全 文 ：·1846· 中草蔼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
可观察到的细胞明显减少，这可能和此时已发生
DNA片段化肿瘤细胞已凋亡有关，这需要下一步
实验中来证实。
综上所述，甜菜碱能诱导肝癌细胞HepG。
[Ca2+]；升高，线粒体膜电位降低，可以推测这些机
制在甜菜碱诱导肝癌细胞HepG：凋亡过程中起到
一定的作用。
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玉竹乙醇提取物和分离部位对糖尿病大鼠肾脏的保护作用
师海波，苗艳波，王力平，王威+
(吉林省中医中药研究院，吉林长春130021)
摘 要：目的探讨玉竹乙醇提取物和分离部位对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法单次ip链脲佐菌素(STZ)
60mg／kg建立实验性糖尿病大鼠模型，分别ig给予玉竹乙醇提取物和三氯甲烷、正丁醇分离部位。给药80d后测
定血清肌酐(Cr)、尿素(Ur)、糖化血红蛋白(GHb)、肾皮质蛋白质非酶糖基化终末产物(AGEs)、尿白蛋白
(UAL)排泄率，并观察肾组织病理学改变。结果玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部位降低糖尿病大鼠血中GHb
水平和UAL排泄率，抑制肾皮质AGEs的形成，同时改善肾脏病理改变；正丁醇分离部位降低UAL排泄率。结论
玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部位对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制可能与抑制AGEs形成有关。
关键词：玉竹；糖尿病肾病(DN)；蛋白质非酶糖基化终末产物(AGEs)
中图分类号：R286．72 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)12—1846—04
ProtectionofethanolextractndfractionsfromPolygonatumodoratum
onrenallesionindiabeticrats
SHIHai-bo，MIAOYan-bo，WANGLi—ping，WANGWei
(JilinProvinceA ademyofTraditionalChineseMedicinea dMateriaMedica，Changchun130021，China)
Abstract：ObjectiveToevaluatetheprotectiveeffectsofthethanolextractndfractionsfrom
Polygonatumodoratumonrenallesionindiabeticrats．MethodsAnexperimentaldiabeticratmodelwas
successfullyinducedbyoneipinjectionofstreptozotocin(STZ)atadoseof60mg／kg．Diabeticratswere
igadministratedhe hanolextractorfractionsf r80d．Serum1evelsofcreatinine(Cr)，urea(Ur)，
glycosylationhem globin(GHb)，renaladvanc dglyc tionendproducts(AGEs)，andurinarylbumin
收稿日期：2007—04—20
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30400587)
作者简介：师海波(1964一)，男，吉林省长春市人，副主任药师，主要从事中药药理研究。
Tel：(0431)86816857E—mail：shihaib03901@163．corn
*通讯作者王威Tel：(0431)86816224E—mail：w．w．wangwei@263．net
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1847·
(UAL)excretionrateweredeterminedbybiochemicalethods．Glomerularvolumeandrenalpathological
changesw reobservedbyopticmicroscope．ResultsTreatmentswithethanolextractndchloroform
fractiondecreasedthlevelsofGHbandUALexcretionrate，andi hibitedrenalAGEsformationand
renalpathologicalchangesinSTZ-inducediab ticrats．ConclusionThethanolextractndchloroform
fractionhaveprotectiveeffectsonrenallesionindiabeticrats，whichm g tberelatedoinhibitingAGEs
formation．
Keywords：Polygonatumodoratum(Mm．)Druce；diabeticnephropathy(DN)；advancedglycation
endproducts(AGEs)
糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是常
见的糖尿病慢性微血管并发症之一，其发病机制尚
未完全阐明，主要与肾小球血流动力学改变、多元醇
代谢途径异常、蛋白质非酶糖基化终末产物生成、细
胞因子异常表达和脂代谢紊乱等因素密切相关口]。
玉竹为百合科黄精属植物玉竹Polygonatum
odoratum(MⅢ．)Druce的干燥根茎，具有养阴润
燥、生津止渴之功能，用于肺胃阴伤、燥热咳嗽、咽干
口渴、内热消渴。玉竹乙醇提取物对链脲佐菌素
(STZ)诱导的糖尿病小鼠具有明显的降血糖作
用[2]，但未见有玉竹对糖尿病大鼠肾脏作用的研究
报道。本实验观察玉竹乙醇提取物和分离部位对
STZ诱导糖尿病大鼠肾脏的保护作用，并探讨可能
的作用机制和有效部位，为临床应用和深入研究有
效成分提供理论依据。
1实验材料
1．1 药物：玉竹药材购于吉林省宏检医药物资经销
公司，经长春中医药大学李文亭教授鉴定为百合科
黄精属植物玉竹P．odoratum(Mill．)Druce的干
燥根茎。玉竹药材加10倍量乙醇回流提取2次，每
次2h，滤过，提取液减压回收得乙醇提取物(含生
药5．67g／g)。取乙醇提取物，加水使溶解，依次用
三氯甲烷、正丁醇振摇提取，提取液减压回收，得三
氯甲烷分离部位(含生药178．03g／g)、正丁醇分离
部位(含生药74．66g／g)，分别用蒸馏水配成混悬
液，于4℃保存，备用。
1．2动物：Wistar大鼠，体重190--210g，雌雄兼
用，长春高新医学动物实验研究中心提供，合格证
号：SCXK一(吉)2003—0004。
1．3试剂：STZ，日本和光纯药工业株式会社产品；
胃蛋白酶、蛋白酶K，Genview公司产品；1V型胶原
酶，北京鼎国生物技术有限公司产品；肌酐(Cr)，尿
素(Ur)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司
产品；糖化血红蛋白(GHb)试剂盒，南京建成生物
工程研究所产品；尿白蛋白(UAL)放免分析试剂
盒，北京福瑞生物工程公司产品。
1．4仪器：GF—D800型半自动生化分析仪，山东
高密彩虹分析仪器有限公司；752型紫外分光光度
计，上海第三分析仪器厂；RF一640型荧光分光光
度计，日本岛津公司；F1—2008P型自动7免疫记数
仪，国营西安二六二厂；BI一2000图像分析系统，成
都泰盟科技有限公司。
2实验方法
2．1大鼠糖尿病模型的制备[3]：STZ临用前用0．1
mol／L枸橼酸缓冲液(pH4．5)配成6mg／mL。
Wistar大鼠禁食12h后，单次ipSTZ60mg／kg，5
d后取尾血测空腹血糖，空腹血糖≥16．7mmol／L
的动物作为高血糖模型大鼠，正常对照组单次ip同
体积0．1mol／L枸橼酸缓冲液。
2．2分组与给药：将高血糖模型大鼠随机分为模型
对照组(8只)，玉竹乙醇提取物高剂量(2g／kg)组
(8只)，玉竹乙醇提取物低剂量(1g／kg)组(9
只)，玉竹三氯甲烷分离部位高剂量(64mg／kg)组
(9只)，玉竹三氯甲烷分离部位低剂量(32mg／kg)
组(9只)，玉竹正丁醇分离部位高剂量(152mg／
kg)组(9只)，玉竹正丁醇分离部位低剂量(76
mg／kg)组(9只)。各组大鼠每天ig给药1次，连
续80d，正常对照组和模型组给予同体积(10mL／
kg)蒸馏水。
2．3检测指标：大鼠末次给药后以代谢笼收集24
h尿样，放免法检测UAL量，计算24hUAL排泄
总量。大鼠收集尿液后3％水合氯醛麻醉，腹主动
脉采血，测全血GHb(结果以每10克血红蛋白中
糖化血红蛋白的吸光度值表示)、血清Cr及Ur的
量。肾皮质蛋白质非酶糖基化终末产物(AGEs)检
测参考Soulis—liparota方法H]：取适量肾皮质，以冷
的磷酸盐缓冲液(pH7．4)制成匀浆；离心，沉淀加
入氯仿一甲醇(2：1)5mL，4℃轻轻搅拌，放置过
夜，去除脂质；用2mL甲醇和0，5mL蒸馏水水
化，自然沉淀，离心，弃上清液；沉淀悬浮于含1mg／
mL胃蛋白酶的0．5mol／L冰醋酸溶液中，4℃孵
育18h，去除非胶原蛋白；离心，弃上清液，沉淀加
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
入2mL含IV型胶原酶0．1mg／mL和蛋白酶K
0．1mg／mL的0．02mol／LTris—HCl缓冲液(pH
7．5)，37℃轻轻振荡消化60h；离心，取上清液用
RF一640型荧光分光光度计在370nm／440rim处
测定荧光强度，其值以空白胶原酶校正。消化液中羟
脯氨酸的量以碱水解法试剂盒测定，AGEs的量以
每1mg羟脯氨酸所含荧光强度为一个任意单位，
用AFU／mg表示。取部分肾组织，10％中性甲醛固
定，常规制备石蜡切片，脱水，HE染色，光镜观察组
织病理学变化；采用BI一2000图像分析系统，用点
计数法测量肾小球截面积[A]，每个肾脏至少测量
30个肾小球，按V=口／k×M]3心计算肾小球平均体
积(y)，式中p=1．38，k一1．10L5j。
2。4统计学处理：数据以z±s表示，组间比较采用
t检验。
3实验结果
3．1对糖尿病大鼠GHb和肾皮质AGEs形成的
影响：与正常对照组比较，模型对照组大鼠GHb和
肾皮质AGEs的量明显升高；与模型对照组比较，
玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部位明显抑制糖尿
病大鼠肾皮质AGEs形成，三氯甲烷分离部位降低
糖尿病大鼠GHb的量，正丁醇分离部位对糖尿病
大鼠GHb和肾皮质AGEs无影响，结果见表1。
表1玉竹乙醇提取物及分离部位对糖尿病大鼠GHb
和肾皮质AGEs的影响(童±川
Table1 EffectofethanolextractndfractionsofP．
odoratumonlevelsofGHbandrenalAGEs
indiabeticrats(；±s)
___-。_●_____________--●-_____________-●●--__-。_-。________●●●_____________●___________●。_-。一●________-____----●____________一
组弼 剂量／(mg·kg一1)动物／只GHb(每109Hb^值)AGEs／(AFu·mg一1)
与模型对照组比较：‘P。P3．2对糖尿病大鼠肾功能的影响：与正常对照组比
较，模型对照组大鼠血清Cr、Ur、UAL的量明显增
高；与模型对照组比较，玉竹乙醇提取物和三氯甲烷
分离部位降低糖尿病大鼠血清Cr、Ur、UAL的量，
玉竹正丁醇分离部位降低糖尿病大鼠UAL的量，而
对糖尿病大鼠血清Cr、Ur的量无影响，结果见表2。
表2玉竹乙醇提取物及分离部位对糖尿病大鼠肾功能和肾小球体积的影响(i土s)
TaMe2 EffectofethanolextractndfractionsofP。odoratumonnephriflefunction
andglomerularvolumeindiabeticratsQ士s)
与模型对照组比较；+P’P3．3对糖尿病大鼠肾小球体积的影响：与正常对照
组比较，模型对照组大鼠肾小球体积明显增大；与模
型对照组比较，玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部
位对糖尿病大鼠肾小球体积均有明显的降低作用，
玉竹正丁醇分离部位对糖尿病大鼠肾小球体积降低
作用不明显，结果见表2。
3．4肾脏形态学检查：光镜下观察，正常对照组大
鼠肾小球和肾小管间质未见明显的病理改变，为正
常肾脏结构；模型对照组大鼠可见肾小球肥大，肾小
球系膜细胞增生，伴有问质散在的灶性炎症分布，周
围小管扩张，管壁增厚，管腔狭窄，近端肾小球上皮
细胞呈现大量空泡变性；玉竹乙醇提取物和三氯甲
烷分离部位对糖尿病大鼠上述病变明显改善作用，
三氯甲烷分离部位作用明显强于乙醇提取物，正丁
醇分离部位作用不明显。
4讨论
DN是糖尿病最常见的并发症之一，也是糖尿
病患者死亡的主要原因，目前临床上I型糖尿病患
者DN的发病率为20％～40％，Ⅱ型糖尿病患者
DN的发病率为10％～20％，其中1／3患者进一步
发展为晚期DN和终末期肾功能衰竭。因此早期诊
断、治疗和延缓糖尿病肾病是当前医药学界研究的
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1849·
热点问题。
本研究采用单次ipST2建立实验性糖尿病大
鼠模型，造模后大鼠UAL排泄率明显增高，肾小球
体积明显增大，肾脏病理改变明显，肾小球肥大，肾
小殊基底膜增厚，系膜区增宽，系膜基质增生，肾小
管上皮细胞肥大，空泡变性，管腔变窄，具有典型的
DN表现[6]。给予玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离
部位治疗后UAL排泄率降低，病理改变程度明显
减轻，肾小球肥大、基底膜增厚，系膜区增宽，系膜基
质增生等一系列病变均有不同程度改善，表明其对
糖尿病大鼠肾脏具有保护作用。
已有大量证据表明，持续高血糖引起机体多种
蛋白质非酶糖基化和由此形成的AGEs在DN的
发病机制中起着重要作用。DN时生成的大量
AGEs使得胶原合成增加、降解减慢，最终导致肾小
球基底膜增厚和系膜基质增加，破坏肾脏正常滤过
屏障和细胞外基质的结构。AGEs可与肾脏的血管
内皮细胞、系膜细胞、肾小管上皮细胞上AGEs受
体结合，产生和分泌大量的细胞因子、生长因子，氧
化反应增强产生大量的自由基，加速DN的发生和
发展。GHb是血红蛋白A组分某些特殊分子部位，
是与葡萄糖结合后经过缓慢而不可逆的非酶糖基化
反应形成的。玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部位
降低糖尿病大鼠血中GHb水平，抑制肾皮质AGEs
形成，提示对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制可能与
抑制AGEs形成有关，三氯甲烷分离部位为保护作
用的有效部位，此推测有待进一步证实，同时三氯甲
烷分离部位的有效成分有待进一步研究。
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火棘果实提取物对拘束应激负荷引起小鼠肝损伤的保护作用
续洁琨1’3，姚新生1’，郑洁静2，戴毅1，栗原博扣
(1．沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳110016；2．暨南大学药学院，广东广州510632；
3．北京中医药大学基础医学院，北京100029)
摘要：目的研究火棘果实提取物对拘束应激负荷下活性氧引起小鼠肝损伤的保护作用。方法采用拘束负荷
方法造成小鼠应激性肝损伤模型。赖氏法测定小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性，TBARS法测定血浆及
肝组织匀浆中的丙二醛(MDA)水平，ORAC法测定血浆抗氧化能力指数，HPLC法测定血浆及肝组织匀浆中维
生素C(VC)水平，以及ORAC方法测定火棘果实提取物和芦丁、金丝桃苷的体外抗氧化活性。结果与拘束模型
组相比。火棘果实提取物可以有效降低应激负荷小鼠血浆ALT活力和血浆、肝组织匀浆中MDA水平，并显著提
高血浆和肝组织匀浆的抗氧化能力指数和VC水平。火棘果实提取物及其活性成分芦丁和金丝褴苷俸外显示出较
强的抗氧化能力。结论火棘果实提取物对拘束应激负荷下活性氧引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用，其作
用机制可能来自于清除自由基和抑制脂质过氧化过程。
关键词：火棘；拘束应激；活性氧自由基；肝损伤
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)12～1849一05
收稿日期：2007—03—04
作者简介：续洁琨(1979一)．女，河北人，博士，主要从事天然产物化学成分及药理活性的研究，现工作于北京中医药大学基础医学院。
Tel：(010)64286990E—mail：jiekun一625@yahoo．com．cn
*通讯作者姚新生栗原博Tel：(020)33033306Fax：(020)85567849E—mail：HiroshiKurihara@】63．tom
万方数据
玉竹乙醇提取物和分离部位对糖尿病大鼠肾脏的保护作用
作者： 师海波， 苗艳波， 王力平， 王威， SHI Hai-bo， MIAO Yan-bo， WANG Li-ping，
WANG Wei
作者单位： 吉林省中医中药研究院,吉林,长春,130021
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(12)
被引用次数： 2次

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