全 文 ：·制剂与质量·
HPLC 法测定 23-羟基白桦酸注射液中 23-羟基白桦酸的含量
杨　敏1, 2, 王广基1, 叶文才1, 周杏琴2, 潘尚仁2, 项景德2Ξ
(11 中国药科大学, 江苏 南京　210009; 21 江苏省原子医学研究所 核医学国家重点实验室, 江苏 无锡　214063)
摘　要: 目的　建立 232羟基白桦酸注射液中 232羟基白桦酸的H PL C 分析方法。方法　采用H PL C 法。色谱柱:
YW G C18 (250 mm ×416 mm , 10 Λm ); 流动相: 乙腈2水2冰醋酸 (600∶400∶1) ; 体积流量: 110 mL öm in; 检测波长:
205 nm ; 柱温: 25 ℃; 检测灵敏度: 01005 AU FS。采用外标法测定 232羟基白桦酸的量。结果　232羟基白桦酸在10～
100 Λg 与峰面积具有良好线性关系, 平均回收率为 99154% , R SD 为 1198% (n= 5)。结论　该方法快速、简便、准
确可靠, 可用于 232羟基白桦酸的定量。
关键词: 232羟基白桦酸注射液; 232羟基白桦酸; 高效液相色谱
中图分类号: R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 11 1228 02
D eterm ina tion of 23-hydroxylbetul in ic ac id in 23-Hydroxylbetul in ic Ac id In jection by HPLC
YAN G M in1, 2, W AN G Guang2ji1, YE W en2cai1, ZHOU X ing2qin2, PAN Shang2ren2, X IAN G J ing2de2
(11 Ch ina Pharm aceu tical U niversity, N an jiang 210009, Ch ina; 21 J iangsu Inst itu te of N uclear M edicine,
Sta te Key L abo rato ry of N uclear M edicine, W uxi 214063, Ch ina)
Abstract: Object　To estab lish a H PL C m ethod fo r determ inat ion of 232hydroxylbetu lin ic acid (232
HBA ) con ten t in 232H ydroxylbetu lin ic A cid In ject ion (232HBA I) 1M ethods　H PL C m ethod w as u sed w ith
C 18 reverse phase co lum n (250 mm ×416 mm , 10 Λm ) , aceton it rile2w ater2acet ic acid (600∶400∶1) as mo2
b ile phase, velocity 110 mL öm in, co lum n temperatu re a t 25 ℃, sen sit ivity 01005 AU FS, detect ing w ave
at 205 nm 1 Con ten t of 232HBA in 232HBA Iw as determ ined w ith ex ternal standard m ethod1 Results　T he
standard cu rves of 232HBA show ed good linearity over the range of 10—100 Λg and the average recovery
w as 99154% w ith R SD 1198% (n= 5) 1 Conclusion 　T he m ethod is qu ick and simp le, and it is accu ra te
and reliab le fo r the determ inat ion of 232HBA 1
Key words: 232H ytroxylbetu lin ic A cid In ject ion (232HBA I) ; 232hydroxylbetu lin ic acid (232HBA ) ;
H PL C
　　白头翁具清热解毒、活血化瘀之功效, 中医临床
主要用于结肠癌、直肠癌等肠道肿瘤及子宫颈癌、脑
垂体瘤、甲状腺瘤、肺癌的治疗。白头翁在我国广泛
分布, 作为临床常用的传统中药材, 每年国内外市场
需求量可达数千吨。232羟基白桦酸 (232HBA ) 是从
白头翁根部首先分离出的一种五环三萜类皂苷, 无
毒。体内外抑瘤实验表明, 其较白头翁中提取的其他
衍生物抗黑色素瘤作用强[1 ] , 低剂量 (10～ 20 Λgö
mL ) 时对黑色素瘤B 16 细胞即有明显的分化诱导
作用[2 ] , 高剂量 (小鼠灌胃 300～ 600 m gökg) 时诱导
肿瘤细胞凋亡, 对体内外黑色素瘤增殖有明显的抑
制作用[3 ]。此外, 其不同于白桦酸只对黑色素瘤有抑
制作用而对其他肿瘤细胞没有作用[4 ]。对多种肿瘤
细胞系如人胃癌 SGC27901 细胞系、人卵巢癌A 0 细
胞系、人白血病HL 260 细胞系、人白血病 K562 细胞
系、人宫颈癌H ela 细胞系及小鼠腹水瘤 S180细胞系
等均有抑制作用[5 ]。232HBA 可阻止人白血病HL 2
60 细胞生长, bcl22 及端粒酶活性同时下调导致细
胞凋亡[6 ]。因其广泛的抗肿瘤活性, 具有较好的开发
价值, 是一很好的广谱抗肿瘤药物。本实验建立了
232HBA 的 H PL C 测定法, 为制定 232HBA 的质量
标准、进行 232HBA 的药动学研究等提供了一个简
便、可靠的检测手段。
1　仪器与药品
BS—110S 型电子天平 (Sarto riu s) ; B IO 2RAD
M OD EL 2800 高效液相色谱系统: B IO 2RAD B IO 2
·8221· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 11 期 2004 年 11 月
Ξ 收稿日期: 2004203218
基金项目: 教育部优秀青年教师资助 (教人司[ 2002 ]350 号) ; 人事部回国人员择优项目资助 (20022A K20256) ; 广东省关键领域重大突破
项目 (2003A 30909)
作者简介: 杨　敏 (1972—) , 女, 江苏靖江人, 博士研究生, 助理研究员, 主要从事放射性药物开发及放射性核素示踪法药动学研究。
T el: (0510) 551448223523
D IM EN S ION TM 紫外检测器, B IO 2RAD 泵, B IO 2
RAD M OD EL A S2100T H PL CTM 自动进样器。
　　232HBA 对照品 (纯度> 98% ) 由中国药科大学
天然药化教研室提供; 232HBA 注射液 (批号:
031223、040106、040301) 由江苏省原子医学研究所
提供; 乙腈为色谱纯试剂, 二氯甲烷、二甲亚砜和冰
醋酸为分析纯试剂。
2　方法与结果
211　对照品溶液的制备: 精密称取 232HBA 对照品
25 m g, 置 5 mL 量瓶中, 加适量甲醇超声使溶解并
加至刻度, 摇匀, 作为对照品储备溶液 (质量浓度为
5 m gömL )。
212　空白对照溶液的制备: 取 012 mL 二甲亚砜,
加 012 mL 聚山梨酯280、110 mL 生理盐水, 0145Λm 滤膜滤过, 即得。
213　色谱条件: 色谱柱: YW G C 18 (250 mm ×416
mm , 10 Λm ) (大连依利特公司) ; 流动相: 乙腈2水2冰
醋酸 (600∶400∶1) ; 体积流量: 110 mL öm in; 检测
波长: 205 nm ; 柱温: 25 ℃; 检测灵敏度: 01005
AU FS。在上述色谱条件下, 232HBA 的保留时间为
1319 m in 左右, 柱效以 232HBA 计算, 理论塔板数
大于 10 000。色谱图见图 1。
12232羟基白桦酸
12232hydroxylbetu lin ic acid
图 1　对照品 (A)、23-羟基白桦酸注射液 (B)和
空白对照 (C)的 HPLC 图谱
F ig1 1　HPLC chromatogram s of reference substance
(A) , 23-HBA I (B) , and blank (C)
214　线性关系考察: 将 232HBA 对照品储备溶液加
甲醇分别配成 015、110、115、210、215、310、315、410、
510 m gömL 的对照品溶液, 经微孔滤膜(0145 Λm ) 滤
过, 在上述色谱条件下, 进样 20 ΛL , 记录色谱图。进样
量 (X ) 对峰面积 (Y ) 的回归方程为: Y = 510 704 X -
631 997, r= 01999 1, 线性范围为 10～ 100 Λg。
215　精密度试验: 精密吸取同一对照品溶液, 重复
进样 5 次, 每次 20 ΛL , 以 232HBA 的峰面积计,
R SD 为 1131%。
216　重现性试验: 取同一批号 (批号: 040301) 样品
5 份, 按上述色谱条件进样 20 ΛL 测定, 232HBA 质
量分数的R SD 为 1176%。
217 　稳定性试验: 取 232HBA 注射液 (批号:
040301)每隔 24 h 进样 1 次, 测定峰面积共 4 次, 以
232HBA 峰面积计算R SD 为 1111%。
218　加样回收率试验: 取已知含量的 232HBA I 1
mL (含 232HBA 约 2 m g) , 精密加入 210 m gömL
232HBA 对照品溶液 1 mL , 置 5 mL 量瓶中, 用甲醇
溶解并加至刻度, 按上述方法测定, 结果 232HBA 的
平均回收率为 99154% , R SD 为 1198% (n= 5)。
219　样品测定: 精密吸取经微孔滤膜 (0145 Λm ) 滤
过后的样品溶液 20 ΛL , 在上述色谱条件下进样分
析, 以外标法计算样品中 232HBA 的含量, 结果见
表 1。
表 1　样品中 23-羟基白桦酸的测定结果 (n= 3)
Table 1　D eterm ination of 23-HBA in samples (n= 3)
批　号 232羟基白桦酸ö(m g·mL - 1) RSD ö%
031223 1194 0131
040106 1193 0133
040301 1193 0134
3　讨论
　　用不同比例的乙腈和水作流动相时, 232HBA
无紫外吸收峰; 加入适量的冰醋酸后可改善, 最后确
定乙腈2水2冰醋酸的最佳配比为 600∶400∶1。在此
色谱条件下, 溶剂峰对 232HBA 无影响, 分离度好。
　　因 232HBA 不溶于水, 在制备注射液时加入适
量的表面活性剂如聚山梨酯280 以助溶, 辅料对 232
HBA 的测定无干扰。
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