全 文 ：3. 3　综合评价以上结果 ,一滴清的退热效果快速、
稳定、持久 ,优于西药泰诺 ,而且与目前现有治疗小
儿外感发热的中药制剂比较 ,一滴清具有以下特点:
①纯中药组成 ,用量少。②经临床试验未见明显毒副
反应。③鼻粘膜给药 ,途径新 ,吸收快 ,效果好。④经
济、方便、实用。因此 ,一滴清是治疗小儿外感发热的
有效药物 ,是中药剂改实施于儿科急症之新创 ,有相
当的临床应用价值。
活血化瘀注射液对急性重型胰腺炎大鼠胰腺、肺白细胞聚集的影响
张艳军 1 ,赵连根 2 ,吴咸中 2
( 1. 天津中医学院 中药系 ,天津　 300193; 2. 天津市中西医结合急腹症研究所 ,天津　 300100)
摘　要: 目的　对实验性急性重型胰腺炎 ( SAP)大鼠胰腺、肺的白细胞聚集进行定量研究。方法　应用胆胰管内逆
行注射牛磺酸钠的方法引起大鼠 SAP,造模前经颈 iv 99m Tc标记白细胞 ,记录 SAP后 3, 6, 12, 24 h胰腺、肺放射
量 ,测定各脏器髓过氧化物酶 ( M PO )活性 ,进行白细胞聚集定量 ,并观察了组织病理改变。 结果　 SAP大鼠 3 h胰
腺、肺白细胞聚集即显著增加 ,而且逐渐增多 ,活血化瘀注射液 ( HHI-I)能够明显抵制白细胞在胰腺、肺的聚集。 结
论　 HHI-I通过抑制白细胞内皮细胞粘附 ,减少白细胞在组织的聚集 ,从而对胰外脏器起保护作用。
关键词: 活血化瘀注射液 ;急性重型胰腺炎 ; 99m Tc标记白细胞 ;髓过氧化物酶 ;白细胞聚集
中图分类号: 285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 06 0537 04
Inhibitory effect of HUOXUEHUAYU INJECTION (HHI-I) on leukocyte aggregation of
acute and severe type pancreatitis in pancreas and lung of rat
ZHANG Yan-jun1 , ZHAO Lian-gen2 , WU Xian-zhong2
　　 ( 1. Depa rtment o f Chinese Ma teria Medica , Tianjin Colleg e of TCM , Tianjin 300193, China; 2. Tianjin Institute of A-
cute Abdomen in Combina tion o f Chinese T raditional and Weste rn Medicine, Tianjin 300100, China )
Key words: HUOXU EHUAYU IN JECTION ( HHI-I) ; SAP;
99m
Tc labelled leukocy te; M PO; leuko-
cyte agg regation
　　急性重型胰腺炎 ( SAP)实质上是一种全身性炎
症反应综合征 ( SIRS) ,继续发展 ,则最终导致多脏
器功能衰竭 ( MOF)。大量临床研究表明 ,早期或晚
期出现的 MO F是急性重型胰腺炎的主要死亡原
因 [1 ] ,白细胞特别是中性粒细胞的过度激活与 SAP
时胰腺局部的病理变化和胰外脏器的损害有密切关
系 [2 ]。已证实活血化瘀注射液 ( HHI-I)能够明显减
少 SAP发生时肠系膜毛细血管后静脉白细胞滚动、
粘附的增加 ,并使血流速度和壁切率恢复恢复正
常 [3 ]。 我们对大鼠实验性 SAP病理生理过程中 ,胰
腺、肺组织白细胞的聚集进行了动态、定量研究 ,并
观察了 HHI-I的作用。
1　材料与方法
1. 1　动物及分组:健康 Wista r大鼠 (购于军事医学
科学院四所 ) 130只 ,体重 220～ 300 g ,雌雄各半 ,用
标准颗粒混合饲料喂养 1周后开始实验。将实验动
物随机分为假手术对照组 ( n= 10) ; SAP模型组
(n= 40) , SAP+ HHI-I组 (n= 40) , SAP+ 复方丹参
注射液组 (n= 40) ,后 3组又分为 3, 6, 12, 24 h亚
组 ,每亚组各 10只。
1. 2　药物: HHI-I由南开医院药厂制备每毫升相当
生药 1 g。复方丹参注射液由上海第一生化制药公司
生产 ,批号 971002。牛黄胆酸钠为 Sigma公司产品。
1. 3　实验方法: 禁食一夜开始实验 ,将大鼠以 20%
乌拉坦 0. 5 mg /kg体重麻醉。无菌条件下进行手
术 ,右颈静脉插管 ( PE50医用塑料管 ,内径 0. 5
mm ,外径 0. 8 mm,日本夏目制作所制 ) ,以备输液
用。 开腹 ,其中 SAP组、 SAP+ HHI-I组、 SAP+ 丹
参组结扎大鼠总胆管 ,经十二指肠乳头将插管插入
胆胰管 0. 5 cm,逆行注入 5%牛磺胆酸钠溶液 ( 0. 1
·537·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 6期
收稿日期: 2000-12-10基金项目:天津市卫生局科研基金资助课题 ( 98KY-9)作者简介:张艳军 ( 1967-) ,男 , 2000年 6月天津医科大学中西医结合专业博士研究生毕业 ,主要从事活血化瘀中药作用机制研究 ,发表论文 10余篇 ,获天津市科技进步三等奖 2项。
m L /100 g体重 /min)复制 SAP模型 ,注射完毕后松
开结扎胆总管的丝线。随即用微量 ,蠕动泵分别经颈
静脉插管输入生理盐水、 HHI-I和复方丹参注射液 ,
2 mL /h ,给药剂量按 60 kg成人每公斤体重剂量的
15倍换算。各亚组分别于 3, 6, 12, 24 h颈椎脱臼处
死。假手术组不复制 SAP模型 ,仅经颈静脉输入生
理盐水 , 12 h后颈椎脱臼处死。取出胰腺、肺组织以
备检测放射活性、髓过氧化物酶 ( M PO)、组织病理
形态。
1. 4　 99m Tc标记白细胞 [ 4]
1. 4. 1　供体大鼠白细胞的分离: 健康 Wistar大鼠 ,
无菌心脏取血 ,肝素抗凝 ,按体积比 1∶ 1加入无菌
的 6%相对分子质量为 50万 u的右旋糖苷 ( Dex-
tran 500)生理盐水溶液 ,反复翻覆 40次 ,使其混匀 ;
竖直静置于 37℃温箱内使其沉降 ; 10 min后可见
清晰分层 ,以吸管小心吸取上层富含白细胞的血清 ,
其余部分继续沉降 ,出现清晰分层后即可吸取上清 ,
如此沉降 1. 5 h,将富含白细胞的上清收集于离心
管 , 1 500 r /min离心 10 min,弃上清 ;加入 8 mL冷
三蒸水 ,轻轻混匀 ,使红细胞被低渗破坏 , 1 min后
加入 2 m L 4. 5%氯化钠溶液 ,轻轻摇匀 ;以生理盐
水洗 2次 , 1 500 r /min离心 10 min。
1. 4. 2　99m Tc标记白细胞:将获得的白细胞团重悬
与生理盐水溶液 ,加入99m Tc-Exametazime,室温孵
育 15 min, 1 500r /min离心 10 min,将白细胞团用
生理盐水重悬 ,浓度为 1. 5× 106 cfu /mL,γ-计数器
检测放射活性后备用。
每只实验动物在复制 SAP模型以前 ,经颈静脉
插管注入 99m Tc标记的白细胞悬液 0. 2 mL,待实验
结束处死动物 ,分别取胰腺、肺组织 ( 0. 2-0. 4 g ) ,生
理盐水冲洗 ,滤纸吸干表面水分 ,称重后 γ-计数器
检测放射活性。结果用每克组织放射量占注射白细
胞的放射量的百分比表示 [% ID /g ]。
1. 5　 M PO检测 [4, 5 ]: 分离的胰腺、肺组织用生理盐
水冲洗 ,滤纸吸干表面水分 ,称重 ,液氮速冻 , - 80
℃储存备检测。 10%胰腺组织匀浆 ,匀桨液为含有
0. 5%十六烷基三甲基溴铵和 5%刀豆胰蛋白酶抑
制剂的 0. 05 mol /L磷酸钾缓冲液 ( pH6)。将匀浆液
40 W下超声震荡 1 min,干冰冷冻 ,融化后再重复
上述过程 ,如此反复 3次。 将此悬液低温离心 ,
20 000 g , 0～ 4℃ , 15 min。取 100μL上清加入 2. 9
mL含有 0. 167 mg /mL邻联二茴香胺和 0. 0005%
过氧化氢的 0. 05 mol /L磷酸钾缓冲液中 ,分光光度
计 460 nm检测吸光度 ( A460 ) 3 min,计算 1～ 3 min
之间的 A460变化率 (δA460 )代表 M PO活性。肺组织
M PO活性检测除组织匀浆液不加胰蛋白酶抑制剂
外 ,其余均与胰腺组织 M PO检测相同。
1. 6　病理形态: 取出 12 h时间段大鼠胰腺、肺组
织 ,生理盐水冲洗 ,福尔马林固定 ,石蜡包埋 , 5μm
切片 , HE染色 ,光镜观察。
1. 7　统计学处理:方差分析用 F检验 ,两两比较用
q检验。
2　结果
2. 1　胰腺、肺组织放射量: SAP组胰腺 99m Tc标记
白细胞水平明显高与假手术组 ,造模后 6, 12, 24 h
比 3 h明显增加 , HHI-I治疗组可显著降低胰腺组
织99m Tc标记白细胞水平 ,丹参治疗组则没有明显作
用 ,见表 1。
肺组织99m Tc标记白细胞水平 SAP组明显高与
假手术组 ,造模后 3, 6, 12, 24 h之间没有明显差异 ,
HHI-I治疗组可显著降低肺组织 99m Tc标记白细胞
水平 ,丹参治疗组则没有明显作用 ,见表 2。
2. 2　胰腺、肺组织 MPO活性: 胰腺、肺组织
M PO活性 SAP组明显高与假手术组 ,而且造模后
3, 6, 12, 24 h呈进行性增加 , HHI-I治疗组可显著降
低胰腺、肺组织 M PO活性 ,丹参治疗组则没有明显
作用 ,见表 3, 4。
2. 3　各组 12 h时间段胰腺、肺组织病理学改变: 假
手术组胰腺、肺无明显病理学改变 ,无炎细胞浸润。
SAP组大鼠胰腺组织大片出血性坏死 ,小叶结构破
坏 ,细胞轮廊不清 ,有大量弥漫炎细胞浸润 ,其中主
要为中性粒细胞及少许单核细胞。 肺组织表现为肺
泡壁增厚 ,可见典型的局灶性肺不张 ,间质内有大量
炎细胞浸润 ,弥漫性肺泡壁毛细血管淤血。SAP+ 复
方丹参注射液组大鼠胰腺组织大片出血性坏死 ,小
叶结构破坏 ,细胞轮廊不清 ,有明显炎细胞浸润。 肺
表 1　各组胰腺组织放射量 (% ID /g)
组别 3 h 6 h 12 h 24 h
假手术组 　　　 0. 014± 0. 003# #
SAP组 　　 0. 173± 0. 008 　　 0. 232± 0. 009△△ 0. 243± 0. 012△△ 　　 0. 248± 0. 012△△
SAP+ 丹参 0. 173± 0. 011 0. 235± 0. 011 0. 240± 0. 010 0. 249± 0. 011
SAP+ HHI-I 0. 017± 0. 005# 0. 021± 0. 005# # 0. 021± 0. 007# # 0. 024± 0. 005# #
　　　　与 3 h相比: △△ P < 0. 01;　与 SAP组、 SAP+ 丹参组相比: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
·538· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 6期
表 2　各组肺组织放射量 (% ID /g)
组别 3 h 6 h 12 h 24 h
假手术组 　　　 0. 164± 0. 011# #
SAP组 　　 0. 545± 0. 010 　　 0. 532± 0. 014 0. 529± 0. 010 　　 0. 540± 0. 011
SAP+ 丹参 0. 512± 0. 014 0. 528± 0. 018 0. 537± 0. 011 0. 540± 0. 024
SAP+ HHI-I 0. 232± 0. 018# 0. 240± 0. 016# # 0. 240± 0. 015# # 0. 0241± 0. 020# #
　　　　与 SAP组、 SAP+ 丹参组相比: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
表 3　各组胰腺组织 MPO活量 (δA460 )
组别 3 h 6 h 12 h 24 h
假手术组 　　 0. 218± 0. 017# #
SAP组 　　 0. 382± 0. 013 　　 0. 631± 0. 012* * 0. 683± 0. 011* * ☆☆ 　 0. 711± 0. 007* * ☆☆△△
SAP+ 丹参 0. 373± 0. 018 0. 622± 0. 010 0. 686± 0. 014 0. 710± 0. 007
SAP+ HHI-I 0. 222± 0. 013# 0. 346± 0. 024# # 0. 333± 0. 019# # 0. 341± 0. 021# #
　　　　与 3 h相比: * * P < 0. 01;　与 6 h相比: ☆☆ P < 0. 01;　与 12 h相比: △△ P < 0. 01
　　与 SAP组、 SAP+ 丹参组相比: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
表 4　各组肺组织 MPO活性 (δA460 )
组别 3 h 6 h 12 h 24 h
假手术组 　　 0. 371± 0. 015# #
SAP组 　　 0. 630± 0. 020 　　 0. 791± 0. 013* * 0. 875± 0. 016* * △△ 　 0. 888± 0. 018* * △△
SAP+ 丹参 0. 620± 0. 015 0. 775± 0. 020 0. 866± 0. 017 0. 883± 0. 015
SAP+ HHI-I 0. 419± 0. 009# 0. 489± 0. 034# # 0. 504± 0. 041# # 0. 494± 0. 025# #
　　　　与 3 h相比: * * P < 0. 01;　与 6 h相比: △△ P < 0. 01;　与 SAP组、 SAP+ 丹参组相比: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
组织表现为肺泡壁增厚 ,间质闪有炎细胞浸润 ,肺泡
壁毛细血管中度淤血。 SAP+ HHI-I组大鼠胰腺组
织大片出血性坏死 ,小叶结构破坏 ,细胞轮廓不清 ,
但极少见炎细胞浸润。肺组织肺泡壁轻度增厚 ,肺泡
壁毛细血管轻度瘀血 ,散在炎细胞浸润。
3　讨论
近年来 ,缺血再灌注以及白细胞内皮细胞相互
作用在急性胰腺炎 ( AP)微循环损伤中的作用受到
重视。 Menger [6 ]实验发生 ,大鼠胰腺缺血 /再灌后可
见白细胞沿内皮细胞衬层的滚动增加 ,持续粘附的
细胞增加 50～ 100倍。 同时可见血清脂肪酶大幅度
升高 ,胰组织检查见白细胞浸润明显增加。Wemer[ 4]
用锝 -99m ( 99m Tc)标记白细胞研究了大鼠不同程度
的 AP后的白细胞组织浸润的情况。实验结果表明 ,
水肿性胰腺炎胰组织中标记白细胞明显增加 ;随
AP严重性的增加还有进一步增加。作者认为 ,胰组
织白细胞浸润与胰腺炎严重程度有关。胰蛋白酶原
激活是早期现象 ,白细胞在组织中的募集的增加则
使 AP不断加重。我们的实验结果也表明 ,大鼠胆胰
管逆行性注射 5%牛黄胆酸钠造成 SAP后 3, 6, 12,
24 h白细胞在胰组织募集持续增多。
肺损害在 SAP时极为常见 ,在发生的 MOF
中 ,肺损害发生最早 ,多表现为成人呼吸窘迫综合征
( ARDS)。近年认为多形核白细胞 ( PMN)在 ARDS
的发生和发展中起重要作用。 SAP时 ,有众多因素
促使 PMN激活并向肺微血管内皮细胞粘附 ,在肺
组织中募集。 激活的 PMN释放大量的炎性介质和
细胞因子 ,进一步损伤微血管内皮细胞 ,破坏内皮细
胞的完整性 ,同时还能增加促凝血物质活性 ,导致缺
血和血栓形成 ,最终引起肺肺血管通透性增加 ,肺间
质增宽水肿 ,肺出血坏死和低氧血症 [7 ]。 Murakami
等 [8 ]发现 AP时粒细胞被激活并产生 O÷2 及 H2O2 ,
它们可增加白细胞 -内皮细胞粘附以及嗜中性白细
胞向肺腔的浸润 ,在 ARDS发生中起最重要的作
用。 我们的实验结果亦表明实验性 SAP大鼠肺组
织99m Tc标记白细胞放射活性、 MPO活性 3 h时已
明显升高 ,提示肺组织已开始有大量的白细胞募集 ,
而且在 24 h内持续增高 ,肺组织组织形态表现为大
量弥漫性中性粒细胞浸润 ,肺泡壁明显增厚 ,广泛肺
泡壁毛细血管瘀血。
基于现代医学对中医血瘀和血瘀证的大量研
究 ,血瘀证的主要病理基础是微循环障碍 ,血瘀与现
代医学的微循环障碍症 ,以及活血化瘀疗效与现代
医学微循环障碍的改善关系密切。 而白细胞内皮细
胞过度粘附又可导致明显的微循环障碍 ,所以 ,我们
明确提出抗白细胞内皮细胞过度粘附可能为活血化
瘀中药的作用机制之一 ,活血化瘀中药可能对白细
胞内皮细胞过度粘附有调节作用。 HHI-I是我们将
临床治疗 SAP有效方剂中的活血化瘀药 ,通过正交
设计 ,筛选出最有效药物组分 ,制成的静脉注射剂 ,
·539·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 6期
主要由桃仁、赤勺等提取物组成 ,本研究发现 , HHI-
I治疗组胰组织的白细胞聚集明显减少 ,但 HHI-I
治疗并不能改善胰腺的坏死 ,这也许是胰管逆行性
注射 5%牛黄胆酸钠已造成了胰腺不可逆的出血坏
死的缘故。 HHI-I可明显降低肺组织放射活性 ,减少
MPO活性 ,提示 HHI-I通过抑制白细胞内皮细胞
的过度粘附而减轻了中性粒细胞在肺组织的聚集 ,
从而发挥了对 SAP相关肺损伤的保护作用。
SAP时胰腺及胰外脏器损害的共同特征是大
量活化的白细胞在受损脏器聚集 ,白细胞在组织中
的定量将有助于评估白细胞在 SAP中的作用及其
评价治疗效果。关于白细胞的定量方法 ,主要有组织
学评定和 M PO活性检测 ,另外 , Wemer还推荐了
一种新的方法 -99m Tc标记白细胞 [4 ]。3种方法各有优
缺点 ,组织学评定只能半定量 ,但可以定性定位 ;
M PO活性检测是人们使用率最高的一种定量方法 ,
M PO是白细胞特有的一种酶 ,储存于嗜苯胺蓝颗粒
中 , M PO活性可以间接反映白细胞水平。但是由于
一些药物可以影响此酶活性如肝素等 ,这就相对影
响了该方法的准确性。99m Tc标记白细胞方法作为一
种新的定量方法 ,已被常规用于一些疾病炎性部位
的检测 ,也可以更好的用实验研究中白细胞在组织
中聚集的定量 [4 ]。我们将 3种方法联合应用 ,定量检
测了 SAP过程中白细胞在组织聚集 ,并观察了
HHI-I的治疗作用 ,结果显示 3种方法的结果还是
比较一致的。
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necroti zing pancreati ti s [ J] . Surg, 1995, 118: 547-554.
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·540· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 6期