全 文 ：·药剂与工艺·
HPLC-ELSD法测定湖北麦冬中主要皂苷的含量△
中国药科大学中药分析教研室 (南京 210038)　　吴　 　余伯阳 　程志红　徐珞珊
摘　要　采用蒸发光散射检测器 ( ELSD)测定了湖北麦冬中山麦冬皂苷 B的含量 ,结果表明 , ELSD是皂苷类
化合物较为适宜的检测器。 经对不同采收期样品的含量考察 ,认为湖北麦冬的最佳采收期与传统采收期 (清
明 )相一致。
关键词　湖北麦冬　山麦冬皂苷 B　 ELSD　甾体皂苷
Quantitative Determination of the Main Saponin Content in Hubei Liriope
(Liriope spicata var. prolifera ) by HPLC-ELSD
Depar tment o f Pharmacogno sy, China Pharmaceutica l Univ er sity ( Nanjing 210038)　Wu Tao , Yu Boyang , Cheng Zhi-
hong an Xu Luoshan
Abstract　　 Quantitative determination of saponins wi thout UV absorption was t ried by using the
new detecto r ELSD in combination wi th HPLC. A pi lot study on the determination of the content of 25
( S ) -ruscogenin-1-O-β-D-fucopy ranoside-3-O-α-L -rhamnopy ranose, the main saponin in Liriope spicata
va r. prolif era was t ried and show ed tha t the accumula tional rule of the constituents in the plants could be
found. It w as also found that the optima l ha rv esting time of L . spicata va r. proli fera was around early
April, the Chinese solar term of Qing-Ming , which coincides w ith the t radi tional Chinese practice. The re-
sul ts showed tha t ELSD is a realiable, highly sensi tiv e and reproducible detecto r fo r saponins analysis.
Key words　　Liriope spicata va r. prol if era Y. T. Ma　 li rio pesides B　 ELSD　 steroid saponin
　　湖北麦冬 Liriope spicata va r. proli fera Y. T.
Ma为《中华人民共和国药典》 ( 1995年版 )新增品种
山麦冬的基原植物之一 ,在湖北省广泛栽培 ,并作为
主流商品。湖北麦冬中所含皂苷类成分在免疫系统、
心血管系统等方面具有良好的活性 [ 1～ 3]。为了探明
湖北麦冬皂苷的积累规律 ,寻找最佳采收期、最佳采
收部位 ,我们收集了不同采收时间的湖北麦冬 ,测定
了其块根和须根中有效成分山麦冬皂苷 B的含量。
由于皂苷为一类极性较大 ,结构复杂的化合物 ,
它无紫外吸收 ,无专一显色剂 ,再加上麦冬皂苷测定
经常受糖的干扰 ,在用紫外检测器时 ,若采用末端吸
收 ,流动相的种类受到限制 ,增加了分离皂苷的难
度 ,使得许多结构近似的皂苷无法分离。因此 ,我们
采用了较先进的蒸发光散射检测器 ( ELSD)作为检
测手段 ,利用 HPLC法测定湖北麦冬中主要皂苷含
量 ,同时对不同采收期的样品进行含量变化研究。
蒸发光散射检测器 ( ELSD)是一种通用质量型
检测器 ,其检测原理及步骤为: 柱子洗脱 液进入雾
化器针管 ,在针的末端 ,洗脱液和氮气混合形成小液
滴 ,液滴流经加热的漂移管将溶剂挥发 ,样品在溶剂
蒸气中形成小液滴 ,样品颗粒进入流动池时 ,经过一
束激光 ,颗粒散射激光 ,经硅晶体光电二极管检测散
射光 ,并产生电信号。由于散色光强度的增加速度快
于粒子直径的四次方 ,当峰被冲洗出来时 ,单位时间
或单位体积溶液中溶液粒子的数目为常数 ,而这些
粒子中溶质的浓度却在变化 ,因此当溶剂挥发后 ,组
成纯溶质的粒子的大小与柱出口溶质的浓度的立方
根呈正比 ,因此 , ELSD的响应值与浓度并非呈简单
的线形关系 ,而是其峰面积或峰高的自然对数与浓
度的自然对数有良好的线形关系 [ 5]。
漂移管温度与载气流速是影响 ELSD检测的
两个关键性参数。 在 ELSD的气化室中 ,载气流速
对信号影响很大 ,当载气流速太低时 ,会形成大量雾
滴 ,从而导致尖峰信号或噪声信号 ;另一方面当载气
流速太高时 ,微滴量会下降导致信号响应降低。漂移
管温度降低时 ,溶剂挥发不够完全 ;温度高时 ,由于
分析样品部分挥发导致质粒挥发 ,使颗粒量下降而
使检测器响应下降 [5 ]。
·175·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 3期
Address: Yu Boyang, Departmen t of Pharmacognosy, China Ph armaceu tical Univ ersi ty, Nanjing　△霍英东教育基金资助项目
ELSD与示差折光检测器相比灵敏度高 ,对流
动相系统温度变化不敏感 ,可进行梯度洗脱 ;与紫外
检测器相比它扩大了高效液相色谱的应用范围 ,消
除了杂质和流动相的紫外吸收干扰 ,无需校正因子
就可定量 [4, 5 ]。
ELSD在国外受到了分析化学家的重视并得到
了广泛的应用。 文献报道 ,成功利用 HPLC /ELSD
法分析的物质有磷脂、表面活性剂、甘油三酯、脂肪、
脂肪酸酯、糖、合成聚合物、甾体化合物、无机离子
对、药物及其降解产物等 [ 5]。但在国内有关 ELSD在
中药分析中的应用尚为少见 ,近来田南卉 [ 6]等用
HPLC /ELSD法测定了银杏叶中银杏内酯的含量 ;
汤俊 [ 7 ]等对西洋参中拟人参皂苷 F11的含量也进行
了测定 ,结果均表明: 用 ELSD检测 ,基线稳定 ,重
现性、灵敏度均较好。
1　实验材料、仪器及测定条件
1. 1　实验材料: 湖北麦冬 L . spicata var. proli fera
的块根和须根。采集时间: 1995年 1月 3日～ 3月
22日。
1. 2　对照品: 山麦冬皂苷 B〔25( S ) -ruscogenin-1-
O-β -D-fucopyranoside-3-O-α-L-rhamnopyranosy 〕
(自提 )。
1. 3　试剂与药品: 乙腈、甲醇 (色谱纯 ) ,四氢呋喃
(进口分装 )。
1. 4　仪器:色谱仪: Shimadzu-10AT高效液相色谱
仪 ;检测器: Alltech ELSD 500型 ,气化温度 93. 18
℃ ,气体流速 ( N2 ) 2. 47 SLPM; 记录 仪: Chro-
ma topac C-R6A;色谱柱: All tech Verspapack C18
( 4. 6 mm× 250 mm);纸速: 2 mm /min。
1. 5　流动相: 乙腈 -四氢呋喃 -水 ( 45. 6∶ 2. 9∶
51. 5) ;流速: 0. 7 mL /min。
2　实验方法
2. 1　样品制备: 精密称取干燥的湖北麦冬块根、须
根粉末各 2 g ,置于索氏提取器内 ,加入 20 mL甲
醇 , 80℃水浴提取 3～ 4 h至无色 ,挥干甲醇 ,用 10
m L水分两次超声溶解残渣 ,水饱和正丁醇萃取 4
次 ( 15, 10, 5, 5 mL) ,合并正丁醇部分 ,回收正丁醇
至干。 块根用甲醇定容至 2 mL;须根用甲醇定容至
10 m L;精密吸取 2. 5 mL,甲醇定容至 10 mL。
2. 2　标准曲线制备: 精密称取对照品 2. 8 mg ,用甲
醇定容至 10 m L,从中精密吸取 0. 25, 0. 5, 1, 1. 5, 2
m L对照品溶液 ,用甲醇定容至 2 mL。分析结果:以
峰面积的自然对数为纵坐标 ,对照品浓度× 100的
自然对数为横坐标 ,做标准曲线 [5 ]。回归方程: lnA=
8. 560+ 1. 409 lnC , r= 0. 999 2。
2. 3　精密度试验:取 0. 21 mg /mL浓度的对照品 ,
连续进样 5次 ,得 RSD= 1. 428% 。
2. 4　含量测定: 取样品制备项下样品 20μL进样 ,
每个样品测定 3次 ,结果见表 1,图 1, 2。
1-短葶山麦冬皂苷 C　 2-Ls-S7　 3-Ls-S10　 4-山麦冬皂苷 B
图 1　样品及其他皂苷 HPLC图
图 2　时间 -含量关系曲线
表 1　不同采集时间及部位山麦冬皂苷 B的含量
时　间 须根 (% ) 块根 (% )
1995-01-03 0. 283 0. 898 7× 10- 2
1995-01-19 0. 158 1. 046 5× 10- 2
1995-01-30 0. 109 1. 331 8× 10- 2
1995-02-16 0. 185 1. 344 2× 10- 2
1995-03-06 0. 184 1. 216 9× 10- 2
1995-03-22 0. 247 1. 526 2× 10- 2
二年生 0. 190
2. 5　加样回收率: 精密称量 3月 6日的须根 1 g ,置
于索氏提取器内 ,加入 20 mL甲醇 ,回流 3～ 4 h至
无色 ,挥干甲醇 , 10 mL水分两次超声溶解残渣 ,加
入山麦冬皂苷 B 0. 96 mg,其余步骤同“样品制备项
下的须根的制备” ,共做 3次 ,回收率为 106. 6% ,
RSD= 2. 48%。
2. 6　其它皂苷的影响: 湖北麦冬中 ,除含有山麦冬
皂苷 B除外 ,尚还有其它皂苷 ,为了检验我们所选
择的分离条件能否排除其它皂苷的干扰 ,将分得的
短葶山麦冬皂苷 C, Ls-S10, Ls-S7与山麦冬皂苷 B
混合 ,用测定条件分离 ,结果表明 ,所选用的色谱条
件对山麦冬皂苷 B具有较好的专属性。
2. 7　湖北麦冬的失水率: 把收集到的样品剪去须
·176· 中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 3期
根 ,洗净泥土 ,沥干水分 ,称重 ,记录的重量为鲜重 ;
置于 80℃烘箱内 ,烘至恒重 ,记录的重量为干重。
表 2　湖北麦冬块根失水率
时　间 鲜重 g 干重 g 干 /湿
1995-01-03 94 22. 5 0. 239
1995-01-19 41 12 0. 293
1995-01-30 21 7 0. 333
1995-02-16 110 44 0. 400
1995-03-06 164 73 0. 445
1995-03-22 258 128 0. 496
3　讨论
3. 1　从我们做的时间 -含量曲线来看 ,湖北麦冬块
根皂苷的含量以 1月 30日、 2月 16日、 3月 22日较
高 ;同时 ,根据湖北麦冬块根干湿之比 ,这两天的比
例相近。从外观上看 , 3月 22日的湖北麦冬的个大、
饱满 ,而 1月 30日、 2月 16日则瘦小、干瘪 ,因此 ,
在清明采收为宜。
3. 2　从须根和块根的不同采收日期的皂苷含量曲
线来看 ,这两部分的皂苷分布是不均匀的。 1月 3日
须根中皂苷含量较高 ,而块根最低 ,随着时间的推
移 ,块根中皂苷的含量逐渐升高 ,到 1月 30日至最
高点 ,此时 ,须根中皂苷含量却最低 ,而后再逐渐升
高。 至 3月 22日 ,块根、须根中含量都较高 ,其中块
根中皂苷含量至最高。
参 考 文 献
1　余伯阳 ,等 .中国中药杂志 , 1991, 16( 10): 584
2　高广猷 ,等 .大连医学院学报 , 1984, 6( 3): 12
3　桂　苡 ,等 .中草药 , 1984, 15( 3): 21
4　邓海根 ,等 .药物分析杂志 , 1994, 14( 3): 61
5　冯埃生 ,等 .药物分析杂志 , 1996, 16( 4): 414
6　田南卉 ,等 .药物分析杂志 , 1997, 17( 4): 282
7　汤　俊 ,等 .药物分析杂志 , 1999, 19( 4): 241
( 1999-11-01收稿 )
HPLC法测定何首乌及复方虫草胶囊中大黄素、大黄素甲醚的含量△
北京医科大学药学院 ( 100083)　　杨东辉 　蔡少青　王璇
北京中医药大学中药学院　　　　魏璐雪
摘　要　采用 HPLC法测定了何首乌及含首乌制剂复方虫草胶囊中游离及结合型大黄素、大黄素甲醚的含
量。色谱柱: Wa ters型 C18柱 ( 10μm , 250 mm× 4. 6 mm) ;检测波长: 254 nm;流动相: 甲醇 -水 -磷酸 ( 850∶ 150
∶ 1) ;流速: 1 m L /min。 方法简便易行 ,结果准确 ,重现性好 ,可有效地控制生药及其制剂的质量。
关键词　何首乌　复方虫草胶囊　大黄素　大黄素甲醚
Determination of Emodin and Physcion in Capsules of Tuber Fleeceflower (Polygonum
multiflorum) and Its Complex Prescription with Cordycep by HPLC
Colleg e o f Pharmacy, Beijing Univ er sity o f Medical Sciences ( Beijing 100083)　 Yang Donghui, Cai Shaoqing and Wang
Xuan
Colleg e o f Chinese Ma teria Medica , Beijing Univ ersity o f TCM and Chinese Mate ria Medica　Wei Luxue
Abstract　　 Free and combined emodin and physcion in capsules of Polygonum mult if lorum Thunb.
and i ts complex prescription wi th cordycep w ere determined by HPLC. The chromatog raphic condi tions
adopted w ere: Waters C18 column ( 250 mm× 4. 6 mm, 10μm); detection waveleng th, 254 nm; mobi le
pha se, methano l-wa ter-pho spho ric acid ( 850∶ 150∶ 1) ; f low rate, 1 mL /min. The resul ts show ed that
this method is simple, easy and reliable.
Key words　　 Polygonum mult if lorum Thunb.　 Fufangchongcao Capsule　 emodin　 physcion
　　复方虫草胶囊由冬虫夏草、何首乌、黄花败酱、
灵芝及清半夏五味中药组成 ,为国家科委新药基金
资助项目 ,是针对慢性疲劳综合征 [1 ]而研制的。主要
功效为润肺养肝益肾、理气化湿和络。主治因肺、肝、
肾气阴不足 ,气滞湿阻 ,脉络不和所致的胸闷气短、
疲劳倦怠、腰膝酸软、失眠健忘、性功能减退、易患感
·177·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 3期
Address: Yang Donghui , College of Ph armacy, Bei jing University of Medical Sciences, Bei jing杨东辉　女 , 28岁。1995年毕业于黑龙江中医药大学中药系 ,获硕士学位。同年考入北京中医药大学中药学院攻读博士学位 ,并于 1998年获博士学位。 1998年至今 ,于北京医科大学药学院博士后流动站生药研究室工作 ,主要从事中药有效成分及中药质量标准的研究。近期研究方向为复方血清药化学的研究。参加的研究工作有“长瓣金莲花化学成分的研究”、“黄花败酱化学成分的研究”、“复方虫草胶囊质量标准的研究”及“补阳还五汤作用机制的研究” ,已发表和待发表论文 6篇。△本课题为国家科委新药基金赞助课题