全 文 ：17 种清热中药抗活性氧作用的研究△
广西 医科大学 (南宁 5 3。。 2 1) 龙盛京 .
广西中医学 院 罗佩卓 草 日昌
摘 要 为从天然 产物中筛选出具有较好抗氧化性能的药物 ,利用 H ZO Z一 C T M A B 一鲁米诺发光体
系 ,研究 了 17 种清热中药水提取物抗 活性氧 的作用 。 结果表明其对 H ZO : 均有不 同程度 的清除作
用 ,并呈量效关系 。 从抗氧化值 ( A O V ) 比较 , 白头翁 ( A O V 一 一 0 . 83 6) 抗氧化作用 比维生紊 C 强 ;
连翘 、 鸦胆子 、 鱼腥草 、 半枝莲和大青叶 ( A O V < 3) 也具有较强 的抗氧化能力 。 结果提示 : 白头翁 、 连
翘 、 鸦胆子 、 鱼腥草 、半枝莲和大青 叶是首选的抗活性氧的药物 。
关越词 化学发光分析法 抗活性氧 双氧水 清热中药
H
Z
O
: 为活性氧之一 , 活性氧分子在生物
体 内所引起的脂质过氧化可造成组织和细胞
的损伤 , 从而引起病理过程 。而机体 内清除活
性氧的活性物质不足是造成这种损伤的直接
原因 〔 1〕 。 因此 ,从天然产物 中寻找抗活性氧的
物质 已经引起国内外广泛重视 。 与人工合成
的抗 氧化剂相 比较 , 中药抗氧化剂具有易得 、
经济 , 已有长期使用经验和毒副作用小等 明
显优点 ,故 寻找和筛选具有 良好的抗 氧化性
能 的中草药对探索开发新药 、 指导老药临床
新用及了解 中药的作 用机制等都有裨益 。 我
们 采 用 化 学 发 光 分 析 法 , 利 用 H ZO Z -
C T M A B
一鲁 米诺 发光体 系 , 研 究 17 种 常用
清热中药水提取物抗活性氧的作用 。
1 实验材料与仪器
1
.
1 试样 : 受检 中药均购 自南 宁药材站 , 经
广西中医学院药学系周子静教授鉴定 。 金银
花 为 忍 冬 科 植 物 忍 冬 L on i oe ar 了a P o in ca
T h u n b 的干燥花蕾 ; 白头翁为毛莫科植物 白
头翁 P u l s a t i l l a e h i n e l : 5 15 ( B g e ) R e g e l 的干
燥根茎 ; 黄连 为毛莫科植 物黄连 C oP it : : hl’ -
n e n s i s F r a n e h 的干燥根 茎 ; 山豆根为豆科植
物 越南 槐 S OP h o ar t o n ki n e , ` 5 15 G a p n e p 的 干
燥根及根茎 ; 黄琴为唇形科植物黄芬 S o et Z-
za ir a 占a i c a ze n s i: G e o r g i 的干燥根 ; 天花粉为
葫 芦 科 植 物 括 楼 T ir c h o s a n t h e s ki r l o w i i
M a x im 的干 燥根 ; 知母 为 百合科 植 物知母
八 n e m a r r h e n a a sP h o d e l o i d e s B u n g e 的干燥根
茎 ; 射干为莺尾科植物射干 B el a , ca n d a 。 ih -
n e n is : ( L ) D C 的干燥根茎 ; 黄柏为芸香科植
物 黄柏 尸人e z zo d e n d or n a m u er n s e R u p r 除去
栓 皮 的树 皮 ; 大 青 叶为 十字 花科 植物 松蓝
乙 s a t i: i n` i g o t i e a F o r t 的干燥叶 ;连翘为木犀
科 植 物 连 翘 F o sr t h i a S u sP e n s a ( T h u n b )
V a ih 的干燥果实 ;鱼腥草为三白草科植物敢
菜 H o u t t卿 n i a c o r d a t a T h u n b 的干燥全 草 ;
桅 子 为 茜 草 科 植 物 桅 子 G a dr en ia aj s m i -
n ol’ d e : E il s 的干燥成熟果实 ;半边 莲为桔梗
科植物半边莲 L o b e l i a 。 h i n e n s i: L o u r 的干燥
全 草 ; 鸦胆 子 为苦 木科 植物 鸦胆 子 B ur o a
aj v a n i e a ( L ) M e r r 的干燥成熟果实 ;半 枝莲
为唇形科植物半枝莲 S c u t e l l a r i a b a r ba ta D ·
D o n 的干燥 全 草 ; 玉竹 为百 合科 植 物玉 竹
P o ly g o n a t u m o d d ar t u m ( M i l l ) D r n e e 的 干
燥根茎 。
1
.
2 试剂 : 鲁米诺 ( L u m i n o l )为德国 M e r e k -
cs h cu hr at 公 司产 品 ; 澳代 十六烷 基三 甲胺
( C T M A B )
、 双氧水 、 碳 酸钠和碳酸氢钠等均
,
A d d r e s s
:
L o n g S h e n g ii n g
,
G u a n g x i U n i v e r s i t y o f M e d i e a l S e i e n e e s
,
N a n n in g
龙盛京 男 ,副教授 。 卢西肺范大孚化学系毕业 , 现任广西 医科大学基 础部 副主任 , 广西高校化学学会常务理事 。 从事教学工作及医学 自由基研究工 作 , 目前研究方 向 : 用化学发光方法研究天然产物抗活性氧的作用 。 曾参与承担并完成两项 国家自然科学基金项 目 ;现 主持两项省教育厅科研项 目 。 发表科研论 文 30 余篇 。
△国家 自然科学基金 资助项 目 N o 3 9 0 6 0 0 2 8
·
4 0
·
为国产分析纯试剂; 所用水均为双蒸水 。
1
,
3 仪器 : D G 3 0 3 0 发光 光度计 ( 南京 华东
表面活性剂 C T M A B 能增 强该 体系 的发光
强度 。
电子管厂生产 ) 。
2 方法
2
.
1 供试液的制备 : 分别称取各受检中药材
5 9
, 用 1 5 0 m L 蒸馏水 冷浸 l h 后 , 煮沸 1 5
m i n
, 过滤 , 药渣第 2 次 、 第 3 次分别加水 1 0 0
m L 第 4 次加水 5 0 m L , 各煮沸 1 5 m i n ,合并
4 次滤液 , 水浴浓 缩至 20 m L ,装 瓶备用 (样
品液 l m L 相当于药材 0 . 25 9 ) , 临用时取原
液 1 份 ,加双蒸水 4 份稀释成 ( l m L 溶液相
当于原药材 0 . 05 9 )供试液 。
2
,
2 固体物质含量的测定 : 准确量取中药水
提液各 1 . 0 m L , 置于经洗净 ,干燥至恒重的
称量瓶 中 , 于 1 05 ℃烘箱 中烘烤 3 h ,冷后 称
重 , 平行 做 2 次 , 取 平 均 值 , 以 总 固 体含 量
m g /m L 提取液表示 。
2
.
3 测定方 法 : 参 照文献山 的方法 略加改
进 , 以提高发光体系的发光强度和稳定性 。在
测定管中依次加人 10 m m ol / L H ZO : (临用时
新配 ) 1 0 0 拜L 、 0 . 2 m o l / L p H 1 0 . 7 7 碳 酸盐
缓冲液 50 0 拼L , 加 人不 同体积 的供试液 (同
时用双蒸水作空白对照 ) , 混匀后置于仪器测
定室 中于 30 ℃加人 s m m ol / L 鲁米诺和 10
m m ol / L C T M A B 的等量混合液 5 0 0 拼L , 启
动反应 , 延时 15 8 后 , 测定 1 0 5 内发光强度
的平均值 。 每种样品平行测定 3 次 , 取平均
值 。 以下式计算相对清除率 ,用发光清除率的
大小来表示 中药清除 H ZO : 作用的大小 。
, ~ *
, 。 , 、 空 白对照值 一样品值 、 , , ~ 。 /清除率 (写 ) ~ 三曰畏书哭瑞毋兰竺竖 x l o o 环f , , 、 , 、 / u , 一 空 白对照值
3 结果
3
.
1 表 面活性剂对鲁米诺 一H ZO Z 发光体 系
的影响 : 按 实验方法 加人混合液 5 0 拌L ( 鲁
米诺 s m L 与表面活性剂 s m L 混合 ) , 同时
以鲁 米诺与双蒸 水等量混合 液作 为空 白对
照 , 结果见表 1 。 结果表明 ,非离子型表面活
性剂和阴离子型表面活性剂对 H ZO Z一鲁米诺
发光体系基本无增强发光作用 。 而 阳离子型
表 1 不 同表面活性剂对每米诺 一H : 0 2
发光体系的影响 (n 一 6)
表面活性剂 浓 度 发 光值` 士 s)
吐温一 2 0 1% 4 7 7 , 0士 4 1 . 0
吐温一 4 0 1% 4 6 7 . 8士 5 8 . 1
吐温 一 80 1% 5 7 7 . 8士 1 5 . 5
聚乙烯醇 l % 5 0 3 . 0士 62 . 3
C T M A B 10 m n l o l / L 2 4 6 4
.
0士 6 2 . 3
十二烷基硫酸钠 1 0 m m o l / L 4 8 9 . 0士 9 0 . 5
曲拉 通一 1 0 0 1 0
xrn
o l / L 4 8 2
.
2士 6 8 . 1
十二烷基磺酸钠 10 m m ol / L 4 4 . 5士 5 . 8
空 白对照 一 4 7 5 . 1土 85 . 8
3
.
2 鲁米诺与 C T M A B 不 同浓度混合液对
发光体系的影响 : 按 实验方法加人鲁米诺与
C T M A B 不同浓度混合液 50 0 拌L 。 表 2 结果
所示 : 鲁米诺 与 C T M A B 按 1 : 1 混合 比其
它 比例混合时 的发光强度大 , 并且稳定性增
加 。 这表 明 C T M A B 表面活性剂对 H ZO Z一鲁
米诺发光体系具有增敏增稳作用 。
表 2 . 米诺与 C T M A B 不同浓度混合液
对发光体系的影响 (n 一 6)
用 量 ( m L )
编号 ( 。烹禁工翻 X l牙黑结L严蒸水 发光强度(牙士 s )
0 5
9 1 1
.
6 7士 2 3 6 . 84
1 3 9 1
.
0 0士 1 16 . 15
1 9 5 6
.
8 0士 1 24 0 5
2 1 8 6
.
0 0士 9 2 . 3 9
2 4 6 4
.
0 0士 6 2 . 3 3
2 0 2 9
.
6 0士 2 8 3 . 28
1 7 4 8
.
4 0士 3 () 9 , 3 7
1 4 4 0 1汉士 1 5 7 . 9 4
1 1 9 3
.
0 0士 1 7 9 . 83
4 7 7
.
8 3士 2 0 . 4 9
月性八JC乙,土
2
CJ匕Jl合,10`
尸al一乃ù匕工Jd
亡Jla
ó
4ta
n匕厅才SQé
3
.
3 清热 中药抗 活性氧作 用 : 在弱碱条 件
下 , H 2 0 : 氧 化鲁 米诺而 发 光 , 发 光 体 系在
C T M A B 的存在下 , 可使发光体系增敏和 增
稳 。在这发光体系 中加人待测液 ,若待测液能
清除 H ZO Z , 则体 系发光强度下 降 ,故 可用发
光抑制率的大小来表示待测液清除 H 20 : 的
程度 。 我们用公认 的抗氧剂— V it C 作阳性对照物 。 17 种清热中药水提液对 H ZO : 的
消除作用见表 3 。
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 1 期
衰 317种油热中药水提液对 H ZO :的清除率 (写 )
药 名 颜 色 总固体含 t
( m g/ m L)
原液
(拌 L)
固体 AO V
`产 L)
金银花
半枝莲
山豆根
半边莲
白头翁
黄 荃
鸦胆子
鱼腥 草
大青叶
天花粉
玉 竹
Vit C
棕褐
黑褐
棕褐
棕褐
棕福
棕黑
棕褐
棕黑
棕黑
黄棕
棕 黑
棕 褐
黄揭
棕 褐
棕褐
橙黄
橙黄
1 2 3
.
0
4 2
.
2
4 3 3
9 6
.
8
6
.
6
31
.
6
4 3
.
8
8 7: 7
3 2
.
7
7 1 1
.
6
8 2
.
9
6 7
.
6
1 2
。
3
5 3
.
1
9 5
.
5
38
。
7
18 69
10
.
0
8 24
.
1 3
9 1 1
.
0 0
28 7
.
0 9
3 29
.
6 4
1 24
。
6 7
9 9
,
2 2
1 0 4 2
.
0
7 2 8
.
7 9
1 8 4 4 3
3 98
.
6 6
27
.
17
2 2 0
,
6 1
7 4
.
1 2
1 3 2
.
2 2
2 2 9
.
8 5
2 4 9 3
.
8
3 6 7 1 9
3 9
.
5 0
3
.
2 0 7
1
.
1 5 1
14
.
4 0
8
.
9 6 6
4 3
.
7 9
0
.
9 9 6 8
1 5 7
.
8 7
3 7
.
8 1
5
。
8 1 1
7
.
6 6 2
一 0 , 8 3 6
3
,
0 7 2
0
.
65 3 3
1
,
1 1
2
。
4 0 3
1 0 2 8
.
9 7
5 1 0
.
6 3
0
.
0 0
31827544796乞.2s’`323邓8530.2料肚&04925837661.40.3819.25.26...4278409915136897140.962.8“5246830197韶妇624.98.64.52.3710.9
柏子黄桅
翘干连射
黄 连母知
结果 表 明 : 17 种 清热 中药 水提 取物 对
H
2
0
: 都有一定的清除作用 ,并且大多数呈线
性 量效关 系 , 揭示 它们都 有直 接清 除 H ZO Z
的作用 , 但清除能力不同 。 如果单从量效关系
曲线 回归方程所推 出的原液 C I S。 ( 当清 除率
为 5 0 %时所需提取液用量的体积量 ) 或固体
C I
S。
( 当清除 率为 50 %时所需水提取物 中固
体量 )来 比较抗氧化程度的大小 ,往往有些情
况不好 比较 , 为了便于统一 比较 ,我们以生物
体 内公认的抗氧化剂 V it C 做 为抗氧化能力
的比较标准 , 按下式计 算 中药 对 H ZO : 的抗
氧化值 ( A O V ) 。
A O V -
S L 测 一 S L 标
S L 标
S L 测 ~ 原液 C I S。 X 固体 C l s。
SL 标 ~ V it C 原液 C I S。 X V i t C 固体 C I S。
规定 V it C 的 A O V 为零 , 当 A O V 为负
值时 ,该 中药抗双氧水的能力就 比 V it C 强 ,
反之亦然 。 正值越大 ,与 V it C 相比 ,抗双氧
水的能力就越弱 。 从表 3 中 A O V 值来看 , 白
头翁 的抗 H ZO : 氧 化能力 比维生素强 ; A O V
值 < 3 的有连翘 、 鸦胆子 、 鱼腥草 、 半枝莲 、 大
青 叶 , 这 5 种 中药水提液具有 强的抗双氧水
的能力 ; 3 < A O V 值 < 10 的有金银花 、 黄琴 、
黄连 、 知母 、 桅子 , 这些 中药水提取 液抗 双氧
。
4 2
·
水的能力较强 。
4 讨论
4
.
1 H
2
0
2一鲁 米诺反 应启动后发 光强度在
几秒内出现最高值 , 随后逐渐下降 , 发光强度
和 H ZO : 含量成正比 〔 2〕 。 在 H ZO Z一鲁米诺体系
中加人表面活性剂 , 结果表明非离子型 和阴
离子型的表面活性剂对 H ZO Z 一鲁米诺发光体
系没有增敏增稳作用 , 而 阳离子型表面活性
剂 C T M A B 可以使该体系发光强度增大 。 这
种增敏作用是由于息米诺 与双氧水在碱性条
件下的化学发光是一种亲核加成反应过程 ,
C T M A B 胶束 的生成可加快反应速度 , 、从而
引发化学发光反应输出信号的增加 〔3〕 。 此外 ,
C T M A B 胶束的形成有利于反应物激发态寿
命的延长 , 并 且在胶束 的 s t e m 区较小极性
的环境 中也有利于长 时间辐射 〔4〕 , 这两方面
作用的结果可增大发光体系的稳定性 。 因此
用 H ZO Z一鲁米 诺一 C T M A B 化 学发光 体 系来
研究天然产物抗活性氧的作用 ,具有稳定性
高 、 试剂用量少 、 发光强度大的优点 。
4
.
2 从研究结果来看 , 大多数中药水提取液
的量效关系呈线型关系 ,但也有例外 ,如半边
莲 、 桅子 、 连翘 , 当药液用量为 10 拜L 时的清
除率反而 比 5 拌L 时的小 ,这可能是因为水提
液 中含有某些金属微量元素 , 当金属浓度到
达一定程度时 , 对发光有增大的影响 。
4
.
3 中药抗氧化能力的大小与植 物所含化
学成分性质有关 , 与有效成分的溶解性有关 。
在 比较 天然产物 水溶性 物质 的抗 氧化能力
时 , 以 V it C 这种世界公认 的体 内优 良抗 氧
化剂作为 比较标准是合理并可被人们所接受
的 。 A O V 能较全面反映水溶性物质抗氧化
能力大小 。 笔者认为 A O V 值 < 5 的中药具有
比较强的抗 氧化能力 , 而 A O V 值 > 10 的中
药其抗氧化能力就比较弱 。 从提取液的颜 色
来看 , 一般颜色较深者 ,其对 H ZO : 的清除率
较高 ,这也提示这些清热中药水提液对 H ZO Z
的清除率与其所含的有效成分即溶出浓度有
关 ,可能也与植物色素有关 。
我 们 的研究 证 明了清热 中药在 体外对
H
Z
O
: 具有直接清除作用 ,而在体 内是否也有
或仅间接发挥作用 , 尚待进一步研究 。
参 考 文 献
1 陈 级 , 等 . 自由基 医学 . 北京 : 人民军 医出版社 , 1 9 9 1 :
2 2 3
2 龙盛京 , 等 . 广西 医学 院学报 , 1 9 9 2 , 9 (3 ) : 1
3 C A
,
9 4
:
2 1 8 9 80 ; 1 0 5
:
6 9 0 4 1
4 P a le o s CM
.
J P h o t o e h e m
,
1 9 8 2
,
1 8 ( 4 )
:
3 2 7
( 1 9 9 8
一
0 1
一
2 8 收稿 )
连翘提取物的抗炎镇痛作用
天津市药 品检验所 ( 3 0 0 0 7 0) 苗 等 辛 尾崎幸纺 ` ’ 唐元泰
摘 要 对连翘 70 % 甲醇提取物 的消炎镇痛作 用及其活性部位进行 了研究 。 将连翘干燥果实的 甲
醇提取液 、 正 己烷萃取 甲醇提取液后所得到 的正 己烷 可溶物 和水可溶物分别进行真 空冷冻干燥 ,
得到 3 种棕 色粉末状物质 。 通过小 鼠毛细血管通透性 、 扭体反 应 、 足趾肿胀 和肉芽肿实验表明 , 连
翘甲醇提取物和正 己烷 可溶物具有消炎和镇痛作用 , 而水溶物则无上 述效果 。 证 明甲醇提取物中
的消炎镇痛活性物质转移到正 己烷液中 , 即极性较低的脂溶性物质为其活性部位 。
关键词 连翘 抗 炎 镇痛
连翘是传统的中草药 , 为清热解毒要药 ,
具有抗菌 〔 , 〕 、抗病毒 、 消炎 、 镇痛等作用 。 国内
外 经常把连翘和其它的 中草药配伍 , 制成复
方制剂应用于临床 〔“ , ’ 〕 。 目前 , 对于连翘单味
药的研究多集 中于连翘子 〔` 〕和 叶 〔5 〕等所含的
化学成 分及 结构定性定量的测定 , 而对连翘
在抗炎镇痛方面药理作用及其活性部位的研
究 尚未见报道 。 因此 , 我们对这方面进行了探
讨 。
1 材料
1
.
1 连翘 : 购 自天津 中药饮片厂 , 经天津药
品 检 验 所 鉴 定 为 连 翘 F 田 心划 t h ia su sP en sa
( T h u n b
.
) V a h l 的果实 。
1
.
2 连翘 甲醇提取物的制备 : 将连翘干燥果
实粉碎 , 用 70 % 甲醇在 80 ℃水浴上回流提取
2 次 ,每次 6 h , 用纱布过滤 , 得到连翘的甲醇
提取液 , 减压蒸馏除去甲醇 , 再冷冻干燥处理
得棕色粉末状 的甲醇提取物 。 临用时用 1%
吐温 一 80 溶液配成所需浓度备用 。
1
.
3 正己烷可溶物 的制备 : 取以 1 . 2 法所得
到的甲醇提取液 , 用正 己烷以 1 : 1 进一步萃
取精制 ,得到可溶于正 己烷层 的棕色粉末状
提取物 , 即为正己烷可溶物 。 临用时按 70 %
甲醇提取物 3 9 / k g 剂量为基准 , 用 1 %吐温 -
8 0 溶液配成所需浓度备用 。
1
.
4 水可溶物的制备 : 正己烷提取后溶于水
A d d r e s s
:
R u i J in g
,
T i a n jin M u n i e ip a l I n s t i t u t e fo r D r u g C o n t r o l
,
T i a n jin
关 ` 日本 国立 医药品食 品卫生研究所生药部室长
《中草药 》 19 9 9 年第 3 0 卷第 1 期