全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月· 847·
红花对实验性局灶节段性肾小球硬化症大鼠纤溶系统的影响
陈志强1，赵玉庸2，范焕芳1，张芬芳1，张江华1
(1．河北医科大学中西医结合研究所，河北石家庄050017}2．河北医科大学中西医结合学院，河北石家庄050091)
活血化瘀中药红花具有抗凝作用，已经广泛应
用于心、脑血管疾病，而在肾脏疾病中的应用报道很
少。纤溶系统功能障碍是多种慢性肾脏疾病常见的
病理生理改变，与肾小球硬化及问质纤维化的形成
密切相关。本实验采用一侧肾切除加尾iv阿霉素复
制局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)大鼠模型，观
察红花对FSGS大鼠纤溶系统的影响及其干预性
治疗作用，为红花在慢性肾脏疾病中的应用提供实
验依据。
l材料与方法
1．1 动物：健康雄性SD大鼠30只，体重为
(180±10)g，由河北医科大学动物中心提供。
1．2药品与试剂：红花，为免煎中药饮片，每袋6
g，批号020402，由三九医药股份有限公司提供；阿
霉素粉剂，每瓶10mg，上海华联制药有限公司产
品。山羊抗大鼠组织纤溶酶原激活剂(t—PA)、山羊
抗大鼠I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI一1)多克
隆抗体、PAI一1原位杂交试剂盒、DAB试剂盒均由
武汉博士德生物有限公司提供。
1．3仪器：7170A自动生化分析仪；Qc191型自
动放免分析系统；光学显微镜(日本Olympus)；
HPIAs一1000图像分析仪。
1．4模型制备及给药：将同批大鼠随机分为假手术
组、模型组和红花组，每组10只。假手术组：剥离肾
包膜，不切除肾脏，缝合切口，每日ig适量蒸馏水。
模型组：行右侧肾脏切除术，术后第7天及第30天
时分别尾iv0．1％阿霉素5和3mg／kg。红花组：
造模方法同模型组，第1次尾iv阿霉素1周后ig
红花4g／kg，给药至8周末。
1．5检测指标与方法
1．5．1 24h尿蛋白测定：于实验第8周末采用磺
柳酸法进行蛋白测定。
1．5．2血生化指标：用全自动生化分析仪检测血清
尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、总蛋白(TP)、白蛋
白(Alb)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。
1．5．3光镜观察：取新鲜肾组织，4％多聚甲醛溶
液固定，石蜡包埋，制成3,um石蜡切片，行HE、
PAS染色，显微镜下观察其病理形态学改变。
1．5．4免疫组织化学染色及半定量分析：具体步
骤：(1)取左肾组织，石蜡包埋，切片厚度为4pm，脱
蜡至水。(2)灭活、微波修复抗原、正常山羊血清封
闭。(3)滴加山羊抗大鼠t-PA(稀释1t 80)一抗抗
体，37℃孵育1～2h；滴加山羊抗大鼠PAI—l(稀
释1；80)一抗抗体，4℃过夜。(4)滴加生物素化
二抗抗体，室温下30min左右，PBS洗2min×3
次，滴加三抗，室温下20min。(5)DAB显色，苏木
素复染，脱水，透明，中性树脂封片。
肾小球内半定量分析：采用HPIAs—1000型
全自动彩色病理图像分析系统，在200倍光镜下测
量每个肾小球的面积以及阳性染色面积。用阳性染
色面积和肾小球面积的比值表示t—PA的相对水
平。3组大鼠每组选取6只大鼠标本，每个标本测量
10个肾小球进行半定量分析。肾小管间质的半定量
分析：选用标本数同上。在200倍光镜下测量lo个
视野，计算每个视野阳性染色面积及整个视野面积。
阳性染色面积和整个视野面积的比值为相对水平。
1．5．5PAI一1原位杂交及半定量分析：(1)6pm肾
组织石蜡切片，脱蜡至水。(2)胃蛋白酶37℃消化。
(3)滴加预杂交液。(4)滴加PAI一1探针杂交液。
(5)恒温箱42℃杂交过夜，滴加生物素化鼠抗地高
辛及生物素化过氧化物酶。(6)DAB显色，复染，脱
水，透明，封片。原位杂交的半定量分析方法同
1．5．4项。
1．6统计学处理：使用SPSS10．0统计软件，所有
数据均用x±s表示，采用单因素方差分析进行统计
学分析。
2结果
2．1动物生存情况：假手术组在实验过程中未出现
动物死亡；模型组于实验第5周死亡2只，红花组于
实验第6周死亡1只。
箨薯品霁：翟慧盖；怒2)，山西人，博士，教授，主任医师，副院长，博士生导师，研究方向为肾脏病的临床及基础研究
万方数据
·1848· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月
2．2各组大鼠血清TP、Alb、TC、TG水平的测定
结果：见表1。模型组TP、Alb的水平显著低于假手
术组(P
0．01)。
2．3各组大鼠24h尿蛋白量及血清BuN、SCr水
平的测定结果：见表l。模型组8周末24h尿蛋白
量明显高于假手术组(尸
于假手术组(P<0．01)，红花组与模型组比较，
BuN、sCr水平明显下降(尸<0．01)。
裹1各组大■血清TP、Alb、TC、TG、BUN、SCr和24h尿蛋白量的比较(z士s)
Table1 ComparisonofTP，AIb，TC，TG．BUN。SCr．and24hurineproteinofratsIneverygroups(；土s)
与假手术组比较：。P<0．05一尸<0．01·与模型组比较：60P<仉01
。P
性硬化，约3％呈球性硬化，受累肾小球系膜区呈 升高。红花组与模型组相比，t—PA相对水平升高(P<
现局灶性或弥漫性增宽，球囊黏连，部分肾小球代偿0．05)，而PAI一1则降低(尸
胀；间质有局灶性萎缩和纤维组织增生。未受累肾小PAI一1蛋白表达有抑制作用。肾小管中PAI—l相对水
球呈阴性表现，符合FSGS病理改变。红花组约平表达和肾小球中相似。
10％肾小球出现节段性硬化，约2％呈球性硬化。 2．6各组大鼠肾组织PAl一1mRNA的表达及半定
受累肾小球系膜区轻度增宽，偶见球囊黏连。有少数 量分析结果：见表2。假手术组肾小球内未检出
近曲小管上皮细胞变性，间质有少量的纤维组织增PAI一1mRNA的表达，肾小管及间质血管壁上有
生及炎性细胞浸润。提示红花可减轻阿霉素诱导的PAI一1mRNA表达；模型组与假手术组相比，PAl一1
FSGS大鼠的病理损害。 mRNA在肾小管及问质中表达升高(尸<0．01)；红
2．5各组大鼠肾组织t-PA及PAI一1蛋白表达及半花组与模型组相比，PAI一1mRNA在肾小球内的相
定量分析结果：见表2。假手术组t-PA广泛表达于肾对水平无明显差异(P>o．5)，在肾小管及间质中，
小球毛细血管襻、远端集合管及小部分远曲小管；PAI—PAI1mRNA表达降低(P
小球中的相对水平显著低于假手术组(P<0．01)，而验结果同时表明PAI一1mRNA在肾小球中表达不
PAI一1则显著高于假手术组(P<0．01)，提示实验8明显。主要在肾小管及间质中有表达。
裹2各组大鼠肾组织TPA、PAI一1相对水平厦PAl一1mRNA裹达(；士s．1／--6)
Table2 RelativeamountofTPA，PAI一1，andexpressionofPAI一1mRNAinrenal
tissueofratineverygroups(xS：s．H一6)
与假手术组比较：一P<0．01l与模型组比较；6P
纤溶系统由纤溶酶原、纤溶酶、纤溶酶原激活物 组织内t-PA主要参与肾小球及血管内血栓溶解和
(PA)和激活物的特异性抑制剂(PAI)等组成。PA基质降解；PAl一1是t-PA特异性抑制因子，不仅参
分为组织型(t—PA)和尿激酶型(u—PA)两种。与了肾小球内血栓形成、纤维蛋白溶解等凝血与纤
万方数据
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溶过程，而且在细胞黏附和细胞外基质(ECM)降
解过程中也具有重要的作用。
肾脏有疾病时肾组织内存在纤维蛋白沉积、微
血栓形成、肾小球ECM积聚等常见的病理生理现
象。其主要机制为肾脏局部t—PA活性下降和／或
PAI一1表达增强，导致肾小球内纤维蛋白沉积、基质
积聚，肾小球硬化及间质纤维化。FSGS为慢性肾脏
疾病的主要病理类型之一，进一步发展会出现肾小
球球性硬化和间质纤维化，导致慢性肾功能衰竭。
中医学认为FSGS发病机制与正气不足，水病
及血，湿郁致瘀有关。无论气虚致瘀还是湿阻致瘀均
与现代医学认为的高凝状态有关，推测其机制为凝
血纤溶系统功能紊乱所致，故纠正t—PA／PAI一1的
紊乱具有重要意义。
本实验结果显示，红花组的尿蛋白、BuN、SCr
及血脂明显降低，血浆蛋白明显升高，病理改变比模
型组较轻。说明红花能够有效减少大鼠尿蛋白，提高
血浆蛋白，改善脂质代谢，保护大鼠的肾功能，与文
献报道E“2]一致。实验结果同时表明红花对病变肾组
织中的t-PA表达有促进作用，而对PAI一1及其
mRNA的表达有抑制作用，能改善FSGS大鼠纤溶
系统功能紊乱。
文献报道阿霉素在体内产生的自由基诱导了肾
小球上皮细胞脂质过氧化反应，破坏了肾小球滤过
膜的结构和功能，最终导致滤过屏障的选择性变化
而致病‘“。肾脏部分切除后氧自由基明显增多“]，氧
自由基增多可使PAI一1mRNA高表达口3。而红花中
的有效成分之一红花红色素对超氧自由基有较好的
清除作用，具有抗氧化能力口“]，从而延缓肾脏病变
进一步发展。因此，推测红花可能通过上述机制，阻
遏氧自由基造成的肾损害，使PAI一1及maNA表
达下调，从而纠正纤溶系统功能紊乱，延缓肾小球硬
化和肾间质纤维化的进程。
红花有较好的降压作用，红花的降压作用是通
过抑制肾素一血管紧张素系统实现的口]。而血管紧张
素Ⅱ(AngⅡ)是肾素一血管紧张素系统的重要介
质。研究表明缬沙坦是AngⅡ的I型受体拮抗剂，
能通过阻断AngⅡ的作用，减少PAl一1的生成，改
善纤溶活性01。推测红花与缬沙坦可能有相同的作
用机制。
红花具有很好的活血通络化瘀作用，其作用与
红花提取物的抗凝作用有关。研究表明红花提取物
对ADP诱发的家兔血小板聚集有明显的抑制作
用，体内静脉给药能明显延长大鼠的凝血时间，并显
著抑制大鼠血栓的形成，对内源性凝血系统的激活
有一定的抑制作用‘”3。本实验中未做血中t—PA和
PAI一1的检测，红花是否能通过溶解血栓，纠正
t—PA和PAI一1的失衡有待于进一步研究。
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万方数据
红花对实验性局灶节段性肾小球硬化症大鼠纤溶系统的影响
作者： 陈志强， 赵玉庸， 范焕芳， 张芬芳， 张江华
作者单位： 陈志强,范焕芳,张芬芳,张江华(河北医科大学,中西医结合研究所,河北,石家庄,050017)，
赵玉庸(河北医科大学,中西医结合学院,河北,石家庄,050091)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(12)
被引用次数： 2次
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