全 文 ：·284· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
RP—HPLC法测定吴茱萸中金丝桃苷和异鼠李素一3—0一半乳糖苷的含量
潘浪胜，吕秀阳+，许海丹，吴平东
(浙江大学材料与化工学院制药工程研究所，浙江杭州 310027)
吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodiarutae—
carpa(Juss．)Benth．的干燥将近成熟果实。属温里
祛寒类中药。有温中散寒、疏肝止痛之功效，常用于
治疗脘腹冷痛、呕吐腹泻、头痛、胃痛、疝痛、腹痛和
痛经等口]。《本草纲目》称吴茱萸“开郁化滞，治吞酸、
厥阴、痰涎头痛、阴毒腹痛、疝气血痢和喉舌口疮。”
近代医学亦证明吴茱萸有镇痛、安神、抗菌、降压和
抗缺氧等药理作用瞳]。曾报道了吴茱萸中金丝桃苷
和异鼠李素一3—0一半乳糖苷的分离和鉴定[3]。现代药
理研究认为，金丝桃苷具有镇痛、解痉等作用[4]，与
吴茱萸的镇痛药理作用一致。本研究采用RP—
HPLC法建立了吴茱萸中金丝桃苷和异鼠李素一3一
O一半乳糖苷含量的同时测定方法，对更好地开发吴
茱萸药用植物资源具有一定意义。
1仪器与试药
Agilentll00型高效液相色谱仪(配四元梯度
泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、UV检测器)，
R一201旋转蒸发器(上海申生科技有限公司)，柱
色谱聚酰胺(100～200目，浙江省台州市路桥四青
生化材料厂)。
实验所用吴茱萸药材产于湖南浏阳，由中国中
医研究院中药研究所何希荣主管中药师鉴定。
HPLC分析用甲醇为色谱纯(德国Merck公司)，
水为超纯水，其他试剂均为分析纯。金丝桃苷和异鼠
李素一3—0一半乳糖苷对照品由本研究所自制，用高效
液相色谱面积归一法测定其纯度分别为99．6％和
98．O％。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18柱(250
mmx4。6mm，5pm)；流动相为甲醇一0．5％磷酸
(50：50)；体积流量为1．0mL／min；检测波长为
360am；柱温为30℃；进样量为10肛L。
2．2对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的金
丝桃苷和异鼠李素一3一。一半乳糖苷对照品适量，加甲
醇分别配成含金丝桃苷0．096mg／mL、异鼠李素一
3一 一半乳糖苷0．298mg／mL的溶液。
2．3供试品溶液的制备：精密称取过40目筛的吴
茱萸干燥粉末约5．2g，置于索氏提取器中，加200
mL甲醇回流提取6h，减压浓缩至干，加水溶解，过
聚酰胺柱，依次用水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙
醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱，洗脱剂的更换根据
洗脱液的颜色，当颜色变为较淡时更换为下一种溶
剂。分瓶收集，收集液进行HPLC检测，合并含金丝
桃苷和异鼠李素一3一O一半乳糖苷组分，减压浓缩后用
甲醇定容至50mL，摇匀，过0．45pm滤膜，即得。
其色谱图见图1。
二L二上二虬
0 5 10 15 0 5 10 15 0 5 10 15
时间，／min
1一金丝桃苷z一异鼠李素一3一O一半乳糖苷
1-hyperin2-isorhamnetin-3-O-galactoside
图1对照品(A，B)及样品(c)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCchromatogramsfreferencesubstances
(A，B)andsample(C)
2．4标准曲线及线性范围：将配制的两种对照品溶
液分别依次进样2、5、10、15、20肛L，按上述色谱条
件进行分析，以进样量(弘g)为横坐标(x)，以峰面
积为纵坐标(y)线性回归，金丝桃苷和异鼠李素一3—
0一半乳糖苷的回归方程分别为：Y=2203．21X一
0．56，r=0．9999；Y=1613．41X一17．32，r=
0．999。表明当金丝桃苷、异鼠李素一3一O一半乳糖苷
的进样量分别在0．192～1．92pg，0．596～5．96pg
与峰面积线形关系良好。
2．5精密度试验：精密吸取两种对照品溶液各10
弘L，在上述选定的色谱条件下，连续进样6次，测
定，计算得金丝桃苷和异鼠李素一3—0一半乳糖苷峰面
积的RSD分别为1．42％和1．6l％(咒=6)。
收稿日期：2004—04—12
基金项目：国家重点基础研究发展规划(973)资助项目(G1999055405)；高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20010335029)
作者简介：潘浪胜(1972一)，男，江西丰城人，浙江大学博士生，研究方向为天然药物的提取、分离、结构鉴定和含量测定。
*通讯作者Tel：(0571)87952683E-mail：luxiuyang@cmsce．zju．edu．an
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·285·
2．6稳定性试验：精密吸取两种对照品溶液，每隔
2h进样10肛L，连续测定12h，结果表明在12h内
峰面积值基本稳定。金丝桃苷和异鼠李素一3—0一半乳
糖苷峰面积的RSD分别为1．75％和1．83％。
2．7 重现性试验：精密称取同一批吴茱萸样品3
份，按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，测定
峰面积，计算得金丝桃苷和异鼠李素一3—0一半乳糖苷
峰面积的RSD分别为2．21％和1．63％。
2．8 回收率试验：精密称取已知含量的吴茱萸样品
3份，分别加入金丝桃苷和异鼠李素一3—0一半乳糖苷
对照品溶液各20mL，按上述供试品溶液的制备方
法和测定条件，计算回收率。结果金丝桃苷平均回收
率为96．7％，RSD一2．04％(咒一3)；异鼠李素一3—0一
半乳糖苷平均回收率为97．1％，RSD=1．59％
(咒=3)。
2．9样品的测定：按上述供试品溶液的制备方法和
测定条件，测定了3批样品中金丝桃苷和异鼠李素一
3一。一半乳糖苷，结果见表1。
表1吴茱萸中金丝桃苷和异鼠李素-
3一D一半乳糖苷的测定(厅一3)
Table1 Determinationofhyperinandisorhamnetin-
3—0一galactosideinE．rutaecarpa(n一3)
批号
金丝桃苷 异鼠李素一3一O-半乳糖苷
质量分数／(nag-g-1)RSD／g质量分数／(nag·g-1)RSD／g
3讨论
3．1 供试品溶液制备方法的选择：吴茱萸中金丝桃
苷、异鼠李素一3一O一半乳糖苷含量较低，溶剂提取金
丝桃苷的同时，也提取出大量的其他成分，无法直接
进样进行色谱测定，必须对提取物进行净化处理。经
试验，确定用聚酰胺柱色谱进行净化，收集洗脱部
分，进行高效液相色谱测定。在该净化条件下，去除
大量杂质，金丝桃苷和异鼠李素一3一O一半乳糖苷洗脱
完全，并能使其基线分离，无杂质峰干扰。
3．2流动相的选择：实验比较了甲醇一水、乙腈一水、
甲醇一磷酸一水、乙腈一磷酸一水不同比例洗脱系统，结
果发现甲醇一0．5％磷酸(50：50)水溶液的效果最
好。流动相中加入磷酸，可抑制黄酮苷酚羟基的电
离，改善分离效果，防止拖尾，使峰形尖锐、对称。
3．3检测波长的选择：金丝桃苷、异鼠李素一3—0一半
乳糖苷对照品经紫外扫描，在360nm处均有较大
吸收，因此将检测波长确定为360nm。
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·新书简介·
《中药成分代谢分析》
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万方数据
RP-HPLC法测定吴茱萸中金丝桃苷和异鼠李素-3-O-半乳糖苷
的含量
作者： 潘浪胜， 吕秀阳， 许海丹， 吴平东
作者单位： 浙江大学材料与化工学院制药工程研究所,浙江,杭州,310027
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(2)
被引用次数： 5次

参考文献(4条)
1.Editorial Office of National Chinese Herbal Medicine Collection 全国中草药汇编 1975
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3.Pan L S;Lu X Y;Wu P D;中草药 Isolation and identification of two flavonoids from Evodia rutaecarpa
Juss. Benth[期刊论文]-中草药 2004(03)
4.Zhou Z D;Tian J;Yang S Y;安徽医学 Antispasmodic action of hyperin 1990(01)

引证文献(5条)
1.曾金祥.朱继孝.黄碧涛.王劭华.杨雅琴.王晓云 吴茱萸中7种活性成分的含量测定[期刊论文]-安徽农业科学
2011(26)
2.曾金祥.刘勇.黄碧涛.杨雅琴.朱继孝.张忠立.罗光明.熊红红 吴茱萸HPLC指纹图谱的建立及3种成分含量的测定
[期刊论文]-安徽农业科学 2011(14)
3.宋亚芳.张启伟.龚慕辛.王智民 吴茱萸化学成分分析方法研究概述[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2009(4)
4.李敏芳.李慧.王学美 金丝桃苷药理作用研究进展[期刊论文]-中国中医药信息杂志 2008(4)
5.王燕.王先荣.马凤余.周亚球 金丝桃苷在植物中的分布及其含量测定[期刊论文]-安徽医药 2009(11)


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