全 文 ：p ha r ma e op oeia s oS f i ehu a n
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z h o u a n d Y u n n a n p r o v i n e e s
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“ C h u a n z i w a n ” in S ie h u a n a n d G u i z h o u p r o v in e e s
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In t h e P r e s e n t s t u d i e s
, a e o m P a r i s o n o f t h e a n t i t u s s iv e a n d e x P e e t o r a n t e f f e e t s
b e t w e e n L i g u l a 八 a s p . a n d A s t e r t a t a ir c u s i n m ie e h a s b e e n e o n d u e t e d . T h e r e s u l t s h o w e d t h a t t h e a q u e o u s e x -
t r a e t s o f b o t h Sh a n z i w a n a n d Z iw a n P r o d u e e a n t it u s s iv e a n d e x P e e t o r a n t e f f e e t s w it h a s im il a r P o t e n e y a t t h e
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K e y w o r d s A s t e r t a t a r i c u s L
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v e e x P e e t o r a n t
云芝糖肤对人外周血淋巴细胞增殖
和 T 细胞亚群变化的调节作用△
苏州 医学院药理教研室 ( 2 1 5 0 0 7) 梁中琴 资 盛伟华 “ 王晓霞 杨吉成 “ ’ 顾振纶
摘 要 用流式细胞仪技 术和 M T T 法观察 了云芝搪肤 ( P S P )对 由植物血凝素 ( P H A )诱导的人外
周血淋 巴细 胞 ( P B L )增殖 和 T 细胞 亚群变化 的调节作用 。 结果表 明 , 50 ~ 10 。 拌g /m L P S P 对经
P H A 诱导的人 P B L 增殖有显著的促进作用 (尸 < 0 . 0 5 ) ,该浓度 的 P S P 也能促进细 胞从 G l 期进人
S 期 , 并 可使 C D梦细胞 明显升高 ,使 C D才/C L 。 细 胞 比例增加 , 提示 P S P 具有免疫促进作用 。
关键词 云芝糖肤 人外周血淋 巴细胞 增殖 T 细胞亚群
近 年 来 实 验 研 究 证 明 , 云 芝 糖 肤 滤后置冰箱保存 ; 人 白细胞取 自昆山中心血
( p o l y s a e e h a r i o p e p t ie d
,
P S P ) 具 有广 泛的药 站 提 供 的健 康 人 外 周 血 ; M T T 、 碘 化丙 吮
理作用 , 特别对机体的免疫功能具有调节 和 ( IP ) 为 S i g m a 产品 ; C D才、 C D奋单抗 为北京
增强作用 〔1一 3 〕 。 但 P S P 对人外周血淋 巴细胞 邦定生物医药公司产品 。
( p e r i p h e r a l b l o o d l y m p h o e y l e s
,
P B L ) 作 用 2 方法
的体外实验研究迄今未见报道 。 我们研究 了 2 . 1 P B L 的分离 : 取健康人的 白细胞 5 份 ,
P S P 对 P H A 诱导的人 P B L 的增殖作用和对 分别用含有 10 U /m L 肝素和 10 0 U /m L 双
T 细胞亚群变化的影响 , 为云芝糖肤 的免 疫 抗 的无钙镁磷酸缓冲液 ( P B S ) 稀释后 , 再用
调节作用提供新的药效学资料 。 淋 巴细胞分层液 (体积质量 比为 1 . 0 7 7 )分离
1 材料 淋 巴 细 胞 , 用 P B S 离 心 洗涤 2 次 , 最后 用
云芝糖肤系多孔 菌科真菌云芝 oC ir of u : 1 6 4 0 培养液 (含小牛血清 10 % , 双抗 1 0 U /
v e sr i c o l o r ( L
.
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.
) Q u e l c o v
一 1 菌株 中提 m L )调细胞数为 1 X 1 0 6 /m L 备用 。
取的蛋白多糖肤 , 由上海师范大学微生物 与 2 . 2 P B L 增殖活性检测
免疫学研究所杨庆尧教授提供 , 淡褐色粉末 , 2 . 2 . 1 M T T 比色法 〔4 〕 : 将细胞加人 96 孔培
0
.
1 9 溶于 1 0 m L 1 6 4 0 培养液 中 ,经无菌过 养板 中 , 加人 不 同浓度 的 P S P ( 6一 8 0 0 拜g /
.
A d d r e s s
:
I
J
i a n g Z h o n g q i n
,
D e p a r t m e n t o f P h a r m a e o l o g y
,
S u z h o u M e d i e a 1 C o ll e g e
,
S u z h o u
梁中琴 女 ,现为苏州 医学 院药理 学教研室副教授 , 硕士 。 主要从事 中药抗肿瘤及免疫 调节作 用的研究 。 负责或参与开
发多个国家级新药 ,发表科研论 文 10 余篇 。
铃 . 本院基因室
△香 港保健协会研究项 目
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 。 卷第 1 期 · 3 7 ·
m L )
, 稳定培养 10 h 后加人 P H A (终浓度为
1 0 0 拼g /m L ) , 3 7℃ 、 5 % C O : 条 件 下培 养 7 2
h
, 在 细胞培养 结束前 4 h 加人 M T T (唾 哇
蓝 , 使 用浓 度 为 s m g /m L , 1 0 拼L /孔 ) , 4 h
后用酸化 十二烷基磺酸钠 ( S D S )终止反应 ,
以 M R 一 7 1 0 型 酶 标 仪 测 O D 值 ( 参 考 波 长
6 3 0 n m
, 实验波长 5 7 0 n m ) 。
2
.
2
.
2 流 式 细胞 仪 ( F A C S ) 检测 细 胞 周
期 〔5〕 : 以 不 同浓度 的 p s p ( 5 和 1 0 0 拌g /m L )
与人 P B L ( 5 x 1 0 6 /m L ) 、 P H A ( 1 0 0 拌g /m L )
共 同培养 72 h 后收获细胞 , 以冷的 P B S 洗涤
2 次 , 细胞沉淀用 70 %乙醇混匀备用 , 上机前
用 P B S 洗 涤后再用 P B S 调细胞浓度 为 I X
1 0
6
/m L
, 加人 R N A 酶 5 0 拼g / m L , 3 7 oC 水浴
作用 30 m in 后置冰浴终止反应 , 每毫升细胞
悬液加 P l 染液 1 0 0 拌L ( 1 拜g /m L ) , 暗室 中放
置 30 m in 后 , 用流式细胞仪分析细胞周期 。
2
.
3 T 细胞亚群的双标记检测 〔6〕 : 选择促进
增殖效应最佳浓度的 p s p ( 5 0 ~ 1 0 0 拌g /m L )
与人 P B L 及 P H A 混合培养至 4 8 h , 调细胞
浓 度 为 l x 10 6 /m L , 每 个 样 品 分 别 加 人
C D才、 C D才单抗 , 同时加人 荧光素标 记 的羊
抗 鼠 Ig G 抗体及抗体稀释液各 1 0 拼L , 放置
4℃冰箱 30 m in , 洗涤 2 次后用 流式细胞 仪
检测 , 每份标本测 5 X 10 4 细胞 , 在荧 光直方
图上分 别计 算 出 C D才、 C D奋细胞 峰的百 分
率 。
2
.
4 统计学处理 : 实验结果用方差分析统计
处理 。
3 结果
3
.
1 P S P 对 P H A 活化的人 P B L 增 殖的调
节作用 : 经 P H A 活化后的人 P B L 在不同浓
度 的 P S P 作用下培养 72 h , M T T 比色法检
测 ,结果见表 1 。 其 O D 值的变化与浓度不呈
正相关 , 高浓度 的 P S P ( 4 0 0 拼g /m L ) 促增殖
作 用较 低 , 而 低 浓 度 P S P ( 12 . 5 ~ 2 0 拜g /
m L )作用显著 , 其 O D 值明显高于 P H A 对照
组 , 经统计学处理差异显著 ( P < 0 . 0 5 ) ,呈 现
明显的促进作用 , 最佳促进效应浓度为 50 ~
1 0 0 拌g /m L , 随着 P S P 浓度的降低 , 增殖活性
·
3 8
.
也随之降低 , 但最小浓度 6 . 1 25 拼g /m L 仍有
增殖 效应 , 提示 P S P 对 活化 的人 P B L 增 殖
有 明显的促进作用 。
裹 1 P S P 对人 P B L 增殖的影响 ( n = 4压士 s )
组 别 P S P伽 g /m L ) O D 值
PH A 对照组
P H A十 P S P 处理 组 4 0 0
2 0 0
1 0 0
5 0
2 5
1 2
.
5
6
.
2 5
0
.
1 3 8士 0 . 0 2 5
0
.
1 9 3士 0 . 0 2 2
0
.
2 4 4士 0 . 0 2 1 伪
0
.
2 6 8士 0 . 0 2 6 .
0
.
2 5 6士 0 . 0 3 5 甘
0
.
2 4 5士 0 . 0 2 5 `
0
.
2 4 8士 0 . 0 3 1 份
0
.
2 2 6士 0 . 0 2 8
与对照组 比较 : . 尸 < 0 . 05
流式细胞仪检测 细胞周期 的结果显示 ,
P S P 浓度为 5 0 拌g / m I J 时可使 P H A 活化 的
人 P B L 有 10 . 67 %细胞进人 S 期 , P S P 浓度
为 1 0 0 拼g /m L 时有 1 4 . 3%细胞进人 S 期 , 而
单加 P H A 对照组仅有 5 . 93 %进人 S 期 。 提
示 P S P 明显促进经 P H A 活化的细胞进人 S
期 , 进一步表明 P S P 可促进 人 P B L 的 D N A
合成 (表 2 ) 。
表 2 P S P 对 P H A 诱导的人 P B L 进入细胞周期的
影响 ( n = 3 ,万士 s )
不同时期细胞百分数
组别
P S P
(拌g / m L ) G l
PH A 对照 一 8 1 . 67士 4 . 3 9 5 . 9 3士 1 . 1 6 12 . 4 3士 4 . 0 1
P HA十 P S P 10 0 74 . 9 3士 4 . 7 1 1 4 . 30士 1 . 90 苦 10 . 8 0士 3 . 8 3
50 76
.
1 6士 3 . 5 9 1 0 67士 3 . 08 肠 13 . 2 0土 3 . 3 0
与 PH A 对照组比较 : “ 尸 < 0 . 05
3
.
2 P S P 对经 P H A 活化后的 T 细胞亚群
变化的影响 : 见表 3 。
表 3 P S P 对细胞亚群变化的影响 (n 一 3厉士 : )
组别 P S P CD才
(拜g / m L )
C D才
PH A 对照
P H A十 P S P
ls0
1 3
.
65士 3 . 0 4 4 . 8 5士 2 . 76
2 5
.
85士 6 . 01 签 5 . 35士 0 . 16
21
.
20士 4 . 81 赞 5 . 16士 0 . 71
G才/ C D才
2
.
9 5士 1 . 1 7
5
.
0 2士 2 . 15
4
.
0 8士 0 . 9 1
与 P HA 对照组比较 : ` 尸 < 0 . 05
结果表 明在加人 P S P 的实验组 中 T 细
胞亚群有 明显 的变化 , C D才细胞 明显 增加 ,
C D扩细胞也 略有增 加 , 但 主要呈 现为 C D犷
细胞 的增加 , 故使 C D才/ C D子 比值升高 ( P <
0
.
0 5 )
。
4 讨论
P S P 能 明显抑制肿瘤生长 , 初步 的研究
表明 , 其抑瘤机制与免疫调节作用相关 〔` , ’ 〕 。
本文用 M T T 比色法和流式细胞仪分析法检
测 了不 同浓 度 P S P 对 P H A 活化 的人 P B L
增殖的影响 ,两种检测方法均显示 出 P S P 对
人 P B L 的增殖有明显的促进作用 。 与 M T T
比色法相 比 , 流式细胞仪分析法不仅能直 接
观察细胞 内 D N A 的含量 , 而 且可确定细胞
周期 , 能较准确地定位药物的作用时相 ,结果
表 明 P S P 主要作用于细胞周期的 S 期 , 提示
P S P 对活化 的人 P B L 增殖有 明显 的促进作
用 。 研究 结果还 表 明 , 经 P H A 活化后 的人
P B L 在 1 0 0 拼g /m L 浓度 的 P S P 作 用 下 , T
细胞亚群发生明显改变 ,使 C D才细胞大量增
多 , 而 C D才 细 胞 增 加 的 幅 度 较 少 , 因 此
C D才/ C D矿比值升高 , 说 明 P SP 可使细胞免
疫功能增强 , 由此表明 P S P 能增强机体免疫
功能 ,是一种有效的免疫增强剂 。
致谢 : 香港保健协会主席周文轩教授 、 理
事郭次仪教授及上海师范大学杨庆尧教授关
心 、 指导本课题研究 ,谨致衷心谢意 。
参 考 文 献
1 周金煦 ,等 . 上海 师范大学 学报 自然科学版 , 1 9 8 , 17 : 71
2 杨庆尧 ,等 . 国际学术研讨会论文和论 文摘要集 . 1 9 9 3 :
8 9
3 杨 吉成 , 等 . 中草 药 , 1 9 9 1 , 2 2 ( 5 ) : 2 3 7
4 M o s m a n u T
, e t a l
.
J Im m
u n o l M e th o d s
,
19 83
, 65 : 5 5
5 B lu s M L
, e t a l
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J Im m u n o l
,
1 9 8 8
, 4 : 7 0
6 L a k h a n P a l P
, e t a l
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J I m m u n o l M e t h o d s
,
1 9 8 7
, 9 6 : 3 5
( 1 9 9 8
一
0 1
一
2 3 收稿 )
R e g u l a t o r y E f f e e t o f P o ly s a e e h a r i o P e P t i d e o n H u m a n P e r i Ph e r a l B l o o d L ym Ph o e y t e
P r o li f e r a t i o n a n d T L y m P h o e y te S u b P o P u la t io n
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a t o r y e f f e e t o f p o l y s a e e h e r i o p e p t id e ( P S P ) o n h u m a n p e r i p h e r a l b lo o d l y m p h o e y t e
( P B L ) p r o l i fe r a t io n a n d T ly m p h o e y t e s u b p o p u la t io n w a s s t u d ie d
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T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t
:
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e y e li n g i n d u e e d b y P H A w a s in v e s t ig a t e d
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m u n o r e g u l a t o r y e f f e e t in im p r o v i n g p r o l if e r a t io n o f a e t iv a t e d h u m a n P B L
, a n d i n e r e a s in g t h e C D扩二 e ll g r o u p .
K e y w o
r d s p o ly s a e e h a r io p e p t id e h u m a n p e r i p h e r a l b l o o d ly m p h o e y t e T l y m p h o e y t e s u b p o p u la t i o n
《中草药 》杂志 1 9 9 8 年第 2 9 卷增刊 (总第 31 0 期 )征订启事
为了扩大学术交流 , 提高新药研究水平 ,经国家科学技术部 (国科发信字〔1 9 9 8〕2 1 7 号文 )批准 , 我们编辑
出版 了《 中草药 》杂志 1 9 9 8 年第 29 卷增 刊 (总第 310 期 ) 。 本增 刊共 收载论文 80 篇 , 并以当今 国际研究 的热点
“ 银 杏叶的开发研究 ” 为专论重点 , 包括银杏叶 的化 学成分 、 提取工艺 、 质量 控制 、 药理作用及 临床应用等方面
的科研论文 26 篇 , 并特邀国 内从事银杏 叶研究的知名专家和 中青年学科带头人撰 写综述文章 ,充分反 映了国
内 、 外在 “ 银杏 叶的开发研究 ” 方面的新成果 、 新进展和新动态 。 另外 收载反映我 国中药植化 、 药理 、 分 析 、 制剂 、
药材和临床等方 面的新理论 、 新方法 、新成就的科研论文和有关综述文章 54 篇 。 本增 刊选题广泛 , 内容丰富 ,
学术水平较高 ,科学性 较强 ,集中反 映了我国 中草药研究领域近 1~ 2 年的新进 展 。
增刊为 16 开本 , 采用激光照排 , 胶版 印刷 ,彩 色封面 , 160 页 (约 30 万字左右 ) , 天津 市报刊增刊特许准 印
证 ( 9 8) 第 12 2 号 , 本部发行 , 定价 50 元 ;另 加包装费 、 邮费 5 元 ,订 阅请向我部索取订单 。
电话 : (0 2 2 ) 27 47 491 3 邮政编码 : 30 0 1 9 3 天津市南 开区鞍山西道 3 08 号 《中草药 》杂志编辑部
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 1 期 . 3 9 .