全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1395·
山麦冬的HPLC／ESI—MS．特征指纹图谱研究
韩凤梅，李 紫，蔡敏，张玲，陈 勇+
(湖北大学中药生物技术省重点实验室，湖北武汉430062)
摘要：目的研究山麦冬Liriopespicata甲醇提取物中的物质组成情况，建立山麦冬HPI。C／ESI—MS特征指纹
图谱。方法 山麦冬用甲醇超声提取，提取液经C。。SPE固相萃取柱除去多糖成分后，用高效液相色谱一电喷雾离子
阱质谱(HPLC／ESI—MS)分析提取物中的物质组成。结果山麦冬甲醇提取物色谱图中有17个共有峰的重现性
与精密度的RSD<5％，建议以此为基础制作山麦冬特征指纹图谱。结论应用HPLC／ESI—MS技术建立的山麦
冬指纹图谱特征性强、重现性较好，可用于山麦冬的品质评价与品种鉴别。
关键词：湖北麦冬；高效液相色谱一电喷雾离子阱质谱；指纹图谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)09—1395—03
HPLC／ESI—MSfingerprintofRadixLiriopes
HANFeng—mei，LIZi，CAIMin，ZHANGLing，CHENYong
(Bio—TechnologyofTraditionalChineseMedicineKeyLaboratoryofHubeiProvince，
HubeiUniversity，Wuhan430062，China)
Abstract：ObjectiveTostudythecompositionsofmethan01extractsfromRadixLiriopes(RL)and
establishthec aracteristicfingerprintofRLbyHPLC／ESI—MS．MethodsFirst．thesamplesofRI。were
extractedbyultra—sonicationusingmethanolasextractingsolvent．Thenthem than01extractsofRI。were
pretreatedbyAICHROMTMRelizSilC18columntoremovep01ysaccharides．Finally，thecleanedsamples
wereinjectedintoahighperformanceliquidhromatographycoupledwithelectrospray—ionizationiontrap
massspectrometryelectrospraytoanalyseth ircomposistions．ResultsInthechromatogramofthe
methanolextractsfromRI。，therewere17commonpeakswiththeRSDofreproducibilityandprecision
Iessthan5％．ConclusionThecharacteristicfingerprintoftheRLestablishedbyHPLC／ESI—MStechnol—
ogyischaracteristicandreproducible，whichcouldbeappliedtothequalityassessmentandvarietyidentifi—
cationofRLSpicate．
Keywords：RadixLimopes(RL)；HPLC／ESI—MS；fingerprint
山麦冬为百合科植物湖北麦冬Liriopes icata
(Thunb．)Lour．var．proliferaY T．Ma和短葶
山麦冬L．muscari(Decne．)Bailey的干燥块根，主
要成分有三萜皂苷、多糖及异黄酮等。由于受产地、
气候、生态环境以及采集时间等因素的影响，不同来
源山麦冬药材中所含主要成分差异较大。因此，仅针
对其中某个有效成分进行定性或定量分析并不能有
效控制药材的质量。关于山麦冬、麦冬皂苷类成分提
取[1’2]、结构分析[3~5]及定量测定[6’7]研究已有许多
文献报道，但未见有关山麦冬皂苷类成分指纹图谱
研究的报道。高效液相色谱一质谱联用技术集液相色
谱分离能力强和质谱灵敏度高、定性能力强于～体，
是用于中药活性成分研究的最有效的分析手段之
一[8]。笔者曾研究了麦冬皂苷提取物的电喷雾质谱
特征图谱[9]，本实验应用高效液相色谱一电喷雾离子
阱质谱(HPLC／ESI—MS)研究了山麦冬药材甲醇
提取物指纹图谱，该指纹图谱特征性强、重现性良
好，可用于山麦冬药材的鉴别及质量评价。
1仪器，材料与试剂
美国Finnigan公司LCQ叫。型液质联用仪，包
括ESI(电喷雾电离)源，TSP4000泵及TSP
AS3000自动进样器，Highchem公司MassFron～
tier1．0质谱解析软件。
1～10号药材来源分别为：1号对照药材，中国
药品生物制品检定所，批号1136—200001；2号药材
2000年3月采于襄阳欧庙山麦冬药材GAP种植基
收稿日期：2004—11一05
基金项目：科技部“十五”攻关项目(2001BA701A01)；湖北省青年杰出人才科学基金项目(2002AC004)
作者简介：韩凤梅(1967一)，女，天津市人，副教授，理学学士，研究方向为药物分析。E—mail：cbenhanzz@163．corn
*通讯作者陈勇Tel／Fax：(027)88663590E—mail：cyl01610@npc．gov．ca
万方数据
·1396· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
地；3～10号药材于2001年11月采于襄阳欧庙，地
点分别为欧庙张东一组、欧庙李垴村一组、欧庙张东
三组、欧庙桃圆村一组、欧庙肖州村二组、欧庙肖州
村四组、欧庙大洲村二组和欧庙李湾村二组。上述药
材经本院植物分类学王万贤教授鉴定为湖北麦冬
L．spicata(Thunb．)Lour．vflr．proliferaY．T．
Ma。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1 测定条件：色谱条件：AICHROMTMRelizSil
C18色谱柱(150mm×2．1mm，5um)，流动相10
mmol／L乙酸铵一乙腈(60rain内乙腈体积分数变
化为25％一60％)，体积流量0．2mL／min，进样量
15弘L。质谱条件i扫描范围m／z300～1200．离子
源喷射电压4．5kV，毛细管电压一45V，毛细管温
度230‘C，鞘气(N：)流速50个单位，辅助气(N。)
流速10个单位，负离子检测。
2．2供试液的制备：精密称取山麦冬对照药材粉末
0．3g于离心管中，超声提取2次(每次15rain)，每
次加甲醇溶液5mL，离心取上清液，合并两次提取
液并用甲醇定容至10mI。。取甲醇提取液1mL稀
释至20mL后，加压通过已活化的C。。SPE固相萃
取柱，先用10mI。水洗除去多糖等成分，后用甲醇
1mL洗脱。收集甲醇洗脱液作为山麦冬对照药材供
试液。其他产地药材同法制备。在计算各峰强度时，
将各样品中每个峰的峰面积除以对照药材中相应峰
的峰面积，得到的比值作为样品中该峰的相对峰面
积(Ar)。
2．3供试液HPLC／ESI—MS特征图谱：分别取各
山麦冬药材供试液15弘L进样分析，对照药材和2
号药材的色谱图见图1。取对照品药材供试液连续
进样5次，在峰强大于10％的色谱峰中，保留时间
(￡。)及Ar的RSD均小于5％的共有峰有17个。
分析5份平行提取的山麦冬对照药材供试液，上述
17个共有峰的琼及Ar的RSD亦小于5％。取空白
溶剂15肚L，在同样条件下进样分析，没有发现上述
17个共有峰。样1(对照药材)中17个共有峰的实
验数据见表1。
3讨论
3．1 共有峰初步定性分析：根据山麦冬样品的
ESI—MS负离子全扫描质谱和源碰撞诱导解离
12
ll
▲．k批。I扎州批 、控14h15^17。
0 5 10 J5 20 25 30 35 40 45 50 55 60
t|min
图1 山麦冬对照药材(A)和2号药材(B)的色谱图
Fig．1ChromatogramsofRLreferencesubstances(A)
andNo．2sample(B)
表1 对照药材供试液中17个共有峰特性
Table1 Characteristicsof17commonpeaksofRLinreferencesubstances
序号 m屈
精密度 重现性
tR／min RSD／％ Ar RSD／％tR／minRSD／％ Ar RSD／％
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1397·
(sourcecollision—induceddissociative，SCID)实传统分类工作，将它用于中药指纹图谱分析，不仅可
验，上述17个共有峰均为准分子离子峰[M—H3一。鉴别出药材的真伪，而且可以对同品种不同产地的
进一步进行MS—MS分析表明，除了m／z655．9峰 药材进行品质评价。本实验选择多元统计分析中的
外。各子离子峰均是母离子峰失去糖基的碎片峰，故 聚类分析方法对各共有峰Ar实验数据(相应的共
初步推断上述共有成分为山麦冬皂苷成分。其中 有峰峰面积数据见表2)进行分析，采用Euclidean
m／z721．5、853．5、895．4和1047．5与文献报距离法计算样品问的距离，用Ward方法进行系统
道[9．101的山麦冬皂苷成分的相对分子质量及质谱碎聚类，结果见图2。聚类图中纵坐标是样品，横坐标
裂规律相同(分别为麦冬皂苷A、薯蓣皂苷元一1一。一 表示样品间的相似程度。以1号山麦冬对照药材为
B一吡喃夫糖一3一O—a一吡喃鼠李糖苷、25(S)一鲁斯可皂标准，2～10号样品与之比较进行品质评价，连接它
苷元一1一O{乜一吡喃鼠李糖基(1—2)[8一吡喃木糖基们的纵向线越短，说明这两样品间的差距越小。从该
(1—3)]一B一吡喃夫糖苷和薯蓣皂苷元一3一O—a一吡喃鼠聚类图中可以得到以下结论：样1为对照药材，样2
李糖苷一(1—2)]一a—L一吡喃鼠李糖苷一(1—3)一口一吡喃与之距离最短，说明样2药材与对照药材最相似；样
葡萄糖苷)。因此，可以选择上述17个共有峰作为山 4、8、10可聚为一类，与对照药材1的相似性较大；
麦冬HPLC／ESI—MS指纹图谱的主要分析对象。样3、5、6、7、9可聚为一类，其药材均采集于11
3．2指纹图谱的聚类分析：聚类分析法可通过数学 月，说明采集时间相同的药材具有一定程度的相
的方法来替代人们主要靠经验和专业知识来进行的 似性。
表2 2～10号山麦冬药材17个共有峰的相对峰面积
Table2 Peakareaof17commonpeaksofNo．2--10RLsamples
样品
相对峰面积(Ar)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 i5 16 17
1．00
0．64
1．25
O．95
0．91
1．58
1．96
O．72
2．26
1．00
0．96
3．34
1．40
1．32
2．13
2．2l
2．05
2．94
11 1：!! !：!! !：!! !：!! !：!j !：!! !：!!!：!! !：!! i：!! !：!! !：!! !：!! !：!! !：!! !：!! !：!1
0 5 10 15 20 25+。⋯一一+一⋯一+。一一+。～一～。 [4]
圈2样品的聚类分析图
Fig．2Dendrogramofsampleclusteringanalysis
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万方数据
山麦冬的HPLC/ESI-MS特征指纹图谱研究
作者： 韩凤梅， 李紫， 蔡敏， 张玲， 陈勇， HAN Feng-mei， LI Zi， CAI Min， ZHANG Ling
， CHEN Yong
作者单位： 湖北大学,中药生物技术省重点实验室,湖北,武汉,430062
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(9)
被引用次数： 14次

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