全 文 ：用热蒸馏水溶解 ,乙酸乙酯多次萃取 ,回收乙酸乙
酯 ,残留物甲醇溶解定容 ;②甲醇超声提取 ;③甲醇
回流提取。经实验发现 ,方法①不仅过程繁琐费时 ,
且目标成分咖啡酸提取不完全 ,所测 1998年西蒙Ⅰ
号叶中咖啡酸的含量仅为 0. 001 8% ;方法②所得提
取液中 ,所测 1997年西蒙Ⅰ 号叶中咖啡酸的含量仅
为 0. 007 4% ,明显低 ;方法③操作简便 ,咖啡酸的提
取较完全。
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薄层扫描法测定木瓜中齐墩果酸的含量
都述虎 ,饶金华 ,耿武松
(安徽省医学科学研究所 ,安徽 合肥　 230061)
摘　要: 目的　建立木瓜中齐墩果酸的含量测定方法。方法　采用双波长薄层扫描法 ,以氯仿 -甲醇 ( 40∶ 1)为展开
剂 , 10%硫酸乙醇液为显色剂 ,测定波长为 λS= 640 nm,λR= 535 nm。 结果　木瓜中其他成分对齐墩果酸的测定无
干扰 ,线性范围为 2. 272～ 11. 360μg ,平均回收率为 98. 29% , RSD为 2. 07%。 结论　该方法操作简便、准确 ,可用
于木瓜的质量监控。
关键词: 木瓜 ;齐墩果酸 ;薄层扫描法
中图分类号: R286. 02; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 01 0035 03
Determination of oleanolic acid inFructus Chaenomelis by TLCS
DU Shu-hu, RAO Jin-hua, GEN G Wu-song
( Anhui Institut e o f Medical Sciences, Hefei 230061, China )
Key words: Fructus Chaenomelis; oleanlic acid; TLCS
　　木瓜为蔷薇科植物皱皮木瓜 Chaenomeles
speciosa ( Sw eet) Nakai的干燥近成熟果实。我国大
部分地区均有栽培 ,其中产于安徽宣州的称宣木瓜 ,
品质较好 ,为道地中药材 ,在古代以充上贡之品。木
瓜主要化学成分为有机酸 (齐墩果酸、苹果酸、酒石
酸、柠檬酸、抗坏血酸、反丁烯二酸、乙酰熊果酸、 3-
O-乙酰坡模醇酸、桦木酸等 )、氨基酸、 10-廿九烷醇、
β -甾醇、维生素 C、皂苷、黄酮类、鞣质等 ,另外种子
含氢氰酸 [1～ 3 ]。其中 ,齐墩果酸有消炎抑菌 ,降转氨
酶作用。 对四氯化碳引起的大鼠急性肝损伤有明显
的保护作用 ,还有促进肝细胞再生、防止肝硬化、强
心、利尿、升白、降血脂、降血糖、增强有机体免疫功
能、抑制变态反应等作用 [4 ]。且在药材中主要以单体
形式存在。目前木瓜中齐墩果酸的含量测定多采用
比色法 [5 ]。 本实验采用薄层扫描法测定了不同产地
的木瓜中齐墩果酸的含量 ,为控制该药质量提供可
行依据。
1　仪器与试药
·35·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 1期 2003年 1月
收稿日期: 2002-02-25基金项目:安徽省“十五”重大科技专项资助课题 ( Z064004) ;安徽省优秀青年科技基金 (皖科基 [2001 ]02-23)作者简介:都述虎 ( 1962— ) ,男 ,副研究员 ,博士生 , 1987年毕业于安徽中医学院药学专业 , 1998年获中国药科大学药物分析专业硕士学位 , 2001年至今攻读中国药科大学药物分析专业博士学位 ,现在安徽省医学科学研究所药物化学研究室工作 ,从事天然药物中有效成分的提取分离和检测工作 ,发表论文 20余篇。 Tel: ( 0551) 2828461　 E-mai l: sh uhudu l@ yah oo. com. cn
CS-930型薄层扫描仪 (日本岛津 ) ,定量毛细管
(美国 Drummond) ,百万分之一电子天平 (美国 PE
公司 AD-2型 ) , HSG薄层板 (山东烟台化工所试验
厂 )。齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批
号: 0709-9803,供含量测定用 ) ;木瓜药材购自安徽
宣州、四川胜定、湖北长阳和安徽毫州中药材市场 ,
经安徽中医学院金传山副教授鉴定分别为宣木瓜
(皱皮木瓜 )Chaenomeles speciosa ( Sweet ) Nakai、川
木 瓜 (毛 叶 木 瓜 ) C. cathayensis ( Hemsl. )
Sch neid.、资丘 木瓜 (毛叶 木 瓜 ) C. lagenaria
( Loisel. ) Koidz.。 所用试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　药材的水分测定: 取供试品 2～ 5 g ,平铺于干
燥至恒重的扁形称瓶中 ,厚度不超过 10 mm ,精密
称定 ,打开瓶盖在 100℃～ 105℃干燥 5 h ,将瓶盖
盖好 ,移置干燥器中 ,冷却 30 min,精密称定质量 ,
再在上述温度干燥 1 h,冷却 ,称定质量 ,至连续两
次结果的差异不超过 5 mg为止。根据减失的质量 ,
计算供试品中含水分的百分数 ,结果见表 1。
表 1　木瓜药材的水分测定
Table 1　 Determinat ion of moisture inFructus Chaenomelis
品　种　　 含水量 /%
宣木瓜　　 12. 65
川木瓜　　 11. 56
资丘木瓜　 12. 07
木瓜 (统货 ) 10. 42
2. 2　含量测定
2. 2. 1　色谱条件: 薄层板: 高效硅胶 G薄层板 ,使
用前于 105℃活化 30 min;展开剂: 氯仿 -甲醇 ( 40∶
1) ,上行展开 10 cm;显色剂: 10%硫酸乙醇溶液。浸
入 ,立即取出 ,在 105℃加热至斑点清晰 ,显相同的
暗褐色 ,取出在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板 ,周
围用胶布固定。
2. 2. 2　对照品溶液的制备: 取齐墩果酸对照品 ,加
无水乙醇制成每毫升含 2. 0 mg齐墩果酸的溶液 ,
作为对照品溶液。
2. 2. 3　供试品溶液的制备:取本品粉末约 1. 0 g,精
密称定 ,置 25 mL容量瓶中 ,加无水乙醇 20 mL,超
声 30 min,放冷 ,添加少量无水乙醇至刻度 ,摇匀 ,
滤过 ,取续滤液 ,作为供试品溶液。
2. 2. 4　扫描条件: λR= 640 nm,λS= 535 nm , Sx=
3;狭缝: 1. 2 mm× 1. 2 mm,反射法线性扫描 ,光源
W灯。
2. 2. 5　标准曲线的制备: 分别吸取对照品溶液 1,
2, 3, 4, 5μL点样 ,以上述条件扫描测定。经过计算
机程序处理得回归方程 Y= 11 519. 70X+ 7 591. 21
( Y: 峰面积积分值 , X: 齐墩果酸质量数 ) , r=
0. 997 7,表明齐墩果酸的量在 2. 272～ 11. 360μg
与峰面积呈良好线性关系。
2. 2. 6　稳定性试验: 取供试品溶液 3μL,点于薄层
板上 ,展开 ,晾干 ,每隔 30 min测定一次 ,其面积积
分值的 RSD= 2. 26% (n= 5)。结果表明斑点在所测
时间 2 h内基本稳定。
2. 2. 7　精密度试验: 同板精密度试验: 精密吸取对
照品液 3μL,在同一薄层板上点 5个相同量的点 ,
依法测定各斑点峰面积 ,其面积积分值 RSD=
1. 19% (n= 5)。
异板精密度试验: 精密吸取供试品液 3μL,分
别点于 5块不同薄层板上 ,依法测定含量 ,其含量的
RSD= 2. 08% (n= 5)。
2. 2. 8　重现性试验: 取木瓜粉末样品 5份 ,依
2. 2. 10项下方法提取、点样、展开、扫描测定 ,计算
含量 ,其含量的 RSD= 1. 29% (n= 5)。
2. 2. 9　加样回收率试验: 采用加样回收法 ,取木瓜
粉末样品 5份 ,每份约 0. 5 g ,精密称定 ,分别精密加
入齐墩果酸对照品 ,适量 2. 2. 10项下方法提取、测
定 ,计算回收率 ,结果平均回收率为 98. 29% ,
RSD= 2. 07% (n= 5)。
2. 2. 10　样品测定: 取不同产地的木瓜粉末各 2份 ,
按 2. 2. 3项下方法制备供试品液 ,精密吸取供试品
溶液 3μL,齐墩果酸对照品溶液 1, 3μL,分别交叉
点于同一硅胶 G薄层板上 ,展开 ,晾干 ,显色 ,薄层
色谱见图 1。扫描 ,测定积分值 ,外标法计算含量 ,结
果见表 2。
1-宣木瓜　 2-川木瓜　 3-资丘木瓜
4-木瓜 (统货 )　 5-齐墩果酸对照品
1-Chaenomeles sp eciosa　 2-C . cath ayensis　 3-C . la genar ia
4-Fructus Chaenomeli s　 5-olean olic acid
图 1　 TLC图谱
Fig. 1　 Chromatogram of TLC
3　讨论
·36· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 1期 2003年 1月
3. 1　不同产地的木瓜中齐墩果酸的含量差别很大 ,
其中以宣木瓜中齐墩果酸含量最高 ;另外 ,同一产地
表 2　不同产地木瓜中齐墩果酸的含量测定
Table 2　 Determinat ion of oleanolic acid in Fructus
Chaenomelis f rom dif ferent habitats
品种 齐墩果酸含量 /%未过筛粗粉 粗粉 ( 24目 ) 细粉 ( 65目 )
宣木瓜　　 0. 92 1. 95 2. 37
川木瓜　　 1. 72 2. 01 2. 11
资丘木瓜　 0. 46 0. 46 0. 56
木瓜 (统货 ) 1. 35 1. 96 2. 30
不同粒度木瓜中 ,齐墩果酸的含量有很大的差异 ,因
此测定时 ,必须注明药材来源 ,并将药材粉碎成细
粉 ,以保证制剂成品的质量。
3. 2　显色时为了减少喷雾影响 ,采用将展开晾干后
的层析板浸入 10%硫酸乙醇液中 ,立即取出 ,于 105
℃烘至斑点显色清晰 ,则显色剂对色谱的影响较少。
同时注意掌握烘烤时间 ,过长或过短对结果均有一
定的影响。
3. 3　对含齐墩果酸成分的药材进行含量测定的文
献报道较多 ,但对木瓜采用薄层色谱扫描法进行齐
墩果酸的含量测定尚未见报道。本法简便、快速、分
离度和重现性较好 ,可为药典建立药材原料的质量
标准提供依据。
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超临界 CO2脱除银杏叶提取物中酚酸的研究
侯　峰 ,华文俊 ,姚煜东
(美晨集团股份有限公司 ,广东 广州　 510075)
　　银杏叶提取物 ( EGB)主要含黄酮、内酯两大活
性部位。 自 20世纪 70年代以来 ,国内外学者对
EGB的药理作用进行了大量研究。 据报道 EGB可
扩张冠脉血管 ,增加脑血流量 ,拮抗 PAF,治疗血管
老化 ,脑血管供血不足所致的多种疾病 [1～ 3 ]。银杏酚
酸是 EGB中的有害成分 ,可能引起过敏、突变等中
毒现象。在国际通过的 EGB质量指标中 ,要求酚酸
含量小于 5μg /g[4 ]。 目前 ,在国内市场上出售的
EGB粉末中一般酚酸含量都在 300～ 1 500μg /g。
因此要达到要求 ,就需要用有机溶剂萃取的方法去
除酚酸 ,但是这种方法存在步骤多 ,工艺复杂 ,生产
周期长等缺点。
超临界 CO2萃取技术是一种新型分离技术 ,具
有高效、无毒、萃取率高、选择性好等优点 ,在国家中
药现代化的产业开发中 ,此项技术得到越来越多厂
家的重视。经我们实验研究发现利用超临界 CO2萃
取技术可以有效脱除 EGB中的银杏酚酸 ,并且银杏
黄酮、内酯两大活性部位几乎没有损失。
1　材料和仪器
EGB:江苏产 EGB粉末 ,其中含黄酮 26% ,内
酯 8% ,酚酸含量 1 100μg /g。
SFE设备为本单位自行研制并制造的 1 L超临
界设备。 Varian高效液相色谱仪。
槲皮素对照品 ,银杏内酯 A( GA)、银杏内酯 B
( GB)、银杏内酯 C( GC)和白果内酯 ( BB)的对照品
为中国药品生物制品检定所出品 ;白果酸对照品含
量大于 90% ,贵州大学出品 ;溶剂均为分析纯。
2　方法和结果
2. 1　实验方法:取 100 g EGB粉末 ,倒入 1 L萃取
釜的吊篮中。然后打开萃取釜进气阀门 ,给萃取釜加
入 CO2 ,开始萃取 ,萃取釜压力设定为 20 MPa,萃取
温度 60℃ ,流量 9 L /h,解析压力 6 M Pa,解析温度
50℃ (两级解析釜设置的条件一样 )。当压力达到 20
M Pa后 ,启动夹带剂泵 ,打入 600 mL混合溶剂 A。
·37·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 1期 2003年 1月
收稿日期: 2002-04-27作者简介:侯　峰 ( 1976— ) ,男 ,湖北安陆人 ,工程师 , 1998年毕业于西北大学生物化工专业 ,现从事新药的开发工作。