全 文 ：·制剂与质量·
大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A
金　鸣1, 高子淳2, 李金荣1, 臧宝霞1, 吴　伟1Ξ
(11 北京市心肺血管疾病研究所2首都医科大学附属北京安贞医院 药理研究室, 北京　100029;
21 北京中医药大学中药学院, 北京　100102)
摘　要: 目的　建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素 ( safflo r yellow , SY) 及有效成分羟基红花黄色素A
(hydroxysafflo r yellow A , H SYA )的方法。方法　室温水提减压浓缩所得红花水提液上D 24020 型非极性大孔树脂
柱, 水洗脱糖类等杂质, 以 30% 和 10% 乙醇洗脱分别得 SY 和H SYA ; 采用分光光度法和H PL C 法分析水洗脱除糖
过程中 SY 和H SYA 的损失率及醇洗脱 SY 和H SYA 的回收率。结果　聚酰胺薄膜色谱结果显示 SY 和H SYA 洗
脱液分别可见 4～ 5 个和 1 个黄色荧光斑点。H PL C 分析结果表明, 两洗脱液中所含 SY 和 H SYA 纯度分别为
9214% 和 8310%。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中, 损失率和回收率分别为 SY: 715% 和 8016% , H SYA : 1164% 和
7713%。结论　本法适于大规模制备 SY 和H SYA。
关键词: 红花; 红花黄色素; 羟基红花黄色素A ; 大孔树脂柱色谱
中图分类号: R 28412; R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 01 0025 04
Prepara tion of saff lor yellow and hydroxysaff lor yellow A
by macroporous resin column chroma tography
J IN M ing1, GAO Zi2chun2, L I J in2rong1, ZAN G Bao2x ia1, W U W ei1
(1. D epartm ent of Pharm aco logy, Beijing Inst itu te of H eart, L ung, and B lood V essel D iseases—Beijing A nzhen
Ho sp ita l, Cap ita l U niversity of M edical Science, Beijing 100029, Ch ina; 2. Co llege of Ch inese M ateria
M edica, Beijing U niversity of T radit ional Ch inese M edicine, Beijing 100102, Ch ina)
Abstract: Object　To estab lish the simp le and effect ive techn ique fo r p reparing w ater so lub le saff lo r
yellow (SY) and hydroxysaff lo r yellow A (H SYA ) from Ca rtham us tinctorius L. M ethods　A queou s ex2
t ract p repared th rough repeated w ater ex tract ion at room temperatu re and vacuum evapo rat ion w as added
to nonpo lar m acropo rou s resin co lum n and the impu rit ies such as sugar w ere w ashed ou t by w ater, then
SY and H SYA w as elu ted by 30% and 10% ethano l individually. T he ra te of lo ss and of recovery w as de2
term ined w ith spectropho tom etry and H PL C analysis. Results　 It w as ob served that the po lyam ide TL C
analysis resu lt of SY and H SYA elu t ion w as 4—5 o r one yellow spo t under f luo rescen t ligh t. It w as show n
in H PL C analysis tha t the con ten t of SY and H SYA in tw o elu t ion s w as 9214% and 8310% respect ively.
In the p rocedu re of sugar w ash ing w ith w ater o r the effect ive componen ts elu t ing by dilu ted ethano l, the
ra te of lo ss and recovery are SY: 715% and 8016% , H SYA : 1164% and 7713% respect ively. Conclusion
T h is techn ique is su itab le to p repare SY and H SYA in a large scale.
Key words: Ca rtham us tinctorius L. ; saff lo r yellow (SY) ; hydroxysaff lo r yellow A (H SYA ) ; m acro2
po rou s resin co lum n ch rom atography
　　红花为一活血化瘀药, 红花黄色素 (saff lo r yel2
low , SY ) 和羟基红花黄色素 A (hydroxysaff lo r
yellow A , H SYA )为红花活血化瘀作用的主要有效
部位和有效成分[1～ 3 ]。M eselhy 首次报道H SYA 的
制备方法为丙酮提取, 醋酸乙酯沉淀, 通过纤维素柱
及 Sephadex L H 220 凝胶柱色谱反复纯化获得[4 ]。过 程较为复杂, 且 Sephadex L H 220 价格昂贵, 使此法的应用受到了限制。为此, 本实验建立了非极性大孔树脂柱色谱法制备 SY 和H SYA 的方法, 提供了一种简便价廉的技术, 并且采用此法制备的 SY 活性较好, 可作为药理实验的材料。1　材料与仪器
·52·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003204217
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30171146)
作者简介: 金　鸣 (1957—) , 男, 北京人, 北京市心肺血管疾病研究所2首都医科大学附属北京安贞医院药理研究室主任, 研究员, 硕士生
导师, 1992 年博士毕业于北京中医药大学中西医结合生化专业, 研究方向为中药红花活血化瘀作用机制。
T el: (010) 6441423122308　E2m ail: jinzang@public3. b ta. net. cn
红花生药购自新疆乌鲁木齐药材公司, 产地为
新疆维吾尔族自治区吉木萨尔县, 经北京中医药大
学中药鉴定教研室李家实教授鉴定为菊科植物红花
Ca rtham us tinctorius L. 的干燥花。
D 24020 型非极性大孔树脂为天津南开大学化
工厂产品。聚酰胺薄膜为浙江台州市路桥四青生化
材料厂产品。乙腈为 F isher 公司H PL C 级产品, 羟
基红花黄色素A 对照品为本研究室制备, 经多种光
谱鉴定结构, H PL C 法分析其纯度为 92% [1, 3 ]。甲醇
为国产优级纯, 工业乙醇为北京化工厂产品, 其他试
剂均为国产分析纯。
岛津 L C—6A 高效液相色谱仪; 泰立化公司
TL 9900 液相色谱工作站。
2　方法
211　大孔树脂处理方法: 新购大孔树脂用 5%
N aOH 浸泡 2 h 后, 用水洗至中性, 再以 5% HC l 浸
泡 2 h, 水洗至中性后湿法装柱, 工业乙醇清洗至流
出液中加蒸馏水无白色混浊, 蒸馏水洗树脂至流出
液无醇味, 备用。
212　红花水提液制备: 红花 40 kg, 加 800 L 水, 室
温浸泡并不时搅动, 24 h 后放出提取液, 并加第二
次 800 L 水同法冷浸 24 h, 弃药渣, 合并两次水提
液, 离心滤过除去药渣, 80 ℃以下减压浓缩至提取
液含生药 1 kgöL , 离心滤过, 即得。
213　红花水提液中 SY 和 H SYA 的含量测定: 采
用分光光度法测定红花水提液中 SY 含量[3 ]。以刻
度吸管吸取红花水提液 015 mL , 加蒸馏水至 1 000
mL 量瓶刻线, 取此稀释液于 405 nm 测定吸光度,
以标准曲线法计算 SY 含量; 取此稀释液进行
H PL C 分析, 色谱柱为 GL Sciences 公司 Inertsil
OD S23 柱, 检测波长 405 nm , 流动相为甲醇2乙腈2
水 (20∶10∶70, 含 0102% 磷酸, pH 216) , 柱温 30
℃, 流速 016 mL öm in, 按 TL 9900 色谱工作站程序,
以面积归一化法计算 H SYA 的含量, 依 H SYA 峰
面积、H PL C 进样体积及其稀释倍数计算得红花水
提液中以H PL C 峰面积表示的H SYA 含量。
214　大孔树脂柱色谱法制备 SY 及 SY 回收率的测
定: 以刻度吸管取上述红花水提液 5 mL , 上D 24020
大孔树脂柱 (40 cm ×2 cm ) , 蒸馏水洗至流出液
M o lish 反应呈阴性, 再以 30% 乙醇洗脱, 至柱上无
明显黄色时结束洗脱。测量除糖水洗脱液总体积, 并
以刻度吸管吸取 1 mL 此溶液, 加蒸馏水稀释至 10
mL 量瓶刻线, 取此稀释液测定 405 nm 处吸光度,
标准曲线法计算 SY 含量, 并通过稀释倍数及除糖
洗脱液总体积算得除糖时被洗脱的 SY 总量, 以此
SY 量与上柱的 5 mL 红花水提液中分光光度法测
得 SY 总量之比计算损失率。30% 乙醇洗脱制备 SY
结束后, 水浴蒸发洗脱液至无醇味, 测量此水溶液总
体积, 进行H PL C 及 TL C 分析, 并以刻度吸管吸取
该溶液 1 mL , 加蒸馏水稀释至 50 mL 量瓶刻线,
405 nm 处测定此稀释液吸光度, 标准曲线法计算
SY 含量, 依稀释倍数及醇洗脱液蒸发所得水溶液
总体积计算稀醇洗脱液中SY 总量, 以此 SY 量与上
样的红花水提液中 SY 总量之比计算大孔树脂法制
备 SY 回收率。
215　大孔树脂柱色谱法制备 H SYA 及 H SYA 回
收率测定: 以刻度吸管取上述红花水提液 5 mL , 上
D 24020 大孔树脂柱 (40 cm ×2 cm ) , 蒸馏水洗至流
出液M o lish 反应呈阴性, 以 10% 乙醇洗脱H SYA ,
以 H SYA 为对照品进行聚酰胺薄膜法检视, 至
H SYA 单一成分洗脱结束为止, H SYA 洗脱液水浴
加热至无醇味, 进行H PL C 和 TL C 分析; 量取除糖
水洗脱液总体积, H PL C 法分析除糖洗脱液中的
H SYA , 并由 H SYA 峰面积、H PL C 分析进样体积
12H SYA 　22SY
32H SYA 对照品 (H SYA
reference substance)
图 1　大孔树脂法制备
的 SY 和 HSYA
的薄层图谱
F ig. 1 TLC analysis
of SY and HSYA pre-
pared by macroporous
resin chromatography
及糖洗脱液总体积计算得该洗脱液中以峰面 积表
示的 H SYA 总量, 以此 H SYA 量与上柱红花水提
液中以峰面积表示的H SYA 总量之比即为H SYA
损失率; 类似地, H SYA 制备时稀醇洗脱液挥尽醇
后测量此H SYA 水溶液的总体积并进行H PL C 分
析, 并由 H PL C 分析的进样体积、H SYA 峰面积及
H SYA 水溶液总体积计算得
以峰面积表示的该溶液中
H SYA 总量, 以此 H SYA 量
与上柱红花水提液中以峰面
积表示的H SYA 总量之比算
得大孔树脂法制备H SYA 回
收率。
216　聚酰胺薄膜分析 SY 方
法: 取聚酰胺薄膜, 点样后以
醋酸乙 酯2甲 醇2316% 盐 酸
(1∶3∶6)为展开剂于密闭容
器中上行展开, 254 nm 紫外
灯下观察斑点荧光。
3　结果
311　H SYA 和 SY 聚酰胺薄
膜色谱检视结果: 见图 1。
312　SY 和 H SYA 的 H PL C
分析结果: 见图 2。大孔树脂
·62· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
法制备的 SY 最高的峰为主要成分 H SYA , 面积归
一化法分析结果表明其H SYA 含量为 8310% , 其他
成分的结构尚待确定。
图 2　大孔树脂法制备所得 SY 的 HPLC 图谱
F ig. 2　HPLC chromatogram of SY prepared
by macroporous resin chromatography
　　大孔树脂法制备的H SYA 的 H PL C 分析见图
3。结果表明, 该条件下洗脱 30 m in 后已不出峰, 其
H SYA 纯度为 9214% , 该产物可以供药理实验用。
药理实验结果表明上述方法制备的 SY 和 H SYA
抑制 PA F 诱发的家兔血小板聚集均具明显的量效
关系。
图 3　大孔树脂法制备所得的 HSYA 的 HPLC 图谱
F ig. 3　HPLC chromatogram of HSYA prepared
by macroporous resin method
313　大孔树脂法制备 SY 回收率及损失率试验结
果: 见表 1。大孔树脂制备 SY 水洗除糖过程中, SY
损失率为 715% , 稀醇洗脱所得 SY 回收率为
8016%。
表 1　大孔树脂法制备 SY 回收率及损失率试验结果
Table 1　Results of loss and recovery rate test of SY
prepared by macroporous resin method
样品液
稀释液
A 405 nm
原液体
积ömL 稀释倍数 SY 总量öm g 比率ö%
上柱液　 0. 606±0. 002 　5 2 000 160
糖洗脱液 0. 351±0. 002 132 　 10 12 7. 5
SY 液 　 0. 546±0. 001 180 　 50 129 80. 6
314　H SYA 回收率及损失率试验结果: 见表 2。大
孔树脂制备 H SYA 水洗除糖过程中, H SYA 损失
1164% , 稀醇洗脱所得H SYA 回收率为 7713%。
4　讨论
表 2　大孔树脂法制备 HSYA 回收率及损失率实验结果
Table 2　Results of loss and recovery rate test of HSYA
prepared by macroporous resin method
样品液
总体积ömL 稀释倍数 进样体积öΛL H SYA峰面积 H SYA 量(峰面积计) 比率ö%
上柱液　 　5 2 000 10 　3 574 206 3. 57×1012
糖洗脱液 130 10 　4 506 435 5. 86×1010 　1. 64
H SYA 液 180 10 153 375 457 2. 76×1012 77. 3
　　红花活血通经, 化瘀止痛, 用于多种血液循环障
碍疾病。临床上红花以水煎液入药, 其主要水溶性组
分为 SY, H SYA 为其含量最高的查尔酮成分。SY
具抗血小板激活因子等心血管药理活性, 为红花水
溶性有效部位[5 ] , H SYA 可竞争性地抑制氚标记的
血小板激活因子与血小板受体的结合, 为 SY 中的
主要有效成分[1 ]。
目前国内关于红花的理论研究及药物开发方兴
未艾, 但较为简便有效的 SY 及其主要有效成分
H SYA 的色谱制备方法尚未见报道。水提醇沉法制
备的 SY 为一食品色素, 其制备工艺较为简单, 但其
杂质含量较高, 毒性较强, 药效较差[6 ]。我们曾报道
硅胶吸附法制备的 SY 虽然药效比食品 SY 强, 毒性
较弱[6 ] , 但由于制备过程中未先将糖等杂质洗脱分
离, 故该法仍有待改进。M eselhy 制备H SYA 的方
法较为复杂, 曾报道的聚酰胺柱色谱除杂、
Sephadex L H 220 凝胶柱色谱纯化的方法虽然可行,
但该法试剂成本较高, 且在凝胶色谱分离时, 另一红
花查尔酮成分与H SYA 混在一起, 需反复多次色谱
分离方可逐步分开, 制备H SYA 比较麻烦[1 ]。
本实验采用H PL C 法对红花成分进行了分析,
该法可较好地分离 H SYA 与其他黄酮类成分,
H SYA 峰面积与进样量线性关系良好, r= 01999 8,
回收率为 99184% , 批内 R SD 为 1140% , 批间 R SD
为 1163%。H PL C 分析结果表明大孔吸附树脂法制
备的 SY 所含黄酮类组份与硅胶吸附法制得的 SY
基本相同, 其抗血小板激活因子诱发的家兔血小板
聚集作用强度亦与硅胶吸附法制得的 SY 相近, 由
于大孔树脂法制备过程中经水洗除杂质过程, 为一
更好的制备方法。本实验所用的大孔树脂为D 24020
型非极性大孔树脂, 预试中, 共试验了天津南开大学
化工厂生产的 8 种大孔树脂, 结果表明, 非极性大孔
树脂 D 24020 型、D 23520 型及 X25 型分离糖类与
H SYA 效果较好, 另外 5 种即H 2103 型非极性大孔
树脂, AB 28 型弱极性大孔树脂,N KA 22, N KA 29 型
及 S28 型极性大孔树脂分离 H SYA 与水溶性糖类
的效果均欠佳, 故采用D 24020 型大孔树脂进行实
·72·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
验。本法经一步制备即可获得纯度为 9214% 的
H SYA , 可满足一些药理实验的需要。若欲制备含量
测定用对照品, 再经凝胶柱色谱纯化即可。实验中水
洗脱时应注意在除去糖类同时应尽可能保留较多的
H SYA , 每一次色谱制备结束后, 应以稀碱液及稀醇
液洗掉树脂上吸附的残余黄酮成分, 并以蒸馏水洗
净担体后方可进行下一次制备。由于H SYA 不稳
定, 制备时加热浓缩温度不可太高, SY 及H SYA 溶
液均可短期冷藏保存, 长期保存则应冷冻。
References:
[ 1 ]　Zang B X, J in M , SiN , et a l. A n tagon istic effect of hydroxy2
safflo r yellow A against p latelet activating facto r [J ]1 A cta
P harm S in (药学学报) , 2002, 37 (9) : 69626991
[ 2 ]　J in M , W u W , Chen W M , et a l. Inh ib ito ry effect of gro ss
safflo r yellow against p latelet activating facto r recep to r b ind2
ing in v itro [J ]1 Ch in P harm J (中国药学杂志) , 2001, 37
(3) : 16721691
[ 3 ]　Zang B X, W ang Y Q , L i J S, et a l. Spectropho tom etric de2
term ination of safflo r yellow [J ]1 Ch in J P harm A na l (药物分
析杂志) , 2002, 22 (2) : 13721381
[ 4 ]　M eselhy M R , Kado ta S, M omo se Y, et a l. Two new
quinochalcone yellow p igm ents from Cartham us tinctorius and
Ca+ + an tagon istic activity of tincto rm ine [J ]1 Chem P harm
B u ll, 1993, 41 (10) : 1796218021
[ 5 ]　H uang Z L , Gao Q M , Cui Z M. Pharm aco logical study of
safflo r yellow [J ]1 Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 1984,
15 (8) : 122141
[ 6 ]　Zang B X, W u W , L iW R , et a l. Experim en tal study of saf2
flo r yellow p repared th rough silica gel adso rp tion p rocedure on
an ticoagu lation effect [J ]1 Ch in P harm J (中国药学杂志) ,
2001, 37 (2) : 10621091
阿魏酸的稳定性及其在川芎和当归药材中的存在形式
丁明玉1, 马帅武2, 刘德麟2Ξ
(11 清华大学 化学系, 北京　100084; 21 中国中医研究院基础理论研究所, 北京　100700)
摘　要: 目的　确认阿魏酸的异构体转换反应及川芎、当归药材中阿魏酸的存在形式。方法　采用高效液相色谱
法、液相色谱2质谱联用等手段研究阿魏酸的异构体转换。结果　反式阿魏酸在常规保存条件下, 可部分转变成为
顺式, 在川芎和当归药材中, 反式和顺式阿魏酸是共存的。结论　反式阿魏酸有较好的热稳定性, 但存在缓慢的异
构体转换反应。
关键词: 阿魏酸; 稳定性; 川芎; 当归
中图分类号: R 28216; R 286102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 01 0028 03
Stab il ity of ferul ic ac id and its ex ist ing form in L igus ticum chuanx iong and A ngelica s inens is
D IN G M ing2yu1, M A Shuai2w u2, L IU D e2lin2
(1. D epartm ent of Chem istry, T singhua U niversity, Beijing 100084, Ch ina; 2. Inst itu te of Basic T heo ry of T radit ional
Ch inese M edicine, Ch ina A cadem y of T radit ional Ch inese M edicine, Beijing 100700, Ch ina)
Abstract: Object　To invest iga te the isom er tran sit ion react ion of feru lic acid and the ex ist ing fo rm of
feru lic acid in L ig usticum chuanx iong Ho rt. and A ng elica sinensis (O liv. ) D iels. M ethods　H PL C and
H PL C2M S w ere u sed to confirm the isom er tran sit ion of feru lic acid. Results　T he trans2feru lic acid w as
tran sla ted in to cis2feru lic acid part ly w hen its so lu t ion w as depo sited under som e rou t ine condit ion s, and
the trans2 and cis2feru lic acids cou ld coex ist in the Ch inese m edicinal m ateria ls, L . chuanx iong and A .
sinensis. Conclusion 　T he trans2feru lic acid is stab le thermodynam icly, bu t cou ld be tran sla ted in to cis2
feru lic acid part ly and slow ly.
Key words: feru lic acid; stab ility; L ig usticum chuanx iong Ho rt. ; A ng elica sinensis (O liv. ) D iels
　　川芎和当归都是常用中药材, 阿魏酸是它们的
有效成分之一。从化学结构上看, 阿魏酸有顺式和反
式两种立体异构体 (图 1)。有关阿魏酸 (钠) 的药理
作用和中药 (药材及中成药)中阿魏酸的液相色谱分
·82· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003206212
基金项目: 科技部社会公益专项 (2001B IB00150)
作者简介: 丁明玉 (1960—) , 男, 湖南华容人, 清华大学化学系副教授, 博士, 1986 年获中国地质大学应用化学硕士学位, 1995 年获日本
山梨大学工学部生物工学科博士学位, 1995 年至 1997 年在清华大学作为博士后研究人员, 主要从事色谱分析与中药化学及
制剂技术的研究。T el: (010) 62781687　E2m ail: d ingm y@m ail. tsinghua. edu. cn