全 文 :的黄酮含量差异具有显著性 (P < 01001)。
3 讨论
植物药的细胞壁是由纤维素构成, 植物的有效
成分往往被包裹在细胞壁内。纤维素由 Β2D 2葡萄糖
以 1, 42Β2葡萄糖苷键连结, 用纤维素酶酶解可以破
坏 Β2D 2葡萄糖键, 使细胞壁破坏。实验中经过纤维
素酶处理后再进行水回流提取, 总黄酮含量比直接
水提提高 2315% , 这可能是由于纤维素酶可充分破
坏竹叶以纤维素为主的细胞结构。
植物中总黄酮的含量测定方法大多是采用提取
液直接经显色反应后测定吸光度, 然后计算含量。本
实验对竹叶总黄酮的含量测定方法做了改进, 提取
液经过聚酰胺树脂纯化后再显色测定。提取液经过
聚酰胺柱, 水洗可以去除极性大的杂质, 如糖类、多
酚类等, 使显色反应干扰减小, 从而使测得的总黄酮
含量准确度提高。
References:
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灵芝、香菇、黄芪、枸杞提取物中多糖的含量测定
张 立, 马 琼, 何永利, 张朋涛Ξ
(西安高科实业股份有限公司天诚医药生物工程分公司, 陕西 西安 710075)
研究发现许多药用植物及真菌的多糖成分具有
独特的生物活性: 香菇多糖有抗肿瘤作用, 灵芝多糖
有调血糖和抗衰老的作用, 枸杞多糖能提高机体免
疫力并能抗衰老, 黄芪多糖有双向调节血糖的作用。
苯酚2硫酸法是比较经典的多糖含量测定方法, 本实
验优化了显色条件, 统一了样品处理条件, 同时测定
了灵芝、香菇、黄芪、枸杞提取物中多糖含量, 得到了
稳定的检测结果。
1 仪器与试药
UV —2101PC 紫外2可见分光光度计 (日本岛
津) , KQ —250 超声波清洗仪 (昆山淀山湖仪器厂)。
葡萄糖等为分析纯, 水为蒸馏水, 灵芝、香菇、黄
芪、枸杞提取物由本公司提供。
2 方法与结果
211 标准曲线制备: 精密称取 105 ℃干燥至恒重的
葡萄糖对照品约 50 m g 于 50 mL 量瓶中, 加水溶解
并加至刻度。分别精密移取该溶液 110, 210, 310,
410, 510 mL 于 50 mL 量瓶中, 加水稀释并加至刻
度。各取 110 mL 于 25 mL 具塞刻度试管中, 分别加
入 5% 苯酚溶液 110 mL , 摇匀, 加入 510 mL 浓硫酸
(加入浓硫酸时, 勿沿壁加入, 应将移液管口悬于试
管口, 使浓硫酸垂直冲入液面) , 立即摇匀。沸水浴加
热 10 m in, 冰水浴冷却, 放至室温, 以蒸馏水同法做
空白参比, 在 485 nm 处测吸光度 (A )。以A 为横坐
标, 浓度为纵坐标, 绘制标准曲线, 得线性方程 Y =
9419X , r= 01998 8。线性范围: 20~ 120 ΛgömL。
212 供试品溶液的制备: 精密称取提取物约 200
m g, 置 100 mL 量瓶中。按 200 m g 加入 100 mL 的
比例, 计算并加入 80% 乙醇溶液, 超声振荡 2 h。放
置至室温, 滤过, 弃去滤液, 用 80% 乙醇溶液洗涤残
渣 3 次。将残渣连同滤纸一同移入原 100 mL 量瓶
中, 加入沸水共约 80 mL , 超声振荡 1 h, 放置至室温
定容, 摇匀, 滤过, 取续滤液 510 mL 于 50 mL 量瓶
中 (适于含量 10%~ 60% 的样品, 对于含量过低或
过高样品, 应适当改变移取体积) , 加水定容, 即得。
213 精密度试验: 分别精密吸取 4 种供试品溶液
110 mL 于 25 mL 具塞试管中, 依 211 项下方法显
色, 测定A 值, 求得其R SD 分别为 0178% , 0154% ,
1103% , 0162% (n= 5)。
214 显色稳定性: 将 4 种供试品溶液完成显色后, 2
h 内连续测定, 得其A 值为一定值不变。
215 重现性试验: 取 4 品种供试品, 分别精密称取
5 份, 制备供试品溶液并测定多糖含量, 结果灵芝、
香菇、黄芪、枸杞多糖的含量分别为 13187% ,
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Ξ 收稿日期: 2003204208
33141% , 15196% , 5100% , R SD 分别为 0191% ,
1185% , 0143% , 1122% (n= 5)。
216 回收率试验: 取已知含量的 4 种供试品溶液,
分别加入一定量的葡萄糖对照品溶液, 混匀后取
110 mL 于 25 mL 具塞试管中, 依 211 项下方法显
色, 测定吸光度, 计算回收率。结果灵芝、香菇、黄芪、
枸杞的平均回收率及其 R SD 分别为 10016% ,
1136% (n= 5) ; 10111% , 2113% (n = 4) ; 99156% ,
2147 (n= 5) ; 10218% , 2101% (n= 5)。
217 样品的测定: 按上述 211, 212 项下方法操作,
测定了 8 批样品中的多糖, 结果见表 1。
表 1 提取物中多糖含量测定结果 (n= 3)
Table 1 Polysacchar ide in extracts (n= 3)
样 品 多糖含量ö% RSD ö%
灵芝 01 13. 06 0. 65
02 12. 33 1. 21
枸杞 01 5. 42 0. 77
02 5. 66 0. 45
黄芪 01 18. 44 1. 15
02 20. 36 0. 86
香菇 01 40. 67 1. 05
02 35. 25 1. 01
3 讨论
311 检测波长的选择[1, 2 ]: 取反应溶液, 以蒸馏水同
法做空白, 在 300~ 700 nm 做吸光度扫描, 得其最
大吸收波长为 485 nm。
312 水浴条件选择: 取对照品溶液与供试品溶液做
不同水浴时间及水浴方式的实验, 结果表明水浴时
间及方式对反应影响不大。
313 浓硫酸加入方式的选择: 试验发现, 加入浓硫
酸的操作方法是影响显色结果的主要因素。常规试
剂加入方法引起显色结果不平行。采取“移液管悬
空, 垂直加入浓硫酸, 立即摇匀”的方式和“缓慢沿壁
加入浓硫酸, 分层, 静置一定时间后摇匀”的加入方
式, 都能得到稳定的显色结果。但是不同操作方法显
色结果不同。灵芝、枸杞、黄芪、香菇样品与葡萄糖对
照品都在“垂直加入浓硫酸、立即摇匀”的操作条件
下显色反应最充分。故选择该操作步骤为实验条件。
314 对照品的选择[3 ]: 本实验对灵芝、枸杞、黄芪、
香菇多糖样品和葡萄糖、果糖对照品都做了不同浓
硫酸加入方式的实验。结果发现, 灵芝、枸杞、黄芪、
香菇样品和葡萄糖对照品现象一致, 所以选择葡萄
糖做为检测灵芝、枸杞、黄芪和香菇样品的对照品。
315 供试品溶液制备条件的选择: 采用 80% 乙醇
超声除去样品中的单糖, 则方法平行性差。通过实
验, 确定了“根据实际称样量按比例加入 80% 乙醇,
超声振荡 2 h”的条件, 得到了稳定的检测结果。
316 灵芝、香菇、黄芪、枸杞提取物是组成较复杂的
粗多糖产品, 本方法以葡萄糖做对照, 检测结果以葡
萄糖计, 得到稳定的检测结果。
References:
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D ev (天然产物研究与开发) , 1996, 8 (3) : 5271
女宝胶囊的显微特征与薄层色谱鉴别
王勋久, 王益平Ξ
(重庆市万州区药品检验所, 重庆 404000)
女宝胶囊质量标准收载于《中华人民共和国卫
生部药品标准》中药成方制剂第五册。处方由人参、
川芎、鹿胎粉、银柴胡、牡丹皮、阿胶、龟甲、鳖甲、白
芍、肉桂、白术、泽泻、杜仲、荆芥穗、鹿茸等 45 味中
药组成, 标准中只有工艺制法及检查项。本实验采用
显微观察, 对荆芥穗、白芍、人参、杜仲、泽泻、白术、
肉桂、鹿茸 8 味药进行显微鉴别, 采用薄层色谱法对
处方中的人参、白芍、白术贵重药进行定性鉴定。
1 材料与试剂
女宝胶囊由吉林省四平市好得快药业有限公司
生产, 批号 20020801; 对照品、对照药材均由中国药
品生物制品检定所提供; 硅胶 G (青岛海洋化工厂生
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