全 文 ：研究报告
鱼 , 而经 24 h 浸泡的正常仔鱼不能存活 。 这种现象的主
要原因可能是胚胎具有卵膜 , 而卵膜对进人内部的物质
有一定的选择作用 , 因此在某种程度上起到保护胚胎的
作用 。
5 种有机磷农药对鱼免状黄姑鱼胚胎和仔鱼的毒
性存在一定的差异 。 从总体上看 , 甲胺磷对胚胎的毒性
最大 , 敌百虫和敌敌畏对仔鱼的毒性最强 , 映喃丹的毒
性居中 , 乐果对胚胎和仔鱼的毒性最小 , 这些差异可能与其本身结构不同有关别塾
参考文献
1 汝少国等。 青岛海洋大学学报 , 19 6 , 26 ( 2) : 197 一 2以
2 陈碧鹃 、陈民山 。 海洋环境科学 , 19 3 , 12 ( 2 ) : 12 一 2 7
3 唐学玺 、 李永棋 。 环境科学学报 , 19 8 , 18 ( 2) : 2以 一 20 7
4 唐学玺等 。 海洋环境科学 , 19 8 , 17 ( l) :卜 5
5 戴家银等 环境科学 , 19 7 , 18 ( 5) : 4 一 46
S T U D I E S O N T H E T O X I C IT I E S O F F IV E T Y P E S O F
O R G A N O P H O S P H A T E S T O T H E E M B R Y O N I C A N D L A R V A L
D E V E L O P M E N T O F 八i/ b e a m ic h ht ot 记亡s
HO NG W an
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d o p h o s w as th e om
s t t o x ie t o th
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lnb 叮 o n ie d e v e lo四 e n t , w h ile th e tihr e ih o orf n a n d d ie hl o v o s we 化 om re t o x i e t o th e lvar al d任
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e n l l玛二0 . H owe v e r , th e t o x oc ity o f th e d i m e t hoa t e t o t h e lo a wa s th e sam
e as t o t h e e lnb 叮。
·
螺旋藻藻蓝蛋 白对人血癌细胞株 H L 60 , K · 5 62 和 U 一 937 的生长
影响
张成武 刘宇峰 王 习霞
(南京化工大学生物工程与科学系 21 以X珍 )
沈海雁
提要 运 用半固体琼 脂培养法和 M rT 检测 法测定 了螺旋藻藻蓝蛋 白对人血癌细胞株 HL 60 ,
凡56 2 和 U一93 7 生长的影响 。 体外培养条件 下用 不 同浓度的螺旋藻藻蓝蛋白处理这 3 种肿瘤细胞 ,
结果显示螺旋藻藻蓝蛋白对这三种肿瘤细胞均有不 同程度的抑制作用 , 并存在浓度剂量效应 ,高浓
度抑制作用强
关键词 藻蓝蛋白 , 半固体琼脂培养法 , M rT 检测法 , 人血癌细胞
座毖实验证明螺旋藻能够降低血液中的胆固醇含量 , 增
强免疫功能 , 增加肠道乳酸菌群 , 降低重金属和药物的
肾毒性以及放射防护 , 尤其是螺旋藻细胞内生物活性成
分之一藻蓝蛋白 , 除了作为捕光色素蛋白参与光合作用
外 , 还具有多方面作用 。 ijI i lna 等 19 82 年首次研究发现 ,
收稿 日期 : 19 以冲 14 ;修回 日期 : 19 吕D下18
M an
n e cS i e n e e s / V o l 24
.
N o
.
l / 2 (义幻 函
研究报告
给注射有肝肿瘤细胞的实验小 白鼠口 服藻蓝蛋白后 ,
实验组的小白鼠比对照组的小 白鼠的成活率明显提
高 ; 进一步的研究发现 , 实验组的小白鼠的淋巴细胞活
性明显高于对照组以及正常小白鼠` ” 另外 , M 。。 0 5 等
198 8 年 , 19 2 年和蔡心涵等川的研究证明 , 用藻蓝蛋白
处理不同类型的肿瘤细胞作体内外激光治癌试验 , 藻
蓝蛋白具有光敏作用和良好的抑瘤作用 ! ` 之 ’ 。
本文研究了藻蓝蛋白单独对人血癌细胞株 HL 6o ,
-K 562 和 U一9 3 7 的体外作用 , 探索其成为抗癌药物的可
能性 。
1 材料和方法
1
.
1 材料
1
.
1
.
1 试 剂 藻蓝 蛋 白 系 由钝 顶 螺旋 藻
(助i耐 ian p范 te 。 台 ) 中分离 , 纯化而得 , 纯度达 A 620/
A 2 80 > / 4 ; RP M I
一
16粼)培液粉 (美国 GI B CO 公司 ) ; EH P
ES 液 ( iS ig l u 公司 ) ; 丙酮酸钠 (上海试剂三厂 ) ; L 谷氨
酸胺 (中国人民解放军第二军医大学药学系合成药物
研究室 ) ; 0 . 25 % 胰酶 (美国 GI B C O 公司 ) ; 二甲基亚矾
(上海试剂三 厂 ) ;噬哇蓝 ( iS g l n a 公司 ) 。
1
.
1
.
2 细胞株 H L 6( )人早幼粒细胞性 白血病
细胞 , -K 5 62 人慢性粒细胞急变白血病细胞 , 件9 37 人髓
性粒 一 单核细胞性白血病细胞由中科院上海细胞生物
学研究所提供 ,本实验室继代培养
1
.
1
.
3 仪器和设备 C仪 恒温培养箱 (美国 ) ,
DG 302 2A 型酶联免疫检测仪 (华东电子管厂 ) , 址 it z 倒
置显微镜 (德国 ) 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 半固体培养法 根据配方配制好上下两
层琼脂培养基 , 将下层琼脂培养基先铺于小培养瓶中 ,
每瓶 1 . 5 间 培养基 , 平放静置 , 待其自然冷却凝固 。 取
对数生长期的肿瘤细胞 20 (XX ) /间 按每管 10 川 加人
试管中 , 设不加藻蓝蛋白的为对照组和加不同浓度藻
蓝蛋白的为实验组 ( 8 0 拼g / inl ( I ) , 20 拼g / inl ( 1 ) , 5 拜g /
inl ( 11 )
,
1
.
25 拜g /耐 (W )和 0 . 3 1 拜g / inl ( V ) ) , 每组各设
10 个平行管 。 然后每管各加人上层琼脂培养基至总量
为 s inl , 混匀铺人已铺有下层琼脂培养基的培养瓶中 ,
置于 37 ℃ C认 培养箱中培养 。
1
.
2
.
2 计数 细胞培养至第 4 天 , 取出培养瓶 ,
在倒置显微镜下随机取一个视野 , 计数该视野中的集
落数 (含 20 个以上的细胞团为一个集落 ) 。 计数完后仍
将培养瓶置于培养箱中继续培养 , 以后每隔 l d 计数 1
次 , 直到第 12 天 。
1
.
2
.
3 M rT 检 测法 分别取对数生长期 的
H L 6()
,
-K 5 6 2
,
-U 937 细胞 ( 2 0 《XX )/ inl ) , 按每孔 I ln 接种
到 24 孔平底培养板中 , 设 5 个藻蓝蛋 白浓度实验组
(同半固体琼脂培养中设置 ) ,每组各设 6 个平行孔 。 细
胞培养至第 4 天开始进行检测 , 从 24 孔板中每孔移取
50 司 细胞液于 % 孔板的相应孔中 , 另外再设阴性对
照组 。 在 % 孔中每孔加人 or 风 M竹 液 , 置于 37 ℃水
浴箱中孵育 , 4 h 后取出 , 每孔加人 10 风 二甲基亚矾
终止反应 , 振荡 5 而n , 于波长 4 90 nl 处用酶标仪测 O D
值 , 以后每隔两天检测直至第 12 天 。
1
.
2
.
4 数据处理 各组 的数据以样本的均数
x 士 S 表示 , 然后用 t 检验进行统计学处理
2 实验结果
2
.
1 藻蓝蛋白对 H L~ 60 细胞生长的影响
由表 l 可见 , 藻蓝蛋白在较高浓度 ( 80 拌g / 司 ) 时
对 H L 60 细胞的生长有极显著的抑制作用 , 而较低浓
度时抑制作用减弱 。 当浓度降到 0 . 3 1 魄 / 耐 时 , HL 60
的集落数又有减少的趋势
表 1 藻蓝蛋白对 H l月刃细胞集落形成的影响厂X 士 s)
aT b
.
I T七e e肠ce t of P h》 c伙 ) 别吐n on ht e co ol n y’ of n 的 I此 of I n 月刃
组别 X
士 S
12 d
V
对照
1
.
2 士 0
.
6 3
2
.
1 士 0
.
9 9
2
.
2 士 0
.
6 3
2
.
9 士 1
.
2 0
2
.
4 士 0
.
5 2
2
.
7 士 0
.
6 7
1
.
5 土 0
.
7 1
2
.
1 士 0
.
9 9
2
.
2 士 0
.
6 2
2
.
9 士 0
.
9 9
2
.
4 士 0
.
5 2
3
.
3 土 0
.
7 5
1
.
4 士 0
.
5 2
梦 娜
3
.
0 土 0
.
6 7
甘 梦
3
.
2 土 0
.
6 3
3
.
1 士 0
.
7 4
2
.
0 士 0
.
9 4
砚 朴
3
.
5 土 0
.
5 3
I O d
1
.
6 士 0
.
7 0
3
.
3 土 0
.
8 2
3
.
2 士 0
.
6 1
3
.
3 士 0
.
8 2
2
.
5 士 0
.
5 3
3
.
4 士 0
.
7 0
1
.
5 士 0
.
5 3
份 荃
3
.
0 士 0
.
94
3
.
2 士 0
.
8 2
3
.
3 士 0
.
8 1
2
.
2 土 0
.
6 3
3
.
0 士 0
.
6 7
n日m
注 : , 检验 X 士 S ( n 二 1 0 ) ;与对照组相比 * P < 0 . 0 5 ; * 二 P < 0 . 0 1
由表 2可见 : 值能反映细胞的生长状况 , 藻蓝蛋白
在较高浓度时能显著降低 O D 值 , 说明高浓度藻蓝蛋白
能抑制 H卜印 细胞生长 , 而较低浓度时抑制作用也较
弱 。但当浓度低至 0 . 3 1 魄 /间 时其 O D 值在第 4 , 6 天分
函 海洋科学2/ 侧刃 年 /第 24 卷 /第 1期
研究报告
别与对照组形成非常显著和显著差异 ,这提示低浓度藻 一致 。
蓝蛋白可能具有另一种抑癌机制 ,这与半固体琼脂培养
表 2 藻蓝蛋白对 别皿月刃 值 ( 4性X) run )的影响 ( X 士 )S
aT b
.
2 T he e示对 of hP y co yC a l l i l l on hte O D v目讹 (4 90 nm , MT I
,
t es t o) f l . 月刃
组别 (
X 土 S )
4 d 6 d 8 d 10 d 12 d
I
l
m
R
V
对照
0
.
13 士 0
,
0 2 8
哥 艳
0
.
16 士 0
.
0 17
并 并
0
.
16 士 0
.
0 14
苍
0
.
2 0 土 0
.
0 3 0
0
.
15 士 0
.
0 7 1
蛋 务
0
.
2 3 土 0
.
0 5 2
0
.
16 士 0 0 2 1 0
.
2 3 士 0
.
0 14
0
.
14 士 0
.
0 2 1
件 苦
0
.
2 1 土 0
.
0 17
菩
0
.
18 土 0
.
0 10 0
.
2 5 士 0
.
0 2 9
0
.
4 0 士 0
.
02 0
开
0
.
4 4 土 0 04 0
苦
0
.
5 4 士 0
.
0 2 1
0
.
5 0 士 0
.
0 3 8
衡
0
.
5 5 士 0
.
0 2 5
0
.
5 6 土 0
.
05 0
0
.
3 1 土 0
.
04 7
并 普
0
.
4 3 士 0
.
0 3 9
资 务
0
.
4 2 士 0
.
0 3 5
资 并
0
.
14 土 0
.
0 34
甘 势
0
.
5 2 士 0 0 3 6
0
.
5 7 士 0
.
0 5 5
0
.
0 16 士 0
.
0 15
并 并
0
.
19 士 0
.
0 14
蚤 昔
0
.
2 1 土 0
.
0 19
各 等
0
.
4 1 士 0
.
0 2 8
件 关
0
.
5 0 土 0
.
0 3 8
0
.
5 2 士 0
.
0 5 3
注 : : 检验 X 士 S ( n 二 1 0 ) ;与对照组相比 , P < 0 . 0 5 ; “ P < 0 . 0 1
2
.
2 藻蓝蛋白对 -K 562 细胞生长的影响 低浓度时抑制作用减弱 。 藻蓝蛋 白的抑制作用在第
由表 3可见 :藻蓝蛋白在较高浓度 ( 80 魄闹 和 20 10 一 12 天时最为明显 。
魄 / inl )时对 -K 562 细胞的生长有显著的抑制作用 , 而较
表 3 藻蓝蛋白对 K 56 2 集落形成的影响 ( X 士 s)
aT b
.
3 1七e e肠ec t o f hP y c o c y别面n on ht e co lo ny fo r n” 魂 of K , 5 6 2
组别 X
土 S
4 d 6 d 8 d 10 d 12 d
对照
0
.
18 士 0
.
30
0
.
2 士 0
.
6 3
0
.
5 士 0
.
7 1
0
.
5 3 士 0
.
7 0
0
.
60 士 0
.
5 2
0
.
8 土 0
.
7 9
1
.
7 士 0
.
54
等 井
1
.
8 士 0
.
79
开 芬
2
.
1 土 1
.
4 5
耳
2
.
7 士 1
.
29
3
.
1 士 1
.
29
3
.
6 士 0
.
84
1 6 土 0
.
6 3
1
.
8 士 0
.
7 9
2
.
1 土 1 . 4 5
2
.
9 土 0
.
9 7
3
.
1 土 0
.
9 9
3
.
6 士 0
.
84
2
.
1 士 0
.
8 1
戈 补
2
.
9 士 0
.
8 8
井 冬
4
.
3 土 0
.
9 5
井 资
4
.
5 士 0
.
9 1
书
4
.
7 士 0
.
9 5
3
.
8 士 1
.
4 8
2
.
3 士 0
.
6 4
怜 怜
2
.
3 士 0
.
6 7
怜 釜
3
.
1 土 0
.
9 9
井 务
3
.
4 士 0
.
7 1
关
3
.
4 士 0
.
7 0
3
.
8 士 1
.
4 8
丁1Tl
mn
曰
V
注 : l 检验 X 士 S ( 。 = 1 0 ) ; 与对照组相比 , P < 0 . 0 5 ; * 关 尸 < 0 . 0 1
由表 4 可见 , O D 值能反映细胞的生长状况 , 藻蓝
蛋白在较高浓度时能显著降低 O D 值 , 说明高浓度藻蓝
蛋白能抑制 K 562 细胞的生长 , 而较低浓度时抑制作用
较弱 。 藻蓝蛋白对 -K 562 的抑制作用在第 10 , 12 天最为
明显 , 这与半固体培养法结果相同。
表 4
T日b . 4
藻蓝蛋白对 K 56 2 O D 值 ( 4叨 nm )的影响了X 土 s)
T卜 e e肠ce t of bP yco 勺汕加 on t】l e O D v al ue
组别
I
l
m
R
V
对照
4 d
M l l
,
,
r e s t 4 9() nm )
o f -K 56 2
X 士 S
6 d s d 10 d 12 d
0
.
09 士 0
.
0 13
资 关
0
.
1 1 上 0
.
0 15
衡 苍
0
.
14 士 0
.
0 14
0
.
15 土 0
.
0 2 1
0
.
15 士 0
.
0 2 0
0
.
16 士 0
.
0 19
0
.
2 3 士 0
.
0 2 1
赞 势
0
.
2 6 士 0
.
0 24
兮 资
0
.
3 1 士 0
.
0 2 7
斗 件
0
.
3 3 士 0
.
04 2
件
0
.
34 士 0
.
04 5
0
.
3 9 士 0
.
04 1
0
.
50 土 0
.
04 1
份
0
.
6 1 士 0
.
0 5 4
蚤 “
0
.
6 9 土 0
.
0 3 5
骨 骨
0
.
5 5 士 0
.
04 8
件 赞
0
.
6 6 士 0
.
0 5 6
并 普
0
.
7 2 土 0
.
0 3 8
升 含
0
.
6 1 士 0
.
0 7 3
赞
0
.
7 1 士 0
.
0 6 5 5
关 矜
0
.
7 4 士 0
.
0 5 1
苦 粉
0
.
6 7 士 0
.
0 5 8 0
.
7 2 士 0
.
0 7 7
苦 决
0
.
7 8 士 0
.
0 5 3
签
0
.
69 士 0
.
0 16 0 7 6 士 0
.
0 7 9 0
.
8 1 士 0
.
0 5 4
0
.
70 士 0
.
8 4 0
.
8 7 土 0
.
0 5 2 0
.
9 3 士 0
.
0 6 5
注 : t 检验 X 士 S ( n 二 10 ) ; 与对照组相比 关 P < 0 . 0 5 . 、 , P < 0 . 0 1
2
.
3 藻蓝蛋 白对 U 一 9 37 细胞生长的影响
由表 5 可见 : 藻蓝蛋白在较高浓度 ( 80 拜g / h d 和 20
魄 / 耐 )时对 -u 937 细胞的生长有显著的抑制作用 , 而较
低浓度时抑制作用减弱 。 藻蓝蛋白的抑制作用在第 10
至第 12 天最为明显 , 当藻蓝蛋白浓度为 0 . 31 魄 / inl
时 , -U 937 细胞的集落与对照组接近 ,不表现抑制作用 。
M ;红 I l l e cS i e n e e s / V o l
.
24 N
o
.
1/ 2《X X〕 函
研究报告
表 5 藻蓝蛋白对 U 9 37集落形成的影响 (X 士 5夕
aT b
.
5 Tb e e伤 eC t of Ph y a洲刁 a刘由 on ht e co ol n y of r n . gn of U 9 3 7
组别 培养时间 ( d)
4 6 8 10 12
工
l
m
n
-
V
对照
5
.
1士 1
.
6 6
苍
7
.
0 士 1
.
33
’
7
.
3士 2
.
2 1
9
.
2 士 1
.
14
9
.
5 士 1
.
9 0
8
.
7 士 1
.
16
5 5士 1
.
0 8
香 怜
6
.
4士 1 17怜 怜
7
.
9士 1 9 7
9
.
2士 2
.
10
9
.
9士 0
,
9 9
9
.
0 士 2 . 〕 〕
6
.
6 士 1
.
3 5
赞 赞
8
,
l 士 1
.
9 7
苦 普
8
.
5 土 1
.
5 8
件 书
9
.
6 士 1 . 5 8
10
.
7 士 1
.
7 0
10
.
8 士 1
.
3 2
5
.
9 士 0
.
7 4
赞 赞
7
.
7 士 1
.
3 4
务 斧
8
.
4 士 1
.
0 7
多 书
9
.
3 士 1 . 2 5 普 普
1 1
.
2 士 1
.
0 3
10
.
8 士 1
.
2 3
5
.
6 士 2
.
0 1
釜 关
6
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4 士 0
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8 4
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7
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0 士 1
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2 5
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8
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0 土 1 . 2 5 苍 苍
10
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34
10
.
1 土 1
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6 0
注 : t 检验 X 土 5 ( 。 = 1 0 ) ;与对照组相比 , P < 0 . 05 , “ P < 0 . 0 1
由表 6可见 : 藻蓝蛋白在较高浓度时能显著降低 而较低浓度时抑制作用较弱 。
O D 值 , 说明高浓度藻蓝蛋白能抑制 U9 37 细胞的生长 ,
表 6 藻蓝蛋 白对 D 9 37 0 D 值的影响 (4 叩 nm , X 土 )S
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6 T b e e价对 of 油 y以兀 y a l l il . o n het 0 D val ue ( 49() nI 入11 1…) of U 9 3 7
组别一4 6 8 10 12Ilm乃Y对照 0 . 13 土 0 . 0 2 1 份 诱 0 . 2 2 士 0 . 0 2 0 势 苍 0 . 4 6 士 0 . 0 2 7 资 普0 . 16 土 0 . 0 14 0 . 2 4 上 0 . 0 3 3 势 号 0 , 5 5 士 0 . 0 50 许 怜0 . 15 士 0 . 0 17 0 . 2 8 士 0 . 0 2 0 件 赞 0 . 5 7 士 0 . 04 90 . 18 士 0 . 0 2 1 0 . 4 0 士 0 . 0 2 8 件 0 , 6 3 士 0 . 0 140 . 17 士 0 . 0 14 0 . 3 7 士 0 . 0 3 3 份 0 . 6 3 士 0 . 0 700 , 17 士 0 . 0 2 2 0 . 3 3 士 0 . 0 2 8 0 . 5 9 士 0 . 0 75 0 . 2 8 士 0 . 0 2 9 资 赞 0 , 2 9 士 0 . 0 2 1 朴 怜0 . 3 8 土 0 . 0 3 5 潇 0 . 3 7 士 0 . 0 3 0 份 并0 . 3 5 士 0 . 0 5 5 关 0 . 4 2 土 0 0 2 40 . 3 1 士 0 . 0 5 0 粉 资 0 . 30 士 0 . 04 1 资 关0 . 4 士 0 . 04 9 0 4 3 士 0 . 0 3 50 . 4 3 士 0 . 0 3 5 0 . 4 2 士 0 . 0 2 3注 : r 检验 X 土 5 ( n 二 10 ) ; 与对照组相比 * P < 0 . 0 5 , * * P < 0 . 0 13 讨论藻蓝蛋白作为藻胆蛋白家族中的一员 , 因为有称为藻蓝胆素的毗咯发色团 , 加上具有能溶于水和化学性质稳定等特性 , 因而在医学研究中作为很好的示踪物 。藻蓝蛋白除了具有特殊的物理性质外还具有多种生物活性 , 有关实验表明 , 藻蓝蛋白具有一定的防癌抗癌 , 增强免疫功能 , 增强骨髓造血功能 , 降低重金属和药物肾毒性 。 M o cr os 等 19 2 年研究发现藻蓝蛋白能被肿瘤细胞选择性吸收到细胞膜中 ,但对藻蓝蛋白对肿瘤细胞的作用机理还了解得不清楚 , 这方面的研究有待深人 , 藻蓝蛋白可能对肿瘤的 D NA 合成有影响 。 从本实验可以看出 , 藻蓝蛋白对人血癌细胞有直接作用 , 可望成为一种抗肿瘤剂 。巍参考文献1 蔡心涵 、 郑 树等。 肿瘤防治研究 , 1 9 5 , 2 ( l) : 19 ~ 212 蔡心涵 、何立明等 。 中国海洋药物杂志 , 19 5 , 1 : 巧 一 18T H E E F F E C T O F P H Y C O C Y A N I N F R O M SP iru il n a P 勿te n s is O NT H E G R O W T H O F H U M A N L E U K A E M I A C E L L
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西乙 海洋科学 2/ “ 年碟 “ 4 卷 /第 ’ 期