全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1569·
表2 PCR引物对
Table2 PairofPCRprimer
名称／引物 序 列 配对引物
梅花鹿／EP一15GTTATGTAAACAAAACTATTCGCCAGAGTACTACCGGC3’H1478
-S鹿／EP．25『GTTATGTAAACAAGACTGTTCGCCM；AGTACTACCGGC3’H1478
1一水鹿2一梅花屣3一马厩4一自唇鹿5一爪哇屁
6一坡鹿ck一空白模板M—DNA标记
1-C．unmoor2．C．nippon3=C．elaphs4-C．albirostris
5-C．timorensis6-C．e／dfck—controlM—DNAmarker
图5特异PCR扩增
Fig．5SpecificityofprimersPCRamplification
值相差越小越好，否则其他影响特异性的条件都可
能掩盖PCR的特异性。
3讨论
由于动物鹿源药材因器官、加工等原因，给常规
鉴定带来了很大困难，单从12SrRNA基因序列的
来源研究不同鹿种具有很好的稳定性。在本研究中
有6个鹿种进行了2样本的重复测序，其结果表现
出高度的一致性，证明了在种的水平上该区段进化
是保守的，属间序列差异明显大于种间差异。
动物药材的基因鉴定很好地克服了不同器官以
及样品保存时间等给鉴定带来的复杂性，但仅从序
列鉴定仍然较难推广，高度特异性引物极大地简化
了鉴定程序。在本研究中，所用的试验材料有鹿血和
存放时间数年的鹿茸，在基因片段的调用上取得了
同样的效果。特异引物的设计在技术上除了遵循引
物设计的基本原则外，序列之间的差异大小直接影
响特异性扩增的效果，马鹿和梅花鹿在所分析的片
段上仅有2个碱基的差异，但所设计的引物对(-B
鹿：PE一1，H1478；梅花鹿：PN一1，H1478)都特异地扩
增出长度约400bp的12SrRNA基因片段，这与根
据测序结果设计的序列长度一致。
在本研究中，马鹿和梅花鹿特异性扩增引物对中
都用了共同引物H1478。事实上，如果将下游引物设
计的其他碱基变异较大的区域将会取得更好的鉴别
效果。此外，引物质量直接影响特异性扩增的效果，引
物设计时遵循引物设计的一般技术指标外，要尽可能
地选择差异较大的区域，如果遇到差异数仅1～2个，
且间隔距离又较远时，要尽可能地差异碱基放在引物
的37端，同时引物的Tm值越匹配越好。
References：
[1]LiuZQ，WangYQ，ZhouKY，ela1．Studyonhighlyspe—
cificdiagnosticPCRofthetraditionalchinesemedicinefor—
toiseplastronanditsoriginalanimals[J]．ActaPharmSin
(药学学报)，1999，34(12)：94l一945．
[2]Wangj J，ZhangGJ，BaiGB．Studyonendonue[easecut—
tingof 1 8SrRNAgenein fiveanimaldrugsincluding
Scolopendra口]．ChinaJChinM terMed(中国中药杂志)，
2002。37(8)：582—584．
近红外光谱鉴别冬虫夏草道地药材
王钢力1，石 岩1，魏玉海2，王慧春2，徐晓杰3，林瑞超1
(1．中国药品生物制品检定所，北京100050；2．青海省药品检验所，青海西宁810000；
3．热电(上海)科技仪器有限公司，北京100032)
摘 要：目的研究冬虫夏草药材的道地性。方法收集不同产地的冬虫夏草药材样品102批，采用漫反射法，测
定药材粉末及药渣的近红外光谱，采用透射法测定药材甲醇提取物的近红外光谱。采用TQ定量分析软件，对样品
的青海和西藏产地进行判别分析。结果药材粉末的判断准确率达到i00％，药材的甲醇提取物光谱较药渣更能显
示药材的产地差别。结论在扩大建模样本的前提下，近红外光谱分析可以用于冬虫夏草药材的产地鉴别。
关键词：近红外光谱；冬虫夏草；地道药材；鉴别
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)10—1569一03
ApplicationofNIRanalysisin dentificationofgenuineCordyceps
WANGGang—lil，SHIYanl，WEIYu—hai2，WANGHui—chun2，XUXiao—jie3，LINRui—cha01
(1．NationalInstituteforControlofBiologicalandPharmaceuticalProducts，Beijing100050，China；2．Qinghai
收稿日期：2006—01—05
基金项目：青海省重大科技项目(2004一N一103一01)
万方数据
·1570· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
ProvincialInstituteforDrugControl，Xining810000，China；3．ThermalElect on(Shanghai)
TechnologiesandInstrumentsCo．，Ltd．，Beijing100032，China)
Keywords：nearinf ared(NIR)；Cordyceps；genuineChine emedici almaterials；identification
冬虫夏草Cordyceps是我国名贵中药材之一，
与人参、鹿茸并称为补品“三宝”，具有良好的医疗保
健作用，几百年来被医务工作者誉为补虚圣药，深受
群众青睐，在历版中国药典均有收载。冬虫夏草是真
菌的一种，系麦角菌科冬虫夏草菌(中华虫草菌)
Cordycepssinensis(Berk．)Sacc．寄生于鳞翅目昆
虫虫草蝙蝠Hepialusarmoricanus0berthur幼虫上
的子座及幼虫尸体的复合体。
冬虫夏草为传统名贵药材，大都集中分布在海拔
3000～4600m的高山草甸区中，主要产于我国西
部地区，如青海省，其果洛州、’玉树州生长的虫草历来
被视作虫草中的上品，此外在四川、云南、西藏等地也
有分布。近红外光谱分析系通过测定被测物质在近红
外谱区(波长在780～2500nm)的特征光谱并利用
适宜的化学计量学方法提取相关信息后，对被测物质
进行定性、定量分析的一种分析技术。近红外光谱主
要由C—H、N—H、0一H和S—H等基团基频振动的倍频
和合频组成，由于其吸光强度远低于中红外光谱的基
频振动，而且吸收峰重叠严重，因此难以采用常规的
红外光谱分析方法对被测物质进行定性、定量分析，
而必须采用对测得的近红外光谱数据经验证的数学
方法处理后，才能对被测物质进行定性、定量分析。笔
者对冬虫夏草的近红外图谱进行研究，旨在阐明青海
省产冬虫夏草与其他产区冬虫夏草药材的差异，控制
药材质量，保护道地药材的资源。
1 虫草药材粉末样品测定
1．1 试验部分：仪器：ThermoElectronNicolet
Antaris近红外光谱仪；样品：收集来自青海、西藏、
四川I等不同产地样品共102批。经中国药品生物制
品检定所中药标本馆张继鉴定，所有样品标本均保
存于中国药品生物制品检定所中药标本馆。
样品处理：将采集的虫草样品经粉碎研磨后过
65目筛，备用。
光谱采集：将处理好的样品置于石英瓶中，采用
漫反射光谱测定，扫描次数：32；分辨率：4cm～。冬
虫夏草药材粉末近红外光谱图见图1。
1．2数据处理：采用TQ定量分析软件，对冬虫夏
草药材粉末样品的青海和西藏产地进行判别分析，
运用多元散射校正(MSC)和一阶导数处理，结果见
图2(口青海样品，△西藏样品)。
10000 9 0008 0007 0006 0005 000
波数／cm一1
图1 102批冬虫夏草药材粉末近红外光谱图
Fig．1NIRSpectraof102batchesofCordycepspowder
图2青海和西藏产地药材样品判别分析图
Fig·2Discriminatingan lysisofsamples
fromQinghaiandTibethabitats
可以看出，近红外光谱分析可以较好地区分青
海和西藏两种产地的样品，对20个未知样品的预测
准确率达100％。从主成分谱图中亦可以看出较为
明显的差异。
同时尝试将青海产地样品与其他产地样品进行
判别分析，亦取得较为满意的结果，见图3(口青海
样品，△其他样品)。
二 一：；：苗。
】。 ^v口l№
l⋯⋯穰_晤学·“盏；带k．一l
；
图3青海产地样品与其他产地药材样品判别分析图
Fig·3Discriminatinganalysisofsamples‘
fromQinghaiandotherhabitats
2虫草药材甲醇提取液近红外分析
2．1 样品的制备：称取0．45g药材粉末，加50mL
甲醇超声提取，滤过，取滤液蒸干甲醇，残渣用2mL
二甲亚砜溶解。
2．2溶解溶剂的选择：由于甲醇提取液浓缩以后，
用二甲基亚砜作溶剂，溶解性能良好，可以代表提取
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1571·
物的特点，故选用二甲亚砜溶解。
2．3 近红外光谱测定：将样品置于1mm液体池
中，采用透射法采集光谱。扫描次数：32；分辨率：4
cm～。药材提取液光谱图见图4。
2一数据处理：同样采用TQ软件对102批药材提
取物的近红外光谱图进行判别分析，结果见图5。可
以看出，甲醇提取液亦可以较好地将不同产地样品
区分开来。
lO0009 0008 0007 000 6 0005 000
波数／cm-1
图4冬虫夏草甲醇提取物近红外光谱图
Fig．4NIRSpectrumofmethanolextractofCordyceps
图5青海产地样品与其他产地药材样品
判别分析图(提取物)
Fig·5Discriminatingan lysisofsamplesfrom
Qinghaiandotherhabitats(extract)
3提取后药渣近红外分析
3．1样品处理：将提取后药渣挥干溶剂后进行近红
外光谱测定。
3．2光谱采集：将处理好的样品置于石英瓶中，采
用漫反射光谱测定，扫描次数：32；分辨率：4cm～。
冬虫夏草样品药渣近红外光谱图见图6。
3．3数据处理：同样采用TQ软件进行判别分析，
结果见图7。可以看出，药渣结果稍差，可能原因是
经过提取后样品所含的化学成分发生变化；改变了
原有样品组成，光谱特征性降低，从而使不同产地样
品重叠较多。
4讨论 一
研究结果可以看出，各批次虫草甲醇提取液差
10000 9 0008 0007 0006 0005 000
波数／cm-1
图6冬虫夏草样品药渣近红外光谱图
Fig．6NIRSpectrumofCordycepsmarc
图7青海产地样品与其他产地药材样品
判别分析图(药渣)
Fig．7Discriminatingan lysisofsamplesfrom
Qinghaiandotherhabitats(marc)
别明显，而甲醇提取后的药渣差别则不如提取
物明显。因此推测被测的102批冬虫夏草甲醇提取
物的近红外光谱图可以较好地显示出青海产药材与
其他产地药材的差异，判断准确率可以达到95％以
上。故认定药材的甲醇提取物所体现的化合物组成
的信息可以作为确定药材产地的依据之一。
HPLC是常用的色谱分析方法之一，被广泛用
于天然药物产品的定性定量分析。但由于HPLC仪
对测试样品的要求(有一定极性、能溶于强极性溶剂
且澄明度好等)，导致其可检测的物质的量在药材所
含的化合物组成中非常有限。笔者尝试过测定冬虫
夏草药材的HPLC指纹图谱，但由于该法主要是针
对药材中所含的核苷类成分建立的，由于这类成分
冬虫夏草药材中分布的普遍性，因而分析结果难以
显示药材的地域性差别。
采用近红外光谱分析可以较好地用于冬虫夏草
青海和西藏的产地鉴别，通过进一步加大样本的采
集量，扩充模型，有望使其成功地用于中药道地药材
鉴别，为中药生产过程的质量控制和中药现代化奠
定良好的基础。
万方数据
近红外光谱鉴别冬虫夏草道地药材
作者： 王钢力， 石岩， 魏玉海， 王慧春， 徐晓杰， 林瑞超， WANG Gang-li， SHI Yan，
WEI Yu-hai， WANG Hui-chun， XU Xiao-jie， LIN Rui-chao
作者单位： 王钢力,石岩,林瑞超,WANG Gang-li,SHI Yan,LIN Rui-chao(中国药品生物制品检定所,北京
,100050)， 魏玉海,王慧春,WEI Yu-hai,WANG Hui-chun(青海省药品检验所,青海,西宁
,810000)， 徐晓杰,XU Xiao-jie(热电(上海)科技仪器有限公司,北京,100032)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(10)
被引用次数： 16次

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1.周云.臧恒昌 近红外分析技术在中药鉴定及含量测定方面的研究进展[期刊论文]-食品与药品 2009(1)
2.张晓瑜.王庭欣.谢飞.夏立娅.李小亭 近红外光谱技术鉴别地理标志产品黄骅冬枣[期刊论文]-食品工业科技
2010(11)
3.吕琳昂.师涛.杨辉华.梁琼麟.王义明.罗国安 NIR在线检测监控安神补脑液水提过程的研究[期刊论文]-中草药
2009(2)
4.赵珺.宋治荣.王兰霞 近红外光谱技术在中药质控中的应用[期刊论文]-中国医药导刊 2009(4)
5.元英群.丁爽.刘红 冬虫夏草鉴别方法的研究进展[期刊论文]-现代药物与临床 2012(6)
6.李琴.郑雷玉.袁红梅 近红外光谱技术在鉴别食品真伪和产地属性的应用研究进展[期刊论文]-硅谷 2011(12)
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