河南,南阳,473061)， 戴云(云南民族大学化学与生物技术
学院,云南,昆明,650031)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(6)
被引用次数： 6次

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