全 文 ：羟基红花黄色素 A 抗氧化作用的研究
金　鸣, 李金荣, 吴　伟Ξ
(北京市心肺血管疾病研究所2首都医科大学附属北京安贞医院 药理研究室, 北京　100029)
　　红花 Ca rtham us tinctorius L. 为活血化瘀药,
可活血通经、化瘀止痛, 临床上主要以水煎液入药。
组织缺血2再灌注等过程中, 自由基引发的氧化反应
为许多血液循环障碍疾病的重要损伤机制。红花水
提液可
化
清除羟自由基, 抑制小鼠肝匀浆脂质过氧
[1 ]。
A
羟基红花黄色素 A (hydroxysaff lo r yellow
, H S
可
YA ) 为红花主要水溶性活血化瘀有效成分,
抑制
板
血小板激活因子诱发的血小板聚集, 为血小
激活
种
因子受体拮抗药[2 ]。本实验观察 H SYA 的多
抗氧
1
化作用, 以探讨红花活血化瘀作用机制。
　材
　
料
　硫
国
代巴比妥酸 ( th iobarb itu ric acid, TBA ) 为
产生
均
物试剂经活性炭脱色、重结晶处理, 其他试剂
为国
色
产分析纯。H SYA 为本研究室以大孔树脂柱
谱及
得
凝胶柱色谱法从红花水提取液中分离制
[3 ]
, H
于
PL C 面积归一化法分析结果表明其纯度大
95%。755B 型紫外可见分光光度计。雄性昆明种
小鼠, 为本院动物室提供; 雄性新西兰家兔, 为中国
药品生物制品检定所提供。
2　方法
211　H SYA 清除羟自由基作用: 参考文献[4 ]方法,
以邻二氮菲- Fe2+ 氧化法检测 H SYA 清除 H 2O 2ö
Fe2+ 体系产生的羟自由基。
212　H SYA 抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化作用: 小
鼠处死后取肝脏, 洗净血污, 剪碎, 以生理盐水制成
3% 匀浆, 取匀浆 013 mL 加入各种试剂, 反应液总
体积为 0167 mL , 分别含不同浓度 H SYA 及 H 2O 2
0. 0024% , FeSO 4 0. 03 mmo löL , 37 ℃ 保温 60 m in,
加入 1 mL 20% 三氯醋酸及 1 mL 0. 67% TBA , 90
℃ 保温 15 m in 后水浴冷却, 1 500×g 离心 20
m in, 取上清液于 532 nm 波长处测定吸光度 (A )
值, 以蒸馏水代替 TBA 的平行试验管为各试验管
的比色空白。以蒸馏水代替H SYA 溶液的反应管为
对照管, 计算 H SYA 对脂质过氧化抑制率。
I 1= (A 对照- A HSYA ) öA 对照×100%
213　H SYA 抑制羟自由基引发的红细胞膜破裂实
验: 兔耳正中动脉取血, A CD (枸橼酸钠 85 mmo lö
L , 枸橼酸 71 mmo löL , 葡萄糖 110 mmo löL ) 与全
1血以 1∶6 (体积比) 抗凝。1 500×g 离心 0 m in,
即去除血浆, 加生理盐水至抗凝血 5 倍体积 得红细
0胞混悬液。各反应管加入此红细胞混悬液 12 mL
别及其他试剂, 反应液总体积为 1175 mL , 分 含不同
1浓度的 H SYA 及 H 2O 2 1137% , FeSO 4 11 4 mmo lö
振L 及 pH 714 N a2H PO 4 150 mmo löL , 37 ℃ 摇 60
清m in 后取出, 1 500×g 离心 10 m in, 取上 液测定
代血红蛋白最大吸光度值 (A 500) , 以蒸馏水 替反应
馏体系中的全血为各反应管比色空白, 以蒸 水代替
YH SYA 溶液的反应管为对照管, 计算 H S A 对红
2
细胞膜破裂抑制率。
I 2= (A 对照- A HSYA ) öA 对照×100%14 :　统计处理 3数据均为 的个平行试验管 x ±s,
均以 SPSS 1010 软件用方差分析法进行统计检验。
3　结果
311　H SYA 清除羟自由基的作用: 见表 1。结果表
明, H SYA 清除羟自由基的作用呈明显量效关系。
表 1　HSYA 清除羟自由基的作用 (x±s, n= 3)
Table 1　Scavenge effect of HSYA on hydroxyl
rad ica l (x±s, n= 3)
组　别
H SYA 浓度ö(mmo l·L - 1) A 536 羟自由基清除率ö%
H 2O 01816±01007 -
H 2O 2öFe2+ + H 2O 01554±01002 -
H 2O 2öFe2+ + H SYA 2140 01571±010053 615
3136 01638±010043 3 3 3211
4132 01695±010093 3 3 5318
5128 01755±010083 3 3 7617
6124 01803±010193 3 3 9510
　　与H 2O 2öFe2+ + H 2O 管比较: 3 P < 0105　3 3 3 P < 01001
　　3 P < 0105　3 3 3 P < 01001 vs H 2O 2öFe2+ + H 2O tube
312　H SYA 抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化的作用:
·566·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003210217
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30171146)
作者简介: 金　鸣 (1957—) , 男, 北京人, 北京市心肺血管疾病研究所2首都医科大学附属北京安贞医院药理研究室主任, 研究员, 硕士生
导师, 1992 年 7 月博士毕业于北京中医药大学中西医结合生化专业, 研究方向为中药红花活血化瘀的作用机制。
T el: (010) 6441243122308　E2m ail: jinzang@public3. b ta. net. cn.
见表 2。结果表明, 离体条件下 H SYA 抑制小鼠肝
匀浆脂质过氧化的作用呈明显的量效关系。
表 2　HSYA 对小鼠肝匀浆脂质过氧化的
抑制作用 (x±s, n= 3)
Table 2　Inh ibitory effect of HSYA on l iver hemogenate
l ip id perox idation in m ice (x±s, n= 3)
组别 浓度ö(Λmo l·L - 1) A 532 I 1ö%
对照 - 　 11856±01056 -
H SYA 179 11808±01056 216
358 11573±010723 3 3 1512
716 11216±010323 3 3 3415
1 073 11036±010103 3 3 4412
1 431 01930±010233 3 3 4919
1 789 01808±010393 3 3 5615
　　与对照管比较: 3 3 3 P < 01001
　　3 3 3 P < 01001 vs con tro l tube
313　H SYA 抑制羟自由基引发的红细胞膜破裂作
用: 见表 3。结果表明, 离体条件下 H SYA 抑制羟自
由基诱发红细胞膜破裂的作用呈明显量效关系。
表 3　HSYA 对羟自由基引发的红细胞膜
破裂的抑制作用 (x±s, n= 3)
Table 3　Inh ibitory effect of HSYA on hemo-
cytocatheresis a ttenuation induced
by hydroxyl rad ica l (x±s, n= 3)
组别 浓度ö(Λmo l·L - 1) A 500 I 2ö%
对照 - 01445±01016 -
H SYA 27410 01411±01018 716
41111 01367±010383 1715
54811 01317±010233 3 2818
68511 01302±010713 3 3 3211
　　与对照管比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001 vs con tro l tube
4　讨论
　　临床上红花以水煎液入药, 可治疗多种血液循
环障碍性心脑血管疾病。在组织缺血2再灌注、炎症
反应等过程中, 自由基反应为一重要的损伤机制。红
花水提液可清除自由基, 抑制脂质过氧化反应[1 ]。
H SYA 为红花主要水溶性有效成分, 其抗氧化作用
尚未见报道。
　　H 2O 2öFe2+ 体系可通过 Fen ton 反应产生羟自
由基, 引发脂质过氧化、蛋白质交联等反应, 造成细
胞膜破裂可导致组织坏死等后果。本实验结果表明
H SYA 可清除羟自由基、抑制脂质过氧化反应, 保
护细胞膜, 提示其为红花水溶性抗氧化有效成分。
H SYA 为查尔酮类结构, 其分子中含多个酚羟基,
其抗氧化药效可能与这些酚羟基的作用有关。在多
种血瘀病症中, 自由基反应对加剧血液循环障碍起
了重要的作用, 而红花有效成分 H SYA 的抗氧化效
应对其活血化瘀的作用具一定的贡献。
红花为常用活血化瘀药, 具抗血栓、抗心肌缺
血、改善微循环、抗氧化等多方面的药理作用。
H SYA 在红花中含量较高, 溶解度好, 在此基础上
开发新型心血管药物, 可望获得明显的经济与社会
效益。本研究对于进一步阐明红花活血化瘀作用机
制, 指导红花及其制剂的临床应用具重要的意义。
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1996, 23 (6) : 55325551
清开灵有效组份对局灶性脑缺血大鼠脑组织
细胞间黏附分子表达的影响
徐丽荣1, 马世彬2, 李澎涛3, 唐启盛4Ξ
(11 北京中医药大学 中医内科, 北京　100029; 21 泰山医学院 免疫教研室, 山东 泰安　271000;
31 北京中医药大学基础医学院, 北京　100029; 41 北京中医药大学东方医院, 北京　100078)
　　脑缺血后脑组织的炎症损伤反应因其预后差, 死亡率高, 而日益受到人们的关注, 已成为该领域的
·666· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209225
基金项目: 国家重点基础研究发展规划项目 (973) 课题 (G1999054404)
作者简介: 徐丽荣 (1972—) , 女, 黑龙江人, 讲师, 现为北京中医药大学 2001 级中医内科脑病专业博士研究生, 主要从事中药对缺血性中
风干预作用的实验研究。E2m ail: m axu lirong@yahoo. com