全 文 ：·704· 中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
HPLC法测定注射用红花黄色素中羟基红花黄色素A
陆仙芸，林德君，徐升亮
(浙江永宁制药厂。浙江台州 318020)
红花提取物及其制剂中的羟基红花黄色素A
的高效液相色谱法分析已有不少报道，流动相的选
择也各不相同，如采用甲醇一0．2％醋酸水溶液作为
流动相，由于低pH值可使色谱填料变脆，易于粉碎
溶解，柱压因而逐渐增加，色谱柱寿命较短；祝明
等[1]采用的流动相仅针对红花黄色素测定进行了探
讨，未涉及到羟基红花黄色素A的测定；杨晓君[2]、
赵明波[3]采用的甲醇一0．5％磷酸溶液作为流动相，
柱效低、分离度差、峰拖尾严重。本实验对色谱条件
中的流动相作了优化选择，使得注射用红花黄色素
中的羟基红花黄色素A在较短的时间内得到分离
完全，从而使定量准确，测定方便，便于实际工作中
的质量检测控制。
1仪器与试剂
美国BIO—RAD型HPLC仪。羟基红花黄色素
A对照品由中国药品生物制品检定所提供；注射用
红花黄色素为红花药材加工提取的单味制剂，由浙
江永宁制药厂生产。四丁基氢氧化铵溶液、磷酸二氢
钾、磷酸为分析纯；乙腈色谱纯，注射用水。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为AgilentZorbaxEclipe
XDB—C18(250mm×4．6mm，5弘m)，流动相为乙
腈一0．05mol／L磷酸二氢钾溶液一10％四丁基氢氧
化铵溶液(170：800：20，用1mol／L磷酸调pH
5．5)，柱温25℃，体积流量为1．0mL／min，检测波
长360nm，进样体积20肛L。羟基红花黄色素A峰
的保留时间约为14min。
2．2溶液的配制
2．2．1对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色
素A对照品约18mg，置100mL量瓶中，加水溶解
并稀释至刻度，摇匀。
2．2．2供试品溶液的制备：精密称取注射用红花黄
色素约25mg，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释
至刻度，摇匀。
2．3 线性关系考察：精密称取羟基红花黄色素A
收稿日期：2005—09—12
基金项目：国家“十五”重大科技专项项目(2002AA223134)
对照品适量，加水制成质量浓度分别为49．51、
99．01、198．02、297．04、396．05、495．06、594．07、
693．09、792．10、891．1l,ug／mL，分别进样20肛L，在
上述色谱条件下测定峰面积。以峰面积为纵坐标
(y)，羟基红花黄色素A进样量为横坐标(x)作线
性回归，线性范围为0．99012～17．8222弘g，回归
方程为：Y一103493．15421x一6166．32438，r一
0．99999。
2．4精密度试验：精密称取羟基红花黄色素A对
照品适量，加水制成183／-g／mL的溶液，进样量20
弘L，连续进样5次，羟基红花黄色素A峰面积的
RSD为0．18％。
2．5重现性试验：取同一批注射用红花黄色素配制
成6份溶液，测定羟基红花黄色素A质量分数，计
算得其RSD为0．58％。
2．6稳定性试验：取注射用红花黄色素供试品溶液
分别在0、1、2、3、4、6、8h测定，结果羟基红花黄色
素A的质量分数的RSD为0．15％。
2．7 回收率试验：采用加样回收法。精密称取同一
批样品约12．5mg，9份，置于100mL量瓶中，分3
个水平分别加入1．464、1．800、2．180mg／mL羟基
红花黄色素A对照品溶液各5mL，用水溶解并稀
释至刻度，各进样20肛L，结果加样回收率为
98．8％，RSD为0．58％(以一9)。
2．8样品测定：精密称取对照品和供试品各3份，
分别进样20肛L，在上述色谱条件下测定样品中羟
基红花黄色素A，结果见表1，色谱图见图1。
表1样品中羟基红花黄色素A的测定结果(辟一3)
Table1 HydroxysaffloweryellowAinsamples(一一3)
批号 羟基红花黄色素A／(mg·g_1)
3讨论
l
2
3
4
5
0
O
O
O
O
3
3
3
3
3
O
O
O
0
O
5
5
5
5
5
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
2
2
2
2
2
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·705·
A
●
0 4 8 12 16 20 24 28 32
+
B
．JL
0 4 8 12 16 20 24 28 32
r，min
*一红花黄色素A
*一hydroxysaffloweryellowA
图1羟基红花黄色素A对照品(A)和注射用红
花黄色素(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfhydroxyafflower
yellowAreferencesubstance(A)
andSafflowerYellowInjection
羟基红花黄色素A极性较强，强酸性，具有亲
水性，根据反相离子对HPLC理论，可采用含有四
丁基氢氧化铵离子的流动相，羟基红花黄色素A在
流动相中与四丁基氢氧化铵离子生成不带电荷的中
性离子，增加了非极性固定相中的溶解度，使分配系
数增加，改善分离效果。加入磷酸盐是采用离子抑制
色谱法，加入磷酸盐是作为抑制剂，调节pH值，抑
制组分的分离，增加中性分子存在的几率。
在乙腈一0．03mol／L磷酸二氢钾溶液一10％四
丁基氢氧化铵溶液(170：800：15)为流动相，用磷
酸调pH时，当pH5．5时，图谱分离比较好。
乙腈一0．01mol／L磷酸二氢钾溶液一10％四丁
基氢氧化铵溶液(170：800：15)为流动相，用磷酸
调pH5．5时，改变磷酸二氢钾的浓度。当磷酸二氢
钾为0．05mol／L时，图谱分离比较好。
当10％四丁基氢氧化铵溶液为20mL时，图谱
分离比较好。
采用乙腈作为有机调节剂，流动相的黏度较低，
有利于色谱分析。乙腈比例降低，各组分的保留均增
加。乙腈比例变化对主峰的保留影响最大，乙腈比例
由17％降至12％，主峰的保留时间由11min增至
58min。在本色谱系统中，为同时兼顾色谱选择性和
分析时间等因素，乙腈比例定为17％。
本实验所采用的流动相具有足够的缓冲容量，
在线性范围测定过程中，羟基红花黄色素A的色谱
峰形不随其变化而变化，色谱峰形均正常。
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CarthamintinctoriusI-Y1．JChinMedMater(中药材)，2000，
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hydroxysaffloweryellowAinCarthamustinctoriusL．byhigh
performanceliquidhromatography[J]．ChinJChromatogr
(色谱)，2003，21(6)：593—595．
薄层扫描法测定胃康胶囊中人参皂苷Rg。和人参皂苷Rb。
马 莉1，唐健元1，李祖伦1，肖小河2，廖庆文3，冯少华2
(1．成都中医药大学，la)lI成都610075；2．解放军302医院全军中医药研究所，北京100039；
3．湖南中医学院，湖南长沙410007)
胃康胶囊为临床经验方，由人参、藿香、白扁豆、
甘草等中药组成，具有补脾益胃、化湿浊、和中止呕
的作用，临床用于治疗小儿脾虚湿蕴之吐泄不止，不
思饮食。方中以人参为君药，人参皂苷Rb。、人参皂
苷Rg，均为其特征的有效成分。为保证成品质量，本
实验建立了双波长薄层扫描法测定胃康胶囊中人参
皂苷Rb。和人参皂苷Rg。的测定方法。
1仪器与试剂
瑞士CAMAGTLCScanner--3；瑞士
CAMAGATS一4自动点样机；恒温鼓风干燥箱(黄
石市恒丰医疗器械有限公司)；AEl63型电子分析
天平(瑞士梅特勒公司)；高效硅胶G薄层板(青岛
收稿日期：2005—07—24
作者简介：马莉(1977一)，女，四川崇州人，助理研究员，在读博士，研究方向为中药学。
Tel：(010)63246736E—mail：marytjy66@yah001．com．cn
万方数据
HPLC法测定注射用红花黄色素中羟基红花黄色素A
作者： 陆仙芸， 林德君， 徐升亮
作者单位： 浙江永宁制药厂,浙江,台州,318020
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(5)
被引用次数： 10次

参考文献(3条)
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2000(08)
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刊论文]-新疆医科大学学报 2005(01)
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L.by high performance liquid chromatography[期刊论文]-色谱 2003(06)

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