全 文 ：作 中的一个关键 。
当前从传统 中药 中提 取有效单一成分 ,
已越来越受到人们的关注 。 然而本文所观察
到的是 当归水煮醇沉物的免疫活性 , 它从另
一个侧 面提示 了在反 映中药的药理活性 中 ,
应全面认识其不同组分的综合作用的结果 。
参 考 文 献
1 柳钟勋 , 等 中国中西 医结合杂志 , 1 9 92, 12 (6 ) : 3 78
2 周金黄 , 等主 编 . 中药免疫药 理学 . 北京 : 人 民军 医出
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3 周道 洪 , 等 . 中国免疫学杂志 , 1 9 86 , 2( l) : 39
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9 胡 国俊 ,等 . 中国免疫学杂志 , 1 9 9 5 , 1 1 ( 2 ) : 1 6 3
( 1 9 9 8
一
0 4
一
2 0 收稿 )
E f f e e t s o f C h i n e s e A n g e l i e a T u b e r ( A n g e l ica 夕i n e n s i s ) E t h a n o l S e d im e n t s
o n M i e e S P l e e n a n d T h y m u s L y m P h o e y t e s P r o l i f e r a t i o n i n v i t or
X ia X u e y a n a n d P e n g R e n x i u ( D e p a r t m e n t o f P h a r m a e o l o g y
,
H u b e i U n iv e r s i t y o f M
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,
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u h a n 4 3 0 0 7 1 )
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d im e n t ( E S A ) o b t a in e d f r o m th e a l e o h o li e p r e e i p it a t e o f e x t r a e t o f t u b e r o f A g e li c a s i n e n
-
5 15 (O li v
.
) D ie l s i n t h e p r e p a r a t io n o f A n g e l ie a i n i
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1 6 ~ 2
.
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.
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.
K e y w o r d s
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.
) D ie l s l y m p h o e y t e p r o l if e r a t io n
M T T
e o lo r im e t r y h y d r o P r e d n is o n e
极大螺旋藻胞内多糖对人血癌细胞生长的影响
南京大学医学院 ( 2 1 0 0 93) 刘宇峰 来 张成武 ” 沈海雁 ` ’ ` 李 恒 魏海燕
摘 要 应用半 固体琼脂培养法 和 M T T 法 研究 了极大螺旋藻胞 内多 糖对人血癌 细胞 U 937 和
H L
一
60 的影 响 。 实验结果 显示 , 对体外 生长的 U 93 7 细胞有促进生长 的作 用 , 而对体外生长的 H L -
60 细胞有抑制生长 的作 用 。 提示极大螺旋藻胞内多糖对人的血癌细胞 的生 长有明显的影响 。
关键词 极大螺旋藻胞内多糖 半固体琼脂培养法 M T T 法 U 9 37 H L 一 60
多糖不仅是所有生物有机体的重要结构
成分 ,而且也是一种重要的信号或信息分子
的受体 , 参与分子识别 、 细胞粘着及细胞的防
御机制 〔`〕 。 近年来 , 随着糖科学和糖技术的发
展 , 藻类多糖与其它多糖一样 , 在作为医药产
品方面 已 日益为人们所重视 〔2 〕 。 钝顶螺旋藻
SP iur il an P la et sn is 多糖能够 提高 机体免疫
功能 〔3〕 ,能够增强小 鼠骨髓细胞增殖能力 ,减
轻小 鼠骨髓细胞的辐射遗传损伤 〔4 ’ ” , , 并能明
显抑制体 内移植性癌细胞的增殖 〔6〕 。
极大 螺旋 藻 SP iur il an m a x im a 来 源于
美国 T e x a s 大学藻种保藏 中心 , 其胞 内多糖
奋
A d d r e s s
:
L iu Y u f e n g
,
M e d i e a l C o l l e f N a n ji
刘宇 峰 3 4 岁 , 1 9 8 6 年南京大学生物 毕业
n g U n i v e r s i t y
,
N a n j in g
,
1 9 9 1 年南 京大学生物系研究 生毕业 , 获硕士学位 。 1 9 9 1 年至今任南
京大学 医学院讲师 。 专业研究方向为细胞和分子生物学及肿瘤免疫学 。 近年 来主要从事螺旋藻蛋白及多糖对小 鼠免疫功能及人肿 瘤细胞生长影响的研究 , 已在 《中国海洋药物 》发 表论 文 1 篇 (嗜盐隐杆藻胞外多糖对小 鼠免疫 功能的影响 ) 。
“ 南 京化工大学生物技术与科学系 份 . 肠南京 大学 生物科学与技术系
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 2 期 一 1 1 5 .
分 子 量 为 1 . 3 X 10 6 , 主 要 由 葡 萄 糖 n m ol / L S 个浓度组 ,每组设 10 个相同样本 ) ,
( 6 7
.
7% )
、 岩 藻 糖 ( 16 . 8% ) 、 葡 萄 糖 醛 酸 对照则不加多糖 。 在 37 ℃ 、 5% C O : 浓度条件
(1 5
.
5% )组成 ,并含 9 种氨基酸 ,其糖昔键构 下培养第 4 、 6 、 8 、 10 日 ,计数各样本的细胞集
型为 a 型 。 为了研究该多糖是否能够作为肿 落数 (大于 20 个细胞的细胞团为一个集落 ) 。
瘤抑制药物的可能性 , 我们研究 了极大 螺旋 2 . 2 M T T 法 〔幻 : 将肿瘤细 胞悬液 1 m L 加
藻胞内多糖对人血癌细胞 的影响 。 到 2 4 孔培养板 中 (2 X I O4 /m L ) , 加人不同浓
1 材料 度 的极大螺旋藻多糖 (设 6 0 、 1 5 、 3 . 8 、 0 . 9 6 和
极大螺旋藻胞 内多糖 : 南京化工大学生物 0 . 24 mn ol / L S 个浓 度组
, 每个 浓度设 6 个
技 术与科学系张成 武提供 ; R P M l l 6 40 培养 相同样本 ) ,置 37 ℃ 、 5% C O Z 条件下培养至
液 : 美国 G ib e o 公司产品 ; H e p e s : 美国 S i g m a 第 4 、 6 、 8 、 1 0 、 1 2 日 , 从每孔取 1 0 0 拌L 细胞悬
公司产品 ; 小牛血清 : 杭州四 季青生物材料研 液 ,加 到另一 96 孔培养板 中 ,每 孔加 25 拼L
究所产品 ;琼脂糖 : 上海化学试剂采购站经销 M T T (5 m g /m L ) , 置 37 ℃继续培养 4 h , 每
产品 ; M T T : 美 国 S i g m a 公司产品 , 肿瘤细胞 孔加 1 0 0 拌L 溶解液终止反应 , 置 37 ℃过夜 ,
株 ( U 9 3 7 、 H L 一 6 0) : 中科院上海细胞所提供 。 第 2 日于波长 5 7 0 n m 处测 O D 值 。
2 方法 3 结果
2
.
1 半固体琼脂培养法的 : 下层琼脂糖浓度 3 . 1 对 U 9 37 细胞集落的影响 : 见表 1 。 第 8
为 0 . 5% ,含 1 6 % R PM I 1 6 4 0 ( 4X ) 、 2 0%小牛 日 6 0 和 1 5 n m o l / L 浓度组 的集落数与对照
血清 。 上层琼脂糖浓度为 0 . 3% , 除含与下层 组间存在显著差异 ,第 10 日则存在极显著的
相同浓度的 R PM I 1 6 4 0 和小牛血清外 , 还含 差异 , 第 10 白 3 . 8 n m ol / L 浓度组与对照组
有肿瘤细胞 4 X I O 3 /m L 、 不 同浓度的极大螺 间也存在着极显著 的差异 , 其它实验组 与对
旋 藻 多 糖 (共 设 6 0 、 1 5 、 3 . 8 、 0 . 9 6 和 0 . 2 4 照组间无显著差异 。
表 1 极大姆旋旅胞内多枯对 U , 3 7 细胞集落数的影响 (n ~ 10)
一一一李澳闹淮犷一一一一一一一一一一一一一一一一 一 ” ~ ~ 二 ’( n m o l / L ) 4 6 8 _ _ _ _ _ _ _ 1叼对照
0
.
2 4
0
.
9 6
3
。
8
1 5
6 0
9
.
7士 0 . 9 5
9
.
4士 2 . 0 1
9
.
8士 1 . 5 5
1 0
.
0士 1 . 15
1 1
.
4士 1 . 90
1 0
.
8士 2 . 10
9
.
9士 1 . 7 9
8
.
5士 1 . 0 8
9
.
6士 1 . 6 5
1 0
.
3士 1 . 4 9
1 0
.
7士 1 . 3 4
1 1
.
8士 1 . 8 7
7
.
9士 1 . 52
8
.
0士 1 . 8 9
8
.
3士 2 . 3 1
7
.
9士 1 . 4 5
1 0
.
1士 2 . 0 2 .
9
.
9士 1 . 7 3 .
5
.
9士 1 . 7 3
6
.
4士 1 . 4 3
7
.
4士 1 . 0 7
8
.
9士 2 . 0 2嘴 份
1 0
.
3士 2 . 1 6二
9
.
9士 2 . 4 2二
与对照组 比较 : . 尸 < 0 . 05 ` “ 尸 < 0 . O1( 下 同 )
3
.
2 对 U 9 37 细胞 M T T O D 值 的影
响 : 见表 2 。 6 0 n m o l / L 浓度组在第 6 、 8、 1 0 、
12 日与对 照组 间都存 着极 显著 的差 异 , 巧
n
m ol / L 浓度组在第 6 、 12 日与对照组 间存在
显著养异 , 而第 8 、 10 日则存 在极显 著的差
异 , 3 . 8 n m ol / L 浓度组在第 8 日与对照组间
存在 显著差异 , 第 10 日则存 在非 常显著差
异 ,其它实验组与相应对照组之间没有差异 。
表 2 与表 1 相 比较 ,二 者的结果总的来
说是一致的 , 实验组 60 和 15 n m ol / L 浓度组
与对照组 间差异极显著 ,且在一时间范围内 ,
多糖对 U 9 37 细胞的影响随着培养 时间延长
而增强 。
3
.
3 对 H L 一 6 0 集落形成的影响 ,见表 3 。 60 、
1 5
、
3
.
8 n m o l / L 浓度组在第 4 、 6 、 8 、 1 0 日与
对照组 间都存在极显著的差异 , 0 . 96 n m ol /
L 浓度组在第 4 、 6 日与对照组 间存在显著差
异 , 而在第 8 、 1 0 日则存 在极显 著差异 , 0 . 24
n m ol / L 浓度组在第 10 日也与对照组间存在
极显著差异 。
3
.
4 对 H L 一 6 0 细胞 M T T O D 值的影响 :见
表 4 。 6 0 n m o l / L 浓度组在第 6 、 8 、 1 0 、 1 2 日与
.
1 1 6
.
对照组 间存在极 显著的差异 , 15 n m ol / L 浓 度组在第 8 、 1 0 、 1 2 日都存在极显著的差异 ,
度组在第 6 日存在显著差 异 , 而在第 8 、 10 、 0 . 96 和 0 . 2 4 n m ol / L 浓度 组则在第 10 日分
12 日都存 在极 显著 的差异 , 3 . 8 n m ol / L 浓 别存在极显著差异和显著差异 。
裹 2 极大螺旋旅胞 内多箱对 U 93 7 细胞 M T T O D 值的影响 ( 0 D X 1 0 0 ) ( n = 6 )
多糖浓度一 一 - - - - - - - - - - - - - - - - - - -一 培荞夭数 ( d ) J - - 一 - - - - 一
( n m o l / L ) 4 6 8 1 0
.
1 2
对照 2 3 . 5 0士 1 . 6 9 3 3 . 2 2士 2 . 1 0 3 5 . 3 8士 2 . 9 2 4 0 . 6 2士 3 . 2 6 4 2 . 50士 4 . 7 7
0
.
2 4 2 0
.
8 8士 1 . 6 4 2 9 . 10士 1 . 6 0 3 0 . 1 3士 2 . 7 0 3 9 . 7 8士 3 . 7 8 48 . 38士 5 . 6 3
0
.
9 6 2 2
.
7 5士 3 . 6 9 2 9 . 2 5士 1 . 5 8 3 8 . 2 5士 3 . 7 7 4 4 . 2 7士 3 . 2 8 4 7 . 1 3士 4 . 1 7
3
.
8 2 4
.
7 5士 2 . 9 2 34 . 0 0士 5 . 1 3 4 2 . 3 8士 3 . 6 0 锌 5 3 . 1 3士 5 . 1 0 . “ 5 0 . 3 8士 6 . 2 7
1 5 1 9
.
3 8士 1 . 6 6 3 9 . 1 6士 3 . 1 6 . 4 5 . 8 8士 3 . 3 6 . 赞 6 5 . 3 8士 5 . 13 节 份 5 1 7 5士 5 . 4 7 “
6 0 1 8
.
6 3士 1 . 1 6 4 2 . 6 2士 3 . 6 3 钾 朴 5 2 . 6 3士 4 . 6 7 . “ 9 2 . 7 5士 7 . 2 3 荟 苍 5 9 . 3 8士 5 . 2 0 铃 苦
表 3 极大螺旋旅胞 内多糖对 H L 一 60 细胞集落形成的影响 (n 一 10)
多搪浓 度 培养天数 ( d)
( n m o l / L ) 4 6 8 1 0
对照 5 . 7士 1 . 0 6 6 . 4士 1 . 5 1 7 . 7士 1 . 1 6 9 . 6士 2 . 0 1
0
.
2 4 5
.
4士 0 . 8 4 5 . 8士 0 . 9 2 7 . 0士 0 . 9 4 7 . 5士 1 . 6 5 璐 份
0
.
9 6 4
.
6士 1 . 0 7 . 5 . 3士 0 . 8 2 赞 5 . 5士 0 . 9 7 甘 并 6 . 4士 1 . 1 7 份 苦
3
.
8 4
.
6士 1 . 2 6 . 粉 4 . 9士 1 . 1 0 份 . 4 . 2士 1 . 2 3 . “ 5 . 6士 0 . 9 7 份 借
1 5 4
.
0士 0 . 9 4 . 份 3 . 8士 1 . 1 4 钾 补 4 . 5士 1 . 0 8 协 . 4 . 0士 0 . 8 2 诱 .
6 0 2
.
1士 0 . 8 8 份 公 1 . 8士 0 . 7 9 赞 . 2 . 2士 0 . 79 苦 . 1 . 5土 0 53 圣 “
表 4 极大螺旋旅胞内多精对 H L 一 6 0 细胞 M T T O D 值的影响 ( o n 又 1 0 0 ) ( n = 6 )
一一硬添捅死盯一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一不百荞买贾阳万一一- 一- - 一 -一 - -一 - , -- - 一 -
( n m o l / L ) 4 6 8 1 0 1 2
对照 2 0 . 2 5士 1 . 9 6 9 2 . 7 5士 4 . 1 5 1 3 2 . 2 5士 2 . 4 9 1 0 7 . 0 0士 3 . 94 5 7 . 0 3士 1 . 7 1
0
.
2 4 2 0
.
5 0士 1 . 9 1 9 3 . 5 0士 2 . 6 0 1 3 4 . 8 5士 2 . 1 7 9 7 . 2 5士 5 . 58 铃 5 8 . 3 3士 5 . 2 2
0
.
9 6 2 0
.
0 0士 2 . 4 5 9 2 . 7 5士 3 . 1 1 1 2 7 . 2 5士 4 . 4 4 8 6 . 5 0士 3 . 2 3肠 怪 5 6 . 2 5士 2 . 1 7
3
.
8 2 1
.
7 5士 3 . 4 0 8 8 . 1 3士 1 . 2 3 1 2 5 . 7 5士 2 . 4 9 ` 祷 8 6 . 0 0士 4 . 5 3衬 否 5 2 . 0 4士 1 . 2 2赞 书
1 5 2 1
.
2 5士 2 . 6 3 8 6 7 3士 1 . 7 9倪 1 2 1 . 50士 3 . 2 0 “ “ 7 8 . 7 5士 4 . 9 7 ` 居 5 1 . 0 3士 2 . 0 1件 赞
6 0 1 8
.
7 5士 3 . 7 7 8 0 . 7 6士 1 . 10 , 普 1 0 8 . 4 3士 2 . 5 1 朴 甘 8 5 . 2 4士 3 . 7 7 衡 节 5 0 . 5 1士 4 . 5 0 甘 铃
表 4 与表 3 相 比 ,该多糖对 H L 一 60 的影 用具时效性 ,第 10 日作用最明显 。
响总的来说也是一致 的飞即 60 和 15 n m ol / L 极大 螺旋藻多糖 对 H L 一 60 细胞 的生长
浓度组影 响十分 明显 , 在一定培养时间内 ,这 具有明显的抑制作用 。 从表 3 、 4 可以看出 ,该
种影响随时间的延长而增强 。 多糖对 H L 一 60 的抑制也具有浓 度效 应和时
4 讨论 间效应 , 60 和 15 n m ol / L 浓度组 的抑制作用
多糖具有广泛 的生物学活性 〔9〕 , 将多糖 非常明显 。另外从时间上来看 ,该多糖对 H L -
作为抗肿瘤药物 , 可 以克服肿瘤病人化疗和 60 细胞的抑制作用在第 10 日前随培养时间
放疗过程 中在杀死肿瘤细胞的同时造成的对 延长而增强 , 至第 10 日这种作用达到最强 ,
机体正常细胞 的损伤 。 尤其多糖与一些抗癌 随后这种抑制作用逐渐减弱 。
药如 5一F U 、 环磷酞胺等合用 , 可恢复 由化疗 至于极大螺旋藻胞 内多糖促进 U 9 37 细
所 导 致 的免 疫功 能 低下 , 增 强抗 肿瘤 的作 胞生长及抑制 H L 一 60 生长的机制 , 目前还不
用 〔 l0j 。 加上多糖 的其它特征 , 如可作免疫调 十分清楚 。 有文献报道 ,多糖的抗肿瘤作用与
节剂 , 毒副作 用少 , 来源广等 〔的 , 多糖在肿瘤 其诱导大分子合成有关 , 尤其与诱生细胞因
治疗上具较广的应用前景 〔l0j 。 本文运用半固 子有密切 的关 系 〔的 , 多糖抑制癌细胞增殖的
体琼脂培养法和 M T T 法研究 了极大螺旋藻 分子机制主要是通过抑制 D N A 的合成起作
多糖对血癌细胞 U 9 37 和 H L 一 60 的影 响 , 该 用的 〔6 〕 。 螺旋藻多糖 因不能损伤癌细胞的复
多糖 对 U 9 37 细胞 的生长有明显促进作 用 , 制模板而不能直接杀伤癌细胞 ,其对移植肿
60 和 1 5 n m ol / L 浓度组的作用尤其 明显 , 从 瘤的抑制机制 主要属于代谢性抑制 , 随多糖
表 1 、 2 可 以看 出 , 该多糖对 U 9 37 的促进作 的除去 , 肿瘤 D N A 合成速率会逐渐恢复 〔7〕 。
《中草药 》 1 9 9 9 年第 30 卷第 2 期 . 1 1 7 .
极大螺旋藻多 糖对 H L 一 60 的抑制具有 时效
性 , 结果 与报道相一致 。 极大螺旋藻具体通过
何 种 机 制 来 抑 制 H L 一 60 细 胞 生 长 而 促 进
U 9 3 7 细胞的生长 ,还有待于进一步研究 。
参 考 文 献
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0 2
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L iu Y u fe n g
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l e u k e m ia H L
一
6 0 a n d U 9 3 7
肉欢蓉总昔对大鼠心肌缺血的保护作用
新疆医科大学基础部药理教研室 (乌鲁木齐 8 3 0 0 5 4) 毛新 民 朱 王晓雯 李琳琳 王雪飞
摘 要 采 用结扎冠状动脉造成大 鼠心 肌缺血模型 , 研究 了 肉从蓉总昔 ( G C )对缺 血心肌 的保护
作用 。 结扎冠状动脉后 , 心肌中 S O D 、 C P K 活性降低 , M D A 含量升高 , 心 电图表现为 S 一 T 段升高 ,
大 鼠静脉 给予 G C , s m in 后 再结扎冠脉 , 结果 G C 能 明显改善 缺血心 电 图 , 减小 心肌梗 死面积 , 提
高 心肌组织 中的 C P K 活力 ,但对 SO D 和 M D A 无显著影 响 , 提示 G C 具有保 护缺 血心肌作用 。
关健词 肉从蓉总昔 结扎冠脉 心肌缺血
肉从蓉又名大芸 ,是一传统 中药 ,具有补
中益气 、 补 肾益精等功效 。据文献报道肉从蓉
可增强机体免疫力 〔` 〕 、 延缓衰老 〔 2〕等作用 ; 李
巧 茹 〔 3〕等发现 其粗 制剂可 增加小 鼠红 细胞
SO D 活性 , 降低心肌脂褐质含量 。 肉从蓉总
昔 ( g l y e o s id e s o f e i s t a n e h e , G C ) 对异丙 肾上
腺 素 诱 发 的 小 鼠急性 心 肌 缺 血 有 保 护 作
用 〔4〕 , 并具有抗脂质过氧化和抗幅射作用 〔5 〕 。
本文 旨在研究 G C 对结扎大鼠冠脉所致心肌
缺血的影响 。
1 材料
1
.
1 药品与试剂 : 肉从蓉总昔 由新疆医学院
药 学系植物化学室按 日本文献 (公开特许公
报 ( A ) 昭 6 3一 1 9 8 6 2 7 ) 方法 , 从北疆产盐生 肉
从蓉中提得 ,主要成分是苯乙醇昔类 。三氯甲
烷为分析纯 ,邻苯三酚 、 硫化 巴 比妥酸 。 复方
A d d r e s s
:
M a o X i
毛新民 男 , 37 岁
n m i n
,
D e p a r t m e n t o f P h a r m a e o l o g y
,
X i n jin a n U n i e r s i t y o f M e d i e a l S el e n
e e s ,
W
u l u nr u q i
,
1 9 8 4 年获 医学学 士学位 , 1 9 8 8 年 获药理学硕 士学位 。 现 为新 疆医 科大学药理室 副主任 、 副 教授 ,
士生导师 。 曾于 1 9 9 4 年赴法 国留学一 年 , 从事 《寻找 并鉴别新 的微管蛋 白》的
药的研究 , 1 9 9 3 年获新疆 维吾尔 自治 区科技进步二等 奖 , 19 9 6 年获 国家级成
研究工作 。 现主要从事心 血管药理和中药民族
果奖 , 并于 1 9 9 6 年 和 1 9 9 8 年连续两届荣获新
祖医科大学优秀科 技工作者称号 。
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