全 文 ：·药材·
麻黄中生物碱类有效成分的非水毛细管电泳含量测定
季一兵 ,陈玉英 ,吴如金
(中国药科大学 ,江苏 南京　 210009)
摘　要: 目的　利用非水毛细管电泳 ( N ACE)法对麻黄中各生物碱类有效成分进行含量测定 ,并比较不同提取方法
中各组份含量差异。方法　采用 50 mmol /L醋酸铵的甲醇溶液 ,未加入任何其他添加剂 ,检测波长为 210 nm。结果
各组份在 8 min内达基线分离。 伪麻黄碱在 9. 8～ 147. 0μg /m L,去甲基麻黄碱在 6. 8～ 102. 0μg /mL ,麻黄碱在
9. 4～ 141. 0μg /m L,去甲基伪麻黄碱在 4. 8～ 72. 0μg /m L,甲基麻黄碱在 6. 8～ 102. 0μg /mL分别有良好的线性关
系。各麻黄碱类回收率在 95. 0% ～ 100. 4%。结论　为麻黄中各生物碱类有效成分的含量测定提供了一种快速、准
确和灵敏的测定方法。
关键词: 麻黄 ;麻黄碱类生物碱 ;非水毛细管电泳 ;含量测定
中图分类号: R282. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 12 1127 03
Determination of ephedrine alkaloids inEphedra s inica
by nonaqueous capillary electrophoresis
JI Yi-bing , CHEN Yu-ying , WU Ru-jin
( China Pha rmaceutical Univ e rsity , Nanjing 210009, China)
Abstract: Object　 To develop a rapid method fo r the determination o f ephedrine alkaloids in Ephedra
sinica Stapf by nonaqueous capi llary elect ropho resis ( N ACE) and evaluate the ex tracting method by deter-
mining the amount o f alkaloids. Methods　 The buf fer contained 50 mmol /L ammonium aceta te in
methano l w ithout any addi tiv es w as used. And the detection w aveleng th was 210 nm. Results　 The best
separation result w as achiev ed w ithin 8 min. Linea ri ty w as obtained in range of 9. 8- 147. 0μg /mL pseu-
doephedrine, 6. 8- 102. 0μg /mL for norephedrin, 9. 4- 141. 0μg /mL fo r ephedrine, 4. 8- 72. 0μg /mL
fo r no rpseudoephdrine, 6. 8- 102. 0μg /m L for methylephedrine respectiv ely. The recovery range of these
fiv e alkaloids w as 95. 0% - 100. 4% . Conclusion　 This method is rapid and accurate for the quanti tativ e
analysis o f ephedrin alkaloids in E. sinica.
Key words: Ephedra sinica Stapf; ephedrine alkaloids; nonaqueous capil la ry elect ropho resis ( N ACE) ;
quanti tativ e analy sis
　　麻黄为麻黄科植物草麻黄 Ephedra sinica Stapf
的干燥草质茎 ,始载于《神农本草经》。 具有发汗散
寒、宣肺平喘、利水消肿的功能。 为临床上治疗上呼
吸道疾患的重要中药材之一。麻黄主要含生物碱 ,总
生物碱含量约为 1. 3% ,主要有麻黄碱、伪麻黄碱、
甲基麻黄碱、甲基伪麻黄碱、去甲基麻黄碱、去甲基
伪麻黄碱。 《中华人民共和国药典》中含量测定方法
规定总生物碱不得少于 0. 80% 。各麻黄生物碱结构
相近 ,两两之间为差向异构体 ,但药理作用有所差
异 ,有必要建立快速、准确的分离分析方法对各种麻
黄碱类生物碱分别进行测定。
自 1990年 Kenndler等将毛细管电泳 ( CE)技
术首次用于熊果中的熊果苷等的化学成分分离与测
定以来 , CE法在天然产物分离分析中的应用得到
了迅速发展 ,分离成分主要包括生物碱、黄酮、苷类、
有机酸、香豆素、木脂素、醌类等 ,国内已有该方面的
综述报道 [1 ]。本实验首次利用非水介质毛细管电泳
( N ACE)方法对麻黄中 5种生物碱进行定量分析 ,
并对不同的提取方法进行对比研究 ,为分析麻黄中
各生物碱含量及优化麻黄提取工艺提供快速、有效
·1127·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-03-17作者简介:季一兵 ,女 ,江苏镇江人 ,讲师 , 2001年获理学博士学位 ,研究方向为中药质量控制研究和现代仪器分析。
Tel: ( 025) 5391152　 E-mai l: jiyibing@ jlonline. com
的方法。
1　仪器与试剂
P /ACE 5500毛细管电泳仪 (美国 BECKM AN
公司 ) ,带有二极管阵列检测器 ( DAD) , system Go ld
工作站。
实验所用药材经本校中药学院余伯阳教授鉴定
为草麻黄 E. sinica Stapf的干燥草质茎。 麻黄碱类
生物碱标准品均由江苏省药物研究所提供 ,甲醇为
色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　电泳条件:检测波长 210 nm,毛细管总长 57
cm,有效长度 50 cm ,内径 50μm,未涂渍 ;运行电压
30 kV,压力进样 ,时间 5 s。缓冲液为 50 mmo l /L醋
酸铵的甲醇溶液。 各类型非水溶液在使用之前均用
0. 45μm微孔滤膜滤过。
2. 2　供试品溶液的制备: 称取 0. 5 g麻黄药材粉
末 ,分别用 50 m L 1%盐酸溶液和水作为提取溶液 ,
用索氏提取法 ,加热回流 2 h。 将提取液滤过后 ,旋
转蒸发至干 ,再用甲醇稀释至 10 mL作为供试品液
A和 B。再取同法得到的酸提取液移入分液漏斗 ,加
入 NaCl约 1 g ,依次加入乙醚 20, 10, 10 m L萃取 ,
合并醚层 ,用 15 mL水洗涤后弃去 ,洗涤液并入水
层 ,加入浓氨水 5 mL,再依次加入氯仿 20, 10, 10
m L萃取 ,合并氯仿层后 ,旋转蒸发至干 ,用甲醇定
容至 10 mL。得供试品溶液 C。
2. 3　对照品溶液的制备: 分别称取麻黄碱 ( E)
11. 75 mg ,伪麻黄碱 ( PE) 12. 25 mg ,甲基麻黄碱
( M E) 9. 25 mg ,去甲基麻黄碱 ( N E) 8. 50 mg ,去甲
基伪麻黄碱 ( N PE) 6. 00 mg ,置于 25 mL量瓶中 ,用
甲醇稀释至刻度 ,作为对照品储备液。
2. 4　方法学考察
2. 4. 1　线性范围:精密称取 12. 51 mg萘羟心安 ,
置于 25 mL量瓶中用甲醇稀释至刻度 ,作为内标储
备液 ;分别吸取各对照品储备液 0. 2, 1. 0, 1. 5, 2. 0,
2. 5, 3. 0 mL,内标储备液 1. 0 mL,置于 10 mL量瓶
中 ,用甲醇稀释至刻度 ,按前述条件分别进行 CE测
定 ,以各对照品峰与内标峰面积比 ( A /Ai )为纵坐
标 ,浓度 C (μg /mL)为横坐标 ,得到标准曲线及线性
范围 ,如表 1所示。
表 1　 5种生物碱的线性范围
Table 1　 Linearity of f ive alkaloids
生物碱
线性范围
/(μg· mL- 1)
直线方程 r
最低检出浓度
/(μg· mL- 1)
PE 9. 8～ 147. 0 A /Ai= 4. 29× 10- 4+ 0. 010 0 C 0. 999 2 1. 96
NE 6. 8～ 102. 0 A /Ai= 1. 33× 10- 3+ 0. 027 1 C 0. 999 1 0. 69
E 9. 4～ 141. 0 A /Ai= 2. 02× 10- 3+ 0. 012 0 C 0. 999 3 1. 50
N PE 4. 8～ 72. 0 A /Ai= 2. 14× 10- 3+ 0. 011 3 C 0. 999 6 1. 58
ME 6. 8～ 102. 0 A /Ai= 8. 00× 10- 3+ 0. 012 0 C 0. 998 9 1. 00
2. 4. 2　最低检出浓度:按信噪比 ( S /N )为 3计算 ,
得各组份的最低检出浓度见表 1。
2. 4. 3　精密度试验:取中间浓度的各对照品溶液 ,重
复进样 5次 ,测得的峰面积比 RSD平均为 1. 26% 。
2. 4. 4　取样品溶液 A分别于制备后 0, 2, 4, 6, 8 h
进行测定 ,峰面积比 RSD为 1. 96%。
2. 4. 5　回收率的测定: 称取 0. 5 g麻黄粉 ,加入 5
mL标准储备液及内标储备液 ,按前述酸提法提取、
定容 ,溶液用 0. 45μm滤膜滤过后 ,进行 CE分析 ,
结果见表 2(由于对照品量有限 ,只进行了主成分
PE的高、中、低回收率测定 )。
表 2　 5种生物碱的回收率 (n= 5)
Table 2　Recovery of f ive alkaloids (n= 5)
组　　分 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% RSD /%
　 　 80% 2. 01 1. 96 97. 51 -
PE　 100% 2. 45 2. 39 97. 55 1. 76
　 　 120% 2. 95 2. 89 97. 97 -
N E 1. 70 1. 67 98. 24 2. 15
E 2. 35 2. 36 100. 40 1. 59
NPE 1. 20 1. 14 95. 00 2. 05
M E 1. 85 1. 79 96. 76 1. 44
2. 4. 6　供试品溶液中各生物碱的含量测定: 分别精
密吸取供试溶液 A, B, C各 4 mL及内标储备液 1
mL置于 3只 10 mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,溶
液均用 0. 45μm滤膜滤过 ,进行 CE分析 ,平行测定
5份 ,方法重现性及含量测定结果见表 3。对照品和
供试品溶液 A, B, C电泳图见图 1。
3　讨论
3. 1　文献报道的各种方法多为测定麻黄碱和伪麻
表 3　 5种生物碱含量测定结果 (n= 5)
Table 3　 Contents of alkaloids in f ive alkaloids (n= 5)
供试品溶液 PE含量 /( mg· g- 1 )　 RSD /%
NE
含量 /( mg· g- 1 )　 RSD /%
E
含量 /( mg· g- 1 )　 RSD /%
N PE M E
含量 /( mg· g- 1)　 RSD /%
A 5. 88 1. 91 0. 12 2. 01 0. 89 1. 76 痕量 0. 06 1. 36
B 4. 99 1. 62 0. 07 2. 32 0. 64 1. 73 未检出 未检出
C 5. 66 1. 79 0. 09 2. 01 0. 82 1. 49 未检出 未检出
·1128· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
时间 t /min
1-PE　 2-NE　 3-E　 4-NPE　 5-ME　 6-内标
1-PE　 2-NE　 3-E　 4-NPE　 5-ME　 6-Propanolol ( i. s. )
图 1　对照品 (Ⅰ )和供试品溶液 A , B,C电泳图
Fig. 1　 Electropherograms of ref erence substances (Ⅰ ) and sample solutions A, B, C
黄碱中一种或两种生物碱含量 ,而同时分离分析多
种麻黄碱类生物碱的方法主要是 HPLC法 [2, 3 ]和
CE法 [ 4] ,但前者分离效率低且分析时间较长 ,前处
理步骤繁琐 ; CE法均采用水溶液系统 ,需加入多种
添加剂 ,有些添加剂昂贵且不易得 ,而且添加剂的加
入使分离体系复杂 ,可能会影响样品检测和分离重
现性。 本文所采用的 NACE法体系简单 ,分离效率
高 ,适用于药材中麻黄碱类生物碱的含量测定。
3. 2　测定条件的选择:通过对有机溶剂的种类和比
例 ,醋酸铵溶液的浓度等条件的摸索 ,确定了最佳分
离条件 [5 ]。
3. 3　提取条件的选择:总生物碱的溶剂提取方法中
可用的溶剂有水 -有机溶剂、酸水 -有机溶剂、醇-有
机溶剂、碱-有机溶剂等 ,根据麻黄碱自身特点 ,现多
采用前两种溶剂 [6 ] ,即先用水或酸水提取后 ,再经过
乙醚及氯仿的萃取才能得到。实验结果表明 ,以主成
分伪麻黄碱的提取率为标准 ,以 1% HCl溶液为溶
剂 ,中药麻黄的浸提效果最好 ,本实验中比较了未萃
取液 ( A)和萃取液 ( C)的各组份含量情况 ,两者差异
没有显著性。由于毛细管电泳自身的优势 ,如分析高
效、快速、简便 ,柱不易受污染等 ,中药提取液不经萃
取去除杂质即可直接进行 CE分析 ,简化操作步骤 ,
使测定回收率提高。
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杜仲中活性成分的分布及其累积动态变化规律的研究
戚向阳 1 ,陈维军 2 ,张声华 1
( 1. 华中农业大学 食品科学系 ,湖北 武汉　 430070;　 2. 中国化工宁波进出口公司 ,浙江 宁波　 315000)
摘　要: 目的　研究产地、生长季节及采后处理方式对杜仲皮、叶中 5种主要生物活性成分含量的影响。 方法　利
·1129·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-03-25基金项目:湖北省重点攻关课题 ( 952P0506)作者简介:戚向阳 ( 1968- ) ,女 ,湖北枣阳 ,副教授 ,博士 ,主要从事天然产物化学与保健功能的研究。 　 Tel: ( 027) 87282111　
E-mai l: qxiangyang@ mai l. hzau. edu. cn