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荷叶中荷叶碱提取工艺的研究
赵　骏 ,王洪章 ,齐喜红 ,高敏燕 ,高　钊
(天津中医学院 ,天津　 300193)
　　荷叶为 睡莲科植物 莲 Nelumbo nuci fera
Gaertn. 的干燥叶 ,具有清热利湿 ,升发清阳 ,降脂
减肥、止血散瘀等作用。 《本草纲目》载: “荷叶服之 ,
令人瘦劣 ,单服可以消阳水浮肿之气。”今用荷叶配
方生产降脂减肥茶者颇多。据报道 ,将荷叶用乙醇回
流提取后制成浸膏片具有良好的调血脂作用。 国外
尤其是日本关于荷叶化学成分的研究报道较多 ,主
要是生物碱类、黄酮类、鞣质类成分。 我国的荷叶资
源丰富 ,价廉易得 ,为可开发的天然药用植物资源。
本实验以荷叶生物碱为指标 ,利用不同的溶媒采用
加热回流法和超声提取 ,大孔吸附树脂纯化来优化
提取工艺。
1　仪器、试剂和材料
　　 DU— 530紫外可见分光光度计 (美国 Beck-
man公司 ) ,电子天平 (上海天平仪器厂 )。试剂均为
分析纯。荷叶购于天津中医学院门诊部 ,经本院药用
植物教研室鉴定为睡莲科植物莲 N . nuci fera
Gaertn. 的干燥叶片。荷叶碱对照品 (山东医学科学
院药物研究所提供 )。
2　实验方法
2. 1　提取荷叶中总生物碱的正交设计:对不同溶媒
加热回流和不同提取方法的影响因素及水平见表
1, 2。
2. 2　荷叶总生物碱的提取与纯化: 称取荷叶 100
g ,加入表 1中的溶剂 2 000m L浸泡 ,按表 2方法提
取。滤过 ,合并滤液 ,回收溶剂至 100 mL,有机溶剂
提取液拌入适当的树脂 ,挥去乙醇 ,再将拌有样品的
树脂加到预先填好的大孔吸附树脂柱 (药材与树脂
的比例为 1∶ 2～ 1∶ 3)上 ;酸水提取液经 0. 5% 氢
氧化钠溶液调 pH 9～ 11,直接上柱。先水洗去杂质 ,
再用乙醇 -水洗脱 ,减压回收乙醇 ,挥干得总生物碱。
表 1　不同溶媒加热回流提取因素水平表
Table 1　 Factors and levels by heating and
ref luxing with dif ferent resolvers
水平 因　　素
A溶剂 B回流时间 /h C提取次数
1 95% 乙醇 1. 5 1
2 甲醇 2. 0 2
3 0. 5盐酸 2. 5 3
表 2　不同提取方法因素水平表
Table 2　 Factors and levels by diff erent
extracting methods
水平 因　　素
A溶剂 B提取方法 C提取时间 /h
1 0. 5% 盐酸 超声 1. 5
2 0. 5% 醋酸 回流 2. 0
2. 3　对照品溶液的配制:精密称取减压干燥至恒重
的荷叶碱对照品 4. 5 mg ,氯仿定容至 10 mL。精密
吸取 4 mL,加入 20 mL氯仿及 4 mL溴甲酚绿缓
冲液于分液漏斗中萃取 ,取 20 mL氯仿层于试管
中 ,加 0. 01 mo l /L氢氧化钾溶液、无水乙醇各 5
mL摇匀 ,精密吸取上层溶液 6 mL于 10 mL量瓶
中定容 ,即得。
2. 4　标准曲线的制备:分别精密吸取荷叶碱对照品
溶液 0. 1, 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5, 5. 0 mL置于干燥
具塞试管中 ,加氢氧化钾溶液及无水乙醇的混合液
至 5 mL,摇匀。以氢氧化钾溶液和无水乙醇的混合
·916· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-10-12
液为空白 ,按分光光度法在 622 nm处测定吸光度 ,
得回归方程 A= 0. 056 8+ 0. 515 9C , r= 0. 999。
2. 5　提取物中生物碱的含量测定:取样品称重 ,用
氯仿配成一定浓度的溶液 ,精密吸取样品提取液 1
m L,加入 5 m L氯仿及 1 mL溴甲酚绿缓冲液于分
液漏斗中 ,振摇 ,静置。 分取氯仿层 4 mL于刻度试
管中 ,加入 0. 01 mo l /L氢氧化钾溶液、无水乙醇各
3 mL,摇匀 ,静置 ,取上层蓝色溶液测定 A值并计
算生物碱含量。
3　实验结果
3. 1　不同溶媒加热回流的结果:见表 3。方差分析
见表 4。根据方差分析 ,其影响因素的顺序为 A>
C> B,即依溶剂种类、提取次数、回流时间的顺序减
弱。回流时间对试验影响差异不具有显著性。 综合
生产中的节能、节时原则 ,加热回流提取的最佳工艺
是用 0. 5% 盐酸提取 2. 0 h,提取次数为 2次。
表 3　不同溶媒加热回流提取的测定结果
Table 3　 Extracting results by heat ing and
ref luxing with dif ferent resolvers
编号 A B C D (误差 ) 生物碱量 /mg
1 1 1 1 1 8. 71
2 1 2 2 2 16. 97
3 1 3 3 3 37. 40
4 2 1 2 3 21. 28
5 2 2 3 1 32. 70
6 2 3 1 2 16. 72
7 3 1 3 2 46. 88
8 3 2 1 3 26. 08
9 3 3 2 1 52. 32
表 4　不同溶媒加热回流提取的方差分析
Table 4　 Var iance analysis by heat ing and refluxing
extract ion with diff erent resolvers
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 767. 32 2 383. 66 25. 47 P < 0. 05
B 201. 94 2 100. 97 6. 70
C 723. 28 2 361. 64 24. 01 P < 0. 05
D(误差 e) 30. 13 2 15. 065
　　F 0. 05 ( 2, 2)= 19. 00　F 0. 01 ( 2, 2)= 99. 00
3. 2　不同提取方法的结果:见表 5。 方差分析见表
6。从方差分析 ,加热回流比超声提取产量高 ,而醋酸
比盐酸提取的生物碱总量高 ,但相对含量较低 ,因
此 ,综合考虑其最佳提取工艺仍为 5%盐酸加热回
流 2. 0 h ,回流 2次。
　　从以上可见 ,采用加热回流提取法产量明显高
于超声提取法 ,且用酸水提取 2. 0 h时生物碱量较
高 ,而且 95%乙醇提取物纯度较高。综合两者来考
虑荷叶生物碱的提取工艺 ,其最佳工艺为: 采用
0. 5%盐酸 ,加热回流 2. 0 h,提取 2次。
表 5　不同提取方法生物碱的测定结果
Table 5　Results by dif f erent extract ing methods
编号 A B C D (误差 ) 生物碱量 /mg
1 1 1 1 1 20. 82
2 1 1 1 2 21. 08
3 1 2 2 1 52. 21
4 1 2 2 2 51. 97
5 2 1 2 1 21. 68
6 2 1 2 2 22. 48
7 2 2 1 1 42. 09
8 2 2 1 2 40. 96
表 6　不同提取方法的方差分析
Table 6　 Variance analysis by diff erent extracting methods
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 　 44. 51 1 　 44. 51 　 3 709. 17 P < 0. 05
B 1 279. 42 1 1 279. 42 106 618. 33 P < 0. 01
C 　 68. 39 1 　 68. 39 　 5 699. 17 P < 0. 01
D(误差 e) 　 　0. 012 1 　 　0. 012
　　F0. 05 ( 1, 1)= 161. 4　F0. 01( 1, 1) = 4 052
4　讨论
4. 1　用乙醇提取荷叶总生物碱 ,其纯度较高 ,为了
探讨醇度对提取工艺的影响 ,本试验采用不同浓度
的乙醇即 95% , 80% , 70% , 50%乙醇提取 ,结果显
示浓度越低提取量越少。
4. 2　为了探讨酸度对提取工艺的影响 ,本实验采用
不同浓度的盐酸即 1% , 0. 5% , 0. 3% , 0. 1%盐酸提
取。结果表明随着酸的浓度的减少 ,总生物碱的提取
量也减少。虽然 1%盐酸的提取量稍大 ,但在浓缩时
酸的浓度高 ,对空气的污染较大 ,因此认为 0. 5%盐
酸提取为最佳工艺。
4. 3　提取荷叶生物碱时 ,由于荷叶轻 ,易上浮 ,所以
溶剂不能充分浸泡荷叶 ,这可能对提取效果有一定
影响。若将荷叶研成碎片 ,产量或许会增加。
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·917·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月