全 文 ：·1716· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
当归愈伤组织的增殖与分化培养
杨宁，马瑞君。，赵庆芳，陈学林，雒晓芳
(西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州730070)
当归Angelicasinensis(Oliv．)Diels是三年生
药用植物，药用部位肉质直根具有补血、和血、诃经
止痛等作用[1。]，主产于甘肃东南部，是甘肃的特色
药产，长期以来，生产中存在早期抽苔和开荒育苗等
不利因素，严重影响其优质高产和对天然植被的破
坏，另外，还存在着严重的病虫害现象，其原因尚未
定论o]。目前，有美当归的组织培养研究虽已开展多
年““]，但均未达到工厂化生产试管苗的标准，因
此，以漳县当年的当归种子经萌发而得到的幼嫩水
培苗为材料，进行了愈伤组织的诱导o]，在此基础
上，本实验又探讨了当归愈伤组织的增殖、再分化以
及生根情况，以期探索用离体快繁的方式来获得性
状稳定的当归苗，解决其药董不足的问题，并为工厂
化生产提供理论依据，同时，有助于解决早期抽苔，
抛弃传统的生态破坏型育苗方式，保护当归种植区
的植被和生态环境。
1材料与方法
1．1材料与方法：由当归叶柄在H+2，4一D0．5
mol／L固体培养基上诱导产生的疏松而无定形的愈
伤组织，经多次继代培养增殖后，转移到分化培养基
中分化绿芽，再将绿芽转移到生根培养基上诱导其
生根，最终形成完整植株。
1．z培养基类型：①继代培养基：用于疏松而无定
形的愈伤组织继代增殖；②分化培养基：用于愈伤组
织再分化绿芽；③生根培养基：用于诱导绿芽生根。
1．3培养条件：培养基pH值为5．8，琼脂8g／L，
光照强度2000lx，光照时间10h／d，培养温度
(22士2)℃。
2结果与分析
2．1愈伤组织的继代培养
2．1．1不同培养基对当归愈伤组织继代的影响：从
表1可知，在3种基本培养基上，选用相同质量浓度
的萘乙酸和玉米索，无论从褐化率角度还是生长状
况来看，当归愈伤组织在MS上继代均优于H和
B。，可见，当归愈伤组织的继代增殖对基本培养基选
择性较强，这一点与张世瑜和郑国昌口1的结论不同，
也不同于张俊莲“]，这可能与材料本身有关联，本实
验所用的材料是经当归种子萌发后，取其叶柄诱导
出的愈伤组织，而张世瑜和郑国昌以及张俊莲所用
材料都是用实生苗的不同部位诱导出的愈伤组织，
外植体生理年龄明显不同，可能诱导出的愈伤组织
特性也有所不同，这一现象还有待于进一步证实。
寰1基本培养基对愈伤蛆嘏缝代的影响
T^啊e1 Effect0fbasicmediaOllcallassubculture
嚣 NA．LA／(mg _1)(m92jL7—1)增殖倍数揭化事／“生长状况养基 ·I，_1 ·一) 。一 ’
H 0．05 0．5 1．2 43■-
邑 !：堕 !：! !：! !! ±
“+”表示可以生长和继代I“++”表示生长较好，继代较好
。+’IaleBnsthatcalluscouldgrowandbesubcuhuredl。++”
Ⅱ暇nsthatgrowthandsubcultureofcallusa抛better
2．1．2不同植物生长调节剂组合对当归愈伤组织
增殖的影响：由表2可知，采用MS基本培养基进行
愈伤组织的增殖，在单独使用一种生长素的C。和
c：培养基上，愈伤组织增殖很不明显，在只使用一
种细胞分裂素的c。培养基上，愈伤组织均不见增
殖，并且生长状况也不佳。但将二者合理搭配的C。
和cs培养基上，愈伤组织不仅增殖较明显，而且生
长状况较佳，可见。兼用生长素和6-BA增效作用较
明显。同时，在愈伤组织继代培养过程中，一部分愈
伤组织易变为黄褐色，黄褐色愈伤组织生活力较弱，
不久将失去生活力而死去，因此，在继代转移时应将
其剔除。
2．2愈伤组织分化培养
2．2．1愈伤组织类型不同，分化能力也不同：经继
代培养后产生出颜色、质地和形态差异较大的愈伤
组织团块，经分离可得到白色水渍状的、淡黄色略致
密的和紫红色疏松3种愈伤组织类型，这3种愈伤
收描日期，200S一01—13
基垒璃目4翌蜚眢磊蠢羞鹭蓥；：3}：蓦吾程资助项目‘NwNu—KJcxGc。02h甘肃省环境保护科研项目‘GH2001’12)’甘肃省自然科学基
尊翥景荏擎轰箬73青舞；嚣魏要去；主E簧-篡寺杰皂亳熙毒：i詈莹养·
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 717·
囊2不同檀糖生长调节帮担台对愈伤组织增殖的影唷
Table2 Effectofdifferentphy ohormones
combinationOncallusproliferation
。+“表示基本可以生长}“++”表示生长较好，维代较好I“+++”表示
继代最好
“+4meansthatc止l∞coddgrow，。++”讹n。thatgrowthendsub-
cultureofcalh,s8婵bet№rl“+++。lrtesnsthat8ubcultureofcallusisbe t
组织在MS+NAA0．05mg／L+ZT0．5mg／L
的培养基上均能稳定的生长，但在分化能力上有明
显差异，白色水渍状的与淡黄色略致密的愈伤组织
在F，⋯FF。和F。4种分化培养基上均无分化能力，
而紫红色疏松的愈伤组织在F，、F：、F。和F。4种培
养基上有产生不定芽的能力。紫红色疏松的愈伤组
织在以上4种培养基上培养一个月后，愈伤组织表
面紫红色加深，质地变得更加致密，并出现绿色芽
点，其中，F。培养基上芽点最多，平均每块愈伤组织
上可产生20多个芽点。冕表3。
裹3不同檀袖生长调节剂组合对愈伤组织分化的影响
Table3 Effectofdifferentphy ohormonescombination
oncallusredlfferent|atlon
嚣—IAA』NAA坐K型T翌ZT—Ac分俐蹦生长状况代号
Fi l．0 1．0 0．5 0．1“ 56 ++
F3 0．02 0．1 O．1％ 68 +++
曼 !：!! !：!!：!墅 !! ±±±±
。++”表示生长较好，可以分化，。十++”表示分化较好I
“+十++”表示分化最好
。++”㈣sth&tgrowthofcallus扭betterandcouldberedi·
fferentiated‘。+++。mesJ3目thatredifferentiatlonofc llusisbet—
tel-‘“++++”mesfi$thatred fferentiationofcallussbest
2．2．2继代天数对愈伤组织分化能力的影响：从表
4可知，继代天数对愈伤组织的分化有显著影响，继
代半个月，愈伤组织生长良好，但不见分化，表现为
疏松状，褐化程度也较小I当继代到1个月，有80％
的愈伤组织块上长出小突起，后变绿，长势较好l当
继代一个半月后，每块愈伤组织上都长满小突起，长
势很好，后期，每块组织上平均长20个丛芽，丛芽长
大后，转移到生根培养基上。当继代2个月或3个月
时，愈伤组织分化能力明显降低，伴随着褐化率的不
断提高，长势也不好，由此可知，继代一个月对愈伤
衰4缝代天数对蠢伤组嘏分化麓力的影响
Table4 Efleetofsubcultur毗daysoncatlus
redlfferentlatloncap city
继代天鼓接种块撤分化块数分化事／％褐化率／“生长状况
15 20 0 0 6 +
30 20 16 80 10 +++
45 20 20 100 10 ++++
60 20 8 40 28 ++
90 20 2 10 30 __—L
‘+”表示可以生长F。++”表示生长较好r可以分化F“+++”
表示分化较好·“++++”表示分化最好
。+”meanBthatcalluscouldgrowl“++”rilesu$thatgrowth
ofcallusisbetterandcouldheredifferentlatedl“+++”meafts
thatredtfferentiationofcallusisbetterI“++++”meansthatred—
iflerentiationofcallusisbest
组织分化最有利。
2．3根的诱导；当归愈伤组织块上长出的绿芽，先转
移到壮苗培养基MS+IAA1．0mg+6-BA
2．0mg+LH150mg／L上，培养半个月后，再转移
到生根培养基l／2MS+IAA1．0mg／L+LH300
mg／L上，生根较容易，2周后，平均每株生根4条，生
根率达100％，苗长势好，未见玻璃化或病态苗出现。
3讨论
当归初代愈伤组织是由颜色、质地和形态无明
显差异的细胞团块形成，经继代后产生白色水渍状、
淡黄色略致密型和紫红色疏松型3种愈伤组织类
型，3种愈伤组织继代培养均能稳定生长，但愈伤组
织的这种多态性不仅表现在外部形态特征上，更重
要的是在分化能力上有明显差异，白色和淡黄色愈
伤组织无分化能力，紫红色愈伤组织具有分化能力，
这种愈伤组织多态性表现在分化能力上的差异与陈
发菊[103关于水母雪莲愈伤组织的多态性研究结果
相似。
植物生长调节剂在愈伤组织增殖与分化中起关
键作用，生长素与细胞分裂素组合使用优于单一生长
调节剂；继代培养时间对当归愈伤组织分化能力有较
明显的影响，随着继代时间的延长，分化频率逐渐下
降。Gautheret[1”认为分化是受特殊物质决定的，分
化能力的丧失是由于在培养过程中耗尽了原有母体
组织中存在的与分化有关的物质。也有研究者认为继
代过程中分化能力的逐渐丧失，是遗传潜能表现的丧
失，植物生长调节剂在分化中有着明显的调节作用，
它们以直接或间接的方式影响基因的活性。分析当归
愈伤组织分化能力随着继代时间的延长而降低，可能
与使用外源植物生长调节剂种类和浓度有关，同对外
源植物生长调节剂的使用引起内源激素的变化也可
万方数据
·1718· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
能直接影响到愈伤组织的分化。
Refetenetsl
[1]TsayHS，HuangHL．Somaticembryoformationandget—
minationfrominilnatuleembryo-derivedsuspension-cultured
cellsofAngelicasinensis(Oily．)Diels[盯．SplantCellR}
port，1998·17：670-674·
[2]ZhangSY．ChengKc．Angelicas nensis(Oily．)Dielsin
∞qtrocultureregeneration，andtheproductionofmedicinal
compounds[A]．InIB¨ijYPS(ed)．BiotechnologyinAgH—
cultureandForettryVol7．Medicinala dAroma“cPlants
[M]．NewYork}Springer，1980．
C3]ZhangJL，MiSHE，YiWJ．Analyzefactorseffectingon
callusproductionofAngel☆asinen#is(Oily．)Diels[刀．Gan一
“Ag—cScid柑‰^”甜(甘肃农业科技)，1995(11)，8-10．
[4]ZhangJL．Callusredifferentiationandplantregenerationof
AngelicaslnenMs(Oliv．)Diels[J]．JGansuAg,lcUniv(甘
肃农业大学学报)，1995，30(4)，293—297．
[5]GuJW．StudiesontissurecultureonAngelicasinensis(O—
liv．)DielsCJ]．ActaPharmSin(药学学报)，1982，17(2J：
131一138．
[6]HuangHL，ChenCC，ChenUc，etal·Studiesontissure
cultureofAngelicasinensis(oliv．)DielsI．Inducationnd
growthofembryogenesiscallusfromimmatureembryoEJ]·
，，Agr／cResChina，1996，45；156—163，
[7]Zhan8SY，ChengKc．Callusinducationandplantletrege—
nerationfromseveralorgansofAngelicasinensis(Oily-)
I)iels[J]．ActaBo|fSin(植物学报)，1982．24(6)：512-518-
L8]ZhangSY，ZhengGC．Inductionofembryogeniccallusand
histocytoligocalstudynembryoiddevelopmentofAngelica
5inensis(Oily，)Diels[J]．ActaBotSin(植物学报)，1986t
28(3)：24124 ．
[9]LpoXF，YangN，ChenXL，eta1．Studyontissureculture
oftheplmatletg rminatedfromseedofAngelicasinensis
(Oily．)Diels[J]．JNorthwestN—nulUniv：NatSci(西北
师范大学学报一自然科学版)t2004(4)；77—60-
[10]ChengFJ，ZhaoDX，YangYG，群a／．Studiesonthemul—
ti—typesofcallusSaus$clreclmedusaanditsre—differentiation
conditions[J]．JCentralChinaNormalUnivtNatSd(华中
师范大学学报：自然科学版)．2000．34(3)}931—335．
[1I]GautheretRJ．InlCelldifferentiationandmorphogenesis
[J]．NorthHollandP洲．CoAm”erdam，1966(3)：66—75．
杯鞘石斛组培苗接种菌根真菌和细菌肥的研究
陈瑞蘸1，施亚琴1，林先贵”，张宁2，汤卫国2
(1．中国科学院南京土壤研究所，江苏南京210008}2．云南金陵植物药业股份有限公司t云南思茅665000)
石斛属DendrobiumSw．中的许多种是名贵的
中药材，以新鲜和干燥的茎人药，具有强阴益精、平
胃气、长肌肉、益智除惊、健身延年的功效，被誉为
“中华九仙草”之首。由于长期采挖，近年来石斛自然
资源接近枯竭，因此被国家列为重点保护的野生药
材品种o]。许多研究者已经意识到了这个问题，纷纷
开展了石斛组培及集约化栽培技术的研究。但是采
用组培方法繁殖，试管苗出瓶后存活率低，在栽培条
件下生长缓慢o]，难以满足市场的需求。
石斛属兰科植物，与兰科菌根真菌形成典型的
共生关系“，真菌菌丝可以侵人到根系细胞内，将获
得的碳水化含物和氮磷等营养物质，提供给石斛，促
进其生长。鉴于石斛与兰科菌根真菌的特殊关系，开
展了石斛组培苗接种菌根真菌和细菌菌肥的研究。
先从野生石斛根系中分离、纯化，获得菌根真菌和根
际有益细菌，再尝试对杯鞘石斛组培苗进行接种，通
过盆栽试验和田间小区试验组培苗生长情况的观
察，寻找合适的菌根真菌和菌肥，希望能够改善石斛
组培苗的根际环境，促进组培苗的生长，提高产量。
1材料与方法
1．1盆栽试验
1．1．1材料：杯鞘石斛D．gratiosissimumRehb．
f．，由中国科学院昆明植物研究所刘劳嫒研究员鉴
定。杯鞘石斛组培苗，由云南金陵植物药业股份有限
公司组培中心提供。组培苗出瓶后炼苗6个月．然后
从云南思茅空运到南京，栽培一个月后按株型大小，
均匀搭配，留待接种。
1．1．2试验设计：盆栽试验共设7种处理，分别是
不接种(cK)}接种混合菌肥1号(由固氮菌N01，磷
细菌P22，钾细菌K25组成)f混合菌肥2号(由
N06，P22，K25组成)；混合菌肥3号(由N02，P05，
K02组成)；接种兰科菌根真菌Dt5、Dr6和Dt8，每
一处理重复3次，共21杯。
1．1．3试验方法：液体振荡培养，分别获得N01、
N02、N06、K02、KZ5、，P05、P22，Dt5，Dr6和Dt8的
菌悬液。固氮菌、磷细菌和钾细菌的菌液稀释1倍
后，按3：lt2的比例混合制成混合菌肥。挖开根系
周围的基质，将混合菌肥或真菌苗液直接接到根系
收藕日期l2005—02—17
幕喜嚣霁：藤嘉墓葛骞妻冀愁篓鑫蒹蓄景冀?望誓茁；酱根方面研究。Tel；(025)86881345z—i-：。n。。@．ss。。．。。。。
t通讯作者韩先贵Telt(025)86881589E—mail：xglin@issas．ac．en
万方数据
当归愈伤组织的增殖与分化培养
作者： 杨宁， 马瑞君， 赵庆芳， 陈学林， 雒晓芳
作者单位： 西北师范大学生命科学学院,甘肃,兰州,730070
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 11次

参考文献(11条)
1.Tsay H S;Huang H L Somatic embryo formation and germination from immature embryo-derived
suspension-cultured cells of Angelica sinensis (Oliv.) Diels[外文期刊] 1998(9)
2.Zhang S Y;Cheng K C Angelica sinensis (Oliv.) Diels in vitro culture regeneration,and the
production of medicinal compounds 1989
3.Zhang J L;Mi S H E;Yi W J Analyze factors effecting on callus production of Angelica sinensis
(Oliv.) Diels 1995(11)
4.Zhang J L Callus redifferentiation and plant regeneration of Angelica sinensis (Oliv.) Diels
1995(04)
5.Gu J W Studies on tissure culture on Angelica sinensis (Oliv.) Diels 1982(02)
6.Huang H L;Chen C C;Chen U C Studies on fissure culture of Angelica sinensis (Oliv.) Diels
I.Inducation and growth of embryogenesis callus from immature embryo 1996
7.Zhang S Y;Cheng K C Callus inducation and plantlet regeneration from several organs of Angelica
sinensis (Oliv.)Diels 1982(06)
8.Zhang S Y;Zheng G C Induction of embryogenic callus and histocytoligocal study on embryoid
development of Angelica sinensis (Oliy.) Diels 1986(03)
9.Luo X F;Yang N;Chen X L Study on tissure culture of the plantlet germinated from seed of Angelica
sinensis(Oliv.) Diels[期刊论文]-西北师范大学学报(自然科学版) 2004(04)
10.Cheng F J;Zhao D X;Yang Y G Studies on the multi-types of callus Saussurea medusa and its re-
differentiation conditions[期刊论文]-华中师范大学学报(自然科学版) 2000(03)
11.Gautheret R J Cell differentiation and morphogenesis 1966(03)

本文读者也读过(6条)
1. 雒晓芳.杨宁.陈学林.丁兰.赵庆芳.马瑞君 当归水培苗的组织培养[期刊论文]-西北师范大学学报(自然科学版)
2004,40(4)
2. 李红军 当归种苗组培繁育技术[期刊论文]-甘肃农业科技2004(9)
3. 魏书琴.WEI Shu-qin 当归组织培养技术研究[期刊论文]-安徽农业科学2010,38(31)
4. 胡益明.甘烦远.彭丽萍.郝小江 药用植物粉花绣线菊的组织培养的建立与快速繁殖研究[期刊论文]-中草药
2001,32(11)
5. 雒晓芳 药用植物当归的组织培养研究[学位论文]2005
6. 王戈戎 喜树愈伤组织形成过程的细胞学研究[学位论文]2006

引证文献(12条)
1.雒晓芳.董开忠.牛锋.陈丽华.王冬梅 当归愈伤组织褐化前后生理生化的研究[期刊论文]-中国酿造 2009(5)
2.何雪娇.赖钟雄 培养基类型、碳源对朱砂根愈伤组织生长的影响[期刊论文]-福建热作科技 2010(4)
3.何雪娇.赖钟雄 培养基类型、碳源对朱砂根愈伤组织生长的影响[期刊论文]-福建热作科技 2010(4)
4.雒晓芳 不同处理方法对当归种子萌发率的影响[期刊论文]-西北民族大学学报（自然科学版） 2008(2)
5.李刚.王乃亮.罗娘娇.马瑞君 超声波处理对当归种子萌发及活力的影响[期刊论文]-西北师范大学学报（自然科
学版） 2007(3)
6.沙红.唐芳.高燕.张瑞麟 大红红景天愈伤组织的诱导及植株再生体系的建立[期刊论文]-新疆农业大学学报
2008(3)
7.许文一.高洋.马依妮.孙慧超.姜长阳 水芹的组织培养及快速繁殖研究[期刊论文]-安徽农业科学 2008(14)
8.李森.蔺博超.吕平.佟少明.姜长阳 珊瑚菜组织的培养及无性系的建立[期刊论文]-哈尔滨师范大学自然科学学报
2008(5)
9.高杰.陈小华.高翔.孙军 孜然芹下胚轴胚性愈伤组织的诱导及再生植株的研究[期刊论文]-新疆农业科学
2007(6)
10.李增红.张博.陈爱萍.罗玉鹏 不同培养基对苜蓿花药愈伤组织继代和分化的影响[期刊论文]-新疆农业科学
2008(5)
11.朱慧.马瑞君.吴双桃.林金哲.廖宜英 当归根际土对其种子萌发和幼苗生长的影响[期刊论文]-生态学杂志
2009(5)
12.张尚智.刘玲玲.杨文玺.贺莉萍.韩黎明 当归生物技术的研究现状与展望[期刊论文]-西北药学杂志 2012(5)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200511047.aspx