全 文 ：取物中未检测出水溶性成分丹参素、原儿茶醛, 两者
存在于丹参的 SFE 残渣中, 结果见表 5。可见丹参
SFE 残渣中的丹参素、原儿茶醛较丹参药材中的浓
度高, 其原因有待于进一步研究。
表 4　L 9 (34)正交试验结果
Table 4　Results of L 9 (34) orthogonal test
试验号 A B C
丹参素ö
(g·100 g- 1)
原儿茶醛ö
(g·100 g- 1)
1 1 1 1 01460 9 01028 1
2 1 2 2 01559 7 01039 1
3 1 3 3 01496 2 01029 4
4 2 1 2 01596 5 01043 7
5 2 2 3 01671 0 01058 3
6 2 3 1 01514 5 01046 4
7 3 1 3 01877 1 01099 6
8 3 2 1 01686 1 01063 8
9 3 3 2 01841 4 01083 7
丹参素 K 1 01505 6 01644 8 01553 8
　　　K 2 01594 0 01638 9 01665 9
　　　K 3 01801 5 01617 4 01681 4
　　　R 01295 9 01027 4 01127 6
原儿茶醛 K 1 01032 2 01057 1 01046 0
　　　　K 2 01049 5 01053 6 01055 5
　　　　K 3 01082 3 01053 2 01062 4
　　　　R 01050 1 01003 9 01016 4
表 5　丹参的有效成分的测定 (n= 3)
Table 5　Effective componen ts in S 1 m iltor rh iza (n= 3)
　　样　品
质量分数ö%
丹参酮Ê A 丹参素 原儿茶醛
丹参药材 01298 4 01560 0 01072 8
丹参 SFE 提取物 01235 0 未检出 未检出
丹参 SFE 残渣提取物 01070 0 01893 2 01092 0
　　将丹参按上述试验条件进行超临界萃取, 将其
SFE 残渣再按上述试验条件进行水煎煮提取, 之后
所得残渣于 50～ 60 ℃烘干, 称取烘干物适量, 照前
述丹参酮Ê A、丹参素、原儿茶醛的测定方法测定各
有效成分的残留量, 结果 SFE 残渣水煎后残渣中残
留各成分分别为丹参酮Ê A 01003 1% , 丹参素
21907% , 原儿茶醛 71936%。可见经上述提取工艺
后, 丹参中大于 99% 的丹参酮Ê A、大于 97% 的丹参
素、921064% 原儿茶醛已被提出。
4　讨论
　　本试验提取丹参中有效成分的最佳工艺是: 首
先, 利用 SFE 技术提取脂溶性成分如: 丹参酮Ê A
等, 其提取条件是: 精密称取样品粉末 (过 60 目筛)
300 g, 放入 SFE 萃取罐中, 用 35% 乙醇, 于 55 ℃温
度、30 M Pa 压力下萃取 215 h, 收集萃取液, 滤过,
浓缩, 浓缩后所得物再经真空干燥, 即得萃取物; 再
利用传统的水煎法提取丹参 SFE 残渣中的水溶性
成分如: 丹参素、原儿茶醛等, 其提取条件是: 以残渣
8 倍量的水煎煮 3 次, 每次 115 h。
　　丹参 SFE 残渣中的丹参素、原儿茶醛较丹参药
材中的浓度高, 其原因有待于进一步研究。
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西红花及注射用西红花苷的 HPLC 指纹图谱研究
郁　健1, 杜春波2, 周素娣3Ξ
(11 中国药科大学 分析化学教研室, 江苏 南京　210038; 21 中国药科大学制药有限公司, 江苏 南京　210009;
31 中国药科大学 中药分析教研室, 江苏 南京　210038)
　　西红花为鸢尾科番红花属植物番红花C rocus
sa tivus L 1 的干燥柱头, 西红花苷 (crocin) 为西红花
药材的提取物, 经过加工制成注射用西红花苷 (冻
干)制剂, 具有活血化瘀、散郁开结, 用于中风病血瘀
证 (脑脉痹塞) , 临床上用于脑梗死, 或局限性脑梗死
(包括脑血栓、脑栓塞、脑动脉痉挛等)。
　　西红花的主要成分为类胡萝卜色素、苦味质和
挥发油[1 ]。类胡萝卜色素为西红花苷元 (西红花酸
crocrt in ) 与多种糖组成各种糖苷, 西红花苷分为西
红花苷21、2、3、4。目前有文献[2, 3 ]报道采用H PL C 和
TL C 法对西红花苷21、2 的测定。作为中药注射剂,
SFDA 规定必须进行指纹图谱的研究, 以便控制中药
注射剂的质量。本实验建立H PL C 法, 对西红花药
材、西红花提取物及注射用西红花苷制剂进行指纹图
·2631· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203213
作者简介: 郁　健 (1959—) , 男, 工程师, 江苏启东人, 主要从事药物分析工作, 研究领域包括中西药质量分析、药物体内分析研究等。
T el: (025) 85322635　E2m ail: yu jian5959@ 163. com
谱的研究, 追溯他们之间的相关性, 确定其相应的技
术参数, 为注射用西红花苷制剂一致性提供保证, 同
时为西红花药材的鉴别和质量检验提供新手段。
1　仪器和药品
A gilen t 1100 系列高效液相色谱仪, Chem sta2
t ion 系统, 配有自动脱气和恒温装置。
甲醇为色谱纯, 水为重蒸馏水, 磷酸二氢铵为分
析纯。西红花苷21 (cr21)、西红花苷22 (cr22)、西红花
苷23 (cr23) 和西红花苷24 (cr24) 对照品, 自制, 纯度
大于 98%。西红花药材为浙江产优质药材, 由中国
药科大学周锦祥教授鉴定; 西红花提取物由中国药
科大学中药分析教研室提取, 西红花总苷含量以西
红花苷21 计大于 80% ; 注射用西红花苷 (冻干) 由中
国药科大学研制。
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱: Sh im adzu Sh im 2Pack V P2
OD S (150 mm ×416 mm , 5Λm ) ; 柱温: 40 ℃; 流动
相: 甲醇20101 mo löL 磷酸二氢铵溶液 (用磷酸调节
pH 4) (30∶70) , 40 m in 线性改变至 75∶25, 并维持
20 m in。体积流量: 1 mL öm in; 检测波长: 440 nm。
212　供试液的制备
21211　对照品溶液的制备: 取 cr21、cr22、cr23 和 cr2
4 对照品适量, 分别用甲醇溶解, 用甲醇2水溶液
(50∶50) 制成 15 ΛgömL 的对照溶液和相应的混
合液。
21212　西红花药材供试溶液的制备: 称取西红花干
燥、粉碎的细粉约 30 m g, 置索氏提取器中, 加甲醇
70 mL , 加热回流至提取液至无色, 放冷, 取出, 用甲
醇洗涤提取器, 合并提取液和洗涤液, 浓缩, 置 5 mL
量瓶中, 加甲醇至刻度。取 5 mL 置 10 mL 量瓶中,
加甲醇2水溶液 (50∶50)至刻度, 作为供试品溶液。
21213　西红花提取物供试品溶液的制备: 取西红花
提取物约 20 m g, 置 25 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并稀
释至刻度, 摇匀。取 5 mL 置 25 mL 量瓶中, 加甲醇2
水溶液 (50∶50)稀释至刻度, 摇匀, 即得。
21214　注射用西红花苷供试品溶液的制备: 取注射
用西红花苷内容物适量 (约含西红花提取物 20
m g ) , 置 25 mL 量瓶中, 用甲醇2水溶液 (50∶50) 溶
解并稀释至刻度, 摇匀。取 5 mL 置 25 mL 量瓶中,
加甲醇2水溶液 (50∶50)稀释至刻度, 摇匀, 即得。
213　测定: 分别取上述各供试液 20 ΛL , 注入液相
色谱仪, 记录色谱图。cr21、cr22、cr23 和 cr24 对照品
的保留时间分别为 1813、2116、3111、2516 m in, 色
谱图见图 1。典型的西红花药材、西红花提取物和注
射用西红花苷的H PL C 图谱见图 2。
图 1　对照品混合液的 HPLC 图谱
F ig11　HPLC chromatogram of reference
substance m ixture
图 2　西红花药材 (A)、提取物 (B)和注射用
西红花苷 (C)的 HPLC 图谱
F ig12　HPLC chromalogram of C1 sa tivus (A) , C.
sa tivus extract (B) , and croc in for in jection (C)
214　方法学考察
21411　精密度和稳定性试验: 取同一批号的提取物
约 20 m g, 按上述西红花提取物供试品溶液的制备
和测定操作, 连续进样 5 次, 并在 1、5、8、12 h 测定,
按国家药品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹图
谱研究的技术要求 (暂行)》有关规定, 以西红花苷22
峰为参照峰, 计算各共有峰的相对保留时间和面积
比, 相对保留时间的 R SD 均小于 015% , 单峰面积
大于 5% 总峰面积的色谱峰的面积比R SD 均小于
1%。精密度试验结果符合测定要求, 测定溶液在
12 h内稳定。
21412　重现性试验: 取同一批号的提取物 5 份, 按
上述西红花提取物供试溶液的制备和测定操作, 按
上述有关规定, 计算各共有峰相对保留时间和面积
比。相对保留时间的R SD 均小于 015% , 单峰面积
大于 5% 总峰面积的色谱峰的面积比 R SD 均小
于 1%。
215　指纹图谱及技术参数: 比较获得的H PL C 图,
西红花药材、西红花提取物和注射用西红花苷供试
品溶液指纹图谱中明显的共有峰有 7 个峰, 其中 cr2
1、cr22、cr23 和 cr24 的峰都可标定。指纹图谱中将
cr22 为参照峰, 计算其余共有峰的相对保留时间和
面积比。西红花药材、西红花提取物和注射用西红花
苷供试品溶液指纹图谱共有峰的技术参数见表 1。
·3631·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
表 1　西红花药材、西红花提取物和注射用
西红花苷的指纹图谱参数 (n= 10)
Table 1　Chromatograph ic f ingerpr in t data
of C1 sa tivus, C. sa tivus extract,
and croc in for in jection (n= 10)
名称 峰号 相对保留时间öm in RSDö% 峰面积比 RSDö%
西红花　 1 (cr21) 01846 0136 11953 5193
药材　　 2 (cr22, S) 1 1
3 (cr24) 11160 0117 01049 16155
4 (cr23) 11411 0129 01274 13187
5 11468 0132 01292 16169
6 11595 0141 01155 12111
7 11825 0143 01578 35196
西红花　 1 (cr21) 01846 0113 11308 9194
提取物　 2 (cr22, S) 1 1
3 (cr24) 11161 0111 01049 3198
4 (cr23) 11418 0121 01314 5198
5 11466 0122 01099 25167
6 11591 0121 01069 9155
7 11834 0126 01020 56181
注射用　 1 (cr21) 01849 0123 11465 10102
西红花苷 2 (cr22, S) 1 1
3 (cr24) 11159 0111 01052 3136
4 (cr23) 11405 0116 01252 29101
5 11462 0114 01067 43188
6 11587 0113 01029 47121
7 11816 0112 01033 44172
3　讨论
　　西红花苷在甲醇中具有良好的溶解度, 因此, 西
红花药材的提取溶剂和方法按照《中华人民共和国
药典》2000 年版一部西红花鉴别项下 TL C 法进行,
使用甲醇为提取溶剂, 西红花提取物和注射用西红
花苷的溶剂采用甲醇或甲醇2水溶液, 并用甲醇2水
(50∶50) 溶液稀释, 以提高被测组份的溶解度和分
离效率。
　　在H PL C 方法建立过程中, 采用甲醇2水 (50∶
50) 流动相体系进行试验, 尽管 cr21 峰和 cr22 峰以
适当的时间出峰, 但造成其他成分保留时间相对较
长, 引起保留时间相对较长, 峰扩展和保留时间偏差
大。而采用具有一定 pH 值流动相并进行线性梯度
分离的试验, 各特征指纹峰保留时间适当、紧凑和稳
定, 精密度和重现性符合中药指纹图谱研究的要求。
同时通过梯度过程中甲醇的比例达到 100% 观察,
40 m in 后无明显的色谱峰出现。
　　分别以甲醇2水 (50∶50) 和甲醇20101 mo löL
磷酸二氢铵溶液 (用磷酸调节 pH 4) 不同比例 (甲醇
起始比例 25%～ 45% , 终止比例 75% ) 线性梯度为
流动相, 以提取物为供试品溶液进行试验, 结果表
明, 采用梯度洗脱, 保留时间适中, 其中甲醇20101
mo löL 磷酸二氢铵溶液 (用磷酸调节 pH 4) (30∶
70) , 40 m in 线性改变至 75∶25 的流动相为佳。在
不同比例甲醇的流动相的试验中, 以西红花苷22 峰
为参照峰, 单峰面积大于 5% 总峰面积的色谱峰的
面积比 R SD 均小于 2% , 说明本系统的良好适
用性。
　　西红花苷各对照品、西红花药材、西红花提取物
的甲醇溶液的紫外2可见光谱最大吸收约在 443 nm
和 582 nm , 而甲醇2水溶液的最大吸收约在 440 nm ,
图谱形态相似, 考虑测定对象具有相同的西红花苷
元, 并且西红花提取物和制剂中的主要成分为西红
花苷, 因此本实验的检测波长为 440 nm。
　　为保证指纹图谱特征指纹峰相关参数的准确
性, 实验条件应该保持条件的一致性, 本实验中采用
了柱温控制和在线脱气系统。同时, 色谱柱在测定前
应该得到充分的平衡。
　　从指纹图谱看, 西红花药材、西红花提取物和注
射用西红花苷 3 者之间具有很好的相关性和追溯
性, 他们的最大特征峰为 cr21、cr22 和 cr23, 药材中 3
者平均占有总峰面积的 70% , 药材中共有峰面积和
占总峰面积的 90% 以上。西红花提取物和注射用西
红花苷中 cr21 峰、cr22 峰和 cr23 峰, 3 者平均约占有
总峰面积的 85% , 西红花提取物和注射用西红花苷
共有峰面积和占总峰面积的 95% 以上。这与提取物
的提取和精制过程相符合。
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sa tivus [J ]1 J N anj ing Coll P harm (南京药学院学报) , 1986,
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