全 文 ：由基清除酶( SOD, 过氧化氢酶, 谷胱甘肽过氧化物
酶等)的活性降低, 导致氧自由基堆积,氧自由基可
转变为羟基自由基, 后者活性更强, 使膜脂质过氧
化,引起细胞膜的结构和功能损害,从而加剧缺血组
织损伤[ 10, 11]。本实验结果表明, 回心草能明显提高
心肌缺血大鼠血清 SOD 活性, 显著降低血清 MDA
的水平,提示滇产回心草具有一定程度的抗心肌缺
血时脂质过氧化作用, 这可能是回心草抗心肌缺血、
保护心肌细胞的机制之一。
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中华眼镜蛇蛇毒及复方丹参抑制异种移植免疫排斥的实验研究
戚 峰, 王鹏志,朱理玮,邱宇杰X
(天津医科大学总医院 普通外科, 天津 300052)
摘 要: 目的 研究中华眼睛蛇蛇毒因子( CCV )及复方丹参在异种移植中的作用。方法 采用颈部套袖法建立豚
鼠对大鼠心脏异种移植模型。于术前 24 h 按 0. 5 mg / kg ip CCV ,术中以复方丹参注射液灌注供心并 iv 复方丹参。
研究对照组、CCV 组和 CCV+ 丹参组供心存活时间、复跳时间及血清补体水平的变化。结果 CCV 可明显降低血
清补体水平, 延长供心存活时间,复方丹参注射液可缩短供心复跳时间。二者合用可进一步延长供心存活时间。结
论 在异种移植中补体起着关键的作用, CCV 通过降低血清补体水平抑制超急性排斥反应 ( HAR) 的发生, 复方
丹参可减少供心缺血损伤, 并改善微循环, CCV 和复方丹参合用对 HAR 有良好的抑制效果。
关键词: 异种移植;中华眼镜蛇蛇毒( CCV ) ;丹参; 超急性排斥反应( HAR) ;补体
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2001) 12 1106 03
Studies on effects of Chinese Cobra Venom and COMPOSITE SALVIA MILTIORRHIZA
INJECTION on hyperacute rejection of xenotransplantation
QI Feng, WANG Peng-zhi, ZHU Li-wei, QIU Yu-jie
( Depar tment o f Sur ger y , Head Hospit al A ffiliat ed o f T ianjin Univer sity of M edical Sciences, T ianjin 300052, China)
Key words: x enot ransplantation; Chinese Cobra Venom ( CCV) ; Salvia mil tiorrhiz a Bge. ; hyper acute
reject ion ( HAR) ; complement
随着同种异体移植技术的成熟及在临床上的广
泛开展,供体器官短缺的问题越来越突出[ 1]。异种移
植从理论上可以提供无限的供体器官来源, 如果能
够在临床上成功开展, 则可以使众多终末期器官衰
竭的患者得到救治。但是,异种移植面临着比同种异
体移植更为复杂的免疫排斥反应,尤其异种抗体和
补体介导的超急性排斥反应( HAR)有可能使移植
物在几小时内即被排斥[ 2] , 目前对其机制的研究尚
不十分深入,也无临床异种移植成功的报道。本研究
建立豚鼠对大鼠异种移植模型,联合应用补体抑制
·1106· 中草药 Chinese T raditiona l and Herbal D rugs 2001 年第 32 卷第 12期
X 收稿日期: 2001-05-21作者简介:戚 峰( 1970-) ,男,河北省人,主治医师,博士学位, 1995年毕业于天津医科大学临床医学系, 并获硕士学位,同年,分配于天津医科大学总医院普通外科。1998年考入天津医科大学中西医结合临床(外科)专业, 2001 年毕业,获博士学位,毕业后继续在天津医科大学总医院普通外科工作。主要从事普通外科临床及有关肿瘤致病机理、器官移植、中西医结合临床应用等方面研究,参加了有关肿瘤致癌基因、小肠移植、肝移植、异种心脏移植的基础研究, 小肠移植、肝移植的临床应用与尝试,以及中西医结合治疗临床外科疾病方面的研究探索工作。
剂中华眼镜蛇蛇毒( Chinese Cobra Venom, CCV)
和中药复方丹参, 研究其在异种移植中的作用, 为异
种移植的临床应用提供理论基础。
1 材料
1. 1 药品:中华眼睛蛇蛇毒由广州蛇毒研究所提
供,冻干粉剂,用双蒸水稀释,配成蛇毒溶液。复方丹
参注射液: 贵州神奇制药有限公司产品, 批号:
200008021。
1. 2 动物:雄性 Wistar 大鼠,体重为 200～250 g;
豚鼠, 体重为 200～250 g。实验动物均由天津药物
研究院提供。
1. 3 器材: 德国蔡司双人双目显微镜, 显微手术
器械。
2 方法
2. 1 异种移植模型的建立: 根据 Heron 颈部套袖
法的手术模式加以改进建立豚鼠对大鼠异种异位心
脏移植模型[ 3]。供、受体均以 4% 水合氯醛按 7. 5
mg / kg ip 麻醉,分离受体大鼠右侧颈外静脉和颈总
动脉,离断后近心端分别置血管套管,以微血管夹夹
闭血管。供体豚鼠开胸,经下腔静脉注入肝素盐水
( 50 U / mL) 0. 5 mL,使全身血液肝素化。自下腔静
脉插管注入 4℃ 含有 25 U/ mL 肝素的乳酸钠林格
氏液或含有 800 mg / L 丹参素的复方丹参注射液,
灌注心脏。仔细分离、剪断供心无名动脉及左肺动
脉,其余血管结扎后剪断。将供心左肺动脉与受体大
鼠右颈外静脉套管连接,无名动脉与右颈总动脉套
管连接。松开微血管夹,可见供心恢复血运,并出现
自主节律性搏动。
2. 2 术后观察: 术后 0. 5 h 内可直视下观察供心跳
动情况,以后也可在大鼠颈部很容易的看到供心的
搏动。从供心复跳至完全停止跳动的时间作为供心
存活时间。
2. 3 实验分组和给药方法: 将受体大鼠分为对照
组、CCV 组和 CCV+ 丹参组,每组 6只大鼠。对照
组仅行异种移植手术, 术中以含有肝素的乳酸钠林
格氏液灌注心脏, 不给其它药物; CCV 组受体大鼠
术前 24 h 按 0. 5 mg/ kg ip CCV, 其它同对照组;
CCV + 丹参组在给予 CCV 的同时,于术中采用含
有肝素的复方丹参注射液灌注供心,并在恢复供心
血运后经受体大鼠阴茎背静脉给予复方丹参注射液
(按 20 mg / kg 丹参素 iv)。
2. 4 补体总活性测定:每组大鼠于手术前经左颈外
静脉取血 0. 5mL,血样室温下静置 50 min后 2 000
r/ m in 离心 15 min,收集血清测定补体总溶血活性
( CH50)
[ 4]。
3 结果
3. 1 异种移植后供心存活时间比较:见表 1。CCV
组供心存活时间与对照组相比有极显著差异 ( P<
0. 01) ,而加用丹参后, 供心存活时间较 CCV 组也
有显著性差 ( P< 0. 05)。
表 1 各组供心存活时间及恢复血供后供心复跳时间比较
组别 供心存活时间( h ) 供心复跳时间( s)
对照组 0. 24±0. 06 48. 17±6. 68
CCV 5. 17±1. 63* * 50. 33±4. 55
CCV+ 丹参 7. 25±1. 04△* * 22. 50±4. 37△△* *
与对照组比较: * * P < 0. 01;
与 CCV 组比较: △P < 0. 05 △P < 0. 01
3. 2 供心恢复血运后复跳时间比较:供心恢复血运
后,颜色变红,出现心肌纤颤, 然后转为节律性搏动。
各组供心自恢复血运至出现节律性搏动的时间称为
供心复跳时间, 研究发现 CCV+ 丹参组的供心复跳
时间比对照组及 CCV 组均有极显著的差异 ( P <
0. 01) ,见表 1。
3. 3 CCV 对受体大鼠血清补体总溶血活性
( CH50) 的影响: 给予 CCV 后, 使 CH50 明显降低,
CCV 组及 CCV+ 丹参组与对照组比较均有极显著
性差异 ( P< 0. 01) ,见表 2。
表 2 各组 CH50 比较
组别 CH50 ( U /m L)
对照组 29. 79±4. 49
CCV 2. 28±1. 33* *
CCV+ 丹参 3. 95±1. 92* *
与对照组比较: * * P < 0. 01
4 讨论
异种移植虽然具有广阔的应用前景,但是其复
杂的免疫排斥反应又制约了它的发展。通常根据种
属的差异和移植后免疫排斥反应的不同将异种移植
分为协调性异种移植和非协调性异种移植,豚鼠对
大鼠的移植即属于后者[ 5]。非协调性异种移植在移
植后数分钟至数小时内会发生非常严重的超急性排
斥反应( HAR)导致移植物失去功能。本实验中的对
照组在不给药的情况下, 豚鼠供心停跳的时间平均
为 0. 24 h, 说明在很短的时间内即发生了严重的
HAR。
目前的研究表明, 异种移植的 HAR 主要是由
体液免疫介导的免疫反应。由于在受体动物血清中
预先存在着抗移植物的“天然抗体”,在移植后,此天
然抗体可与移植物血管内皮细胞表面的异种抗原结
合, 激活受者的补体系统, 攻击移植物血管内皮细
胞, 从而引发 HAR。另外, 补体系统也可以不依赖
·1107·中草药 Chinese T raditiona l and Herbal D rugs 2001 年第 32 卷第 12期
于天然抗体而激活。由于移植物与受体种属之间的
差异, 导致移植物的补体调节蛋白无法抑制受者补
体系统的激活, 从而无法防止 HAR 的发展[ 6]。因此,
补体系统在 HAR 的发生过程中起着关键的作用。
眼睛蛇蛇毒因子 ( CVF) 又称为抗补体因子,
是一种来源于眼镜蛇蛇毒的性质稳定的抗补体糖蛋
白,它具有 C3, C5转化酶的作用, 可在血清其它蛋白
因子(如 B, D 因子)参与下,激活补体旁路途径而不
断激活补体 C3, C5直至其最终耗竭, 造成血清补体
水平下降, 经典及旁路途径均失活[ 7]。CCV 是从中
华眼镜蛇蛇毒中分离纯化出的 CVF,其在体内较其
它来源的 CVF 具有更强的抗补体活性,且一次给
药后可在较长时间内维持低补体水平[ 8]。本研究在
术前 24 h 按 0. 5 mg/ kg 给予受体大鼠 CCV, 术前
检测用药组大鼠血清补体水平较对照组有非常明显
的下降, 几乎接近于 0, 说明 CCV 有较强的降补体
作用。由于使用 CCV 耗竭补体,阻断了 HAR 的发
展, CCV 组及 CCV + 丹参组供心存活时间较对照
组均有明显延长, 表明补体在 HAR 中起着非常重
要的作用。
复方丹参注射液是活血化瘀药物,含有丹参和
降香, 其主要有效成分为丹参素,可扩张血管、改善
微循环,抗血液凝固、促进纤溶系统激活, 抑制血小
板功能和血栓形成。而 HAR 主要的病理改变就是
广泛微血管内血栓形成、血小板凝集。此外,研究表
明复方丹参对 IgM、IgG 抗体有明显的抑制作用,可
调节蛋白代谢和免疫功能[ 9]。本研究在使用 CCV
抑制补体的同时,加用复方丹参注射液可使异种移
植后供心存活时间进一步延长, 证明复方丹参在调
节机体免疫功能及血凝系统方面有一定作用,可延
缓 HAR的发生。而且,丹参在缺血状态下可抑制心
肌收缩,减少能量消耗保护心肌。苏晓华等研究也发
现丹参素对心肌线粒体呼吸链的功能有保护作用,
且可调节能量代谢、防止氧自由基的毒性作
用[ 10, 11]。因此使用复方丹参注射液作为供心的灌注
液对心肌有良好的保护作用, 减少供心的冷缺血及
热缺血损伤, CCV+ 丹参组供心恢复血运后复跳时
间明显短于对照组及单独使用 CCV 组。
本研究表明, 在异种移植中补体系统起着关键
的作用,联合使用 CCV 和复方丹参注射液可降低
补体水平, 改善供心微循环、防止血小板凝集, 减少
心肌损伤,延缓 HAR 的发生。因此, 可作为抑制异
种移植免疫排斥反应的一种有效的治疗方法。
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注射用消障素对家兔实验性萘性白内障的防治作用
李宝瑗1 ,闵红波2 ,张富赓1,王士贤1,冯文茹1,章 萍1X
( 1. 天津市医药科学研究所, 天津 300070; 2. 中国人民解放军 455 医院 眼科, 上海 200052)
摘 要: 目的 研究注射用消障素对家兔实验性萘性白内障的防治作用。方法 以 30% 萘混悬液 2. 65 mL / ( kg·
d) 给家兔 ig , 连续 8 d,制作成萘性白内障模型。注射用消障素预防治疗起始于造模前 4 d,高、低剂量组为 0. 1 及
0. 05 mL 原液/眼,隔日球结膜下注射1 次, 共 6 次。每日以裂隙灯显微镜追踪检查家兔晶状体混浊度的变化。于实
·1108· 中草药 Chinese T raditiona l and Herbal D rugs 2001 年第 32 卷第 12期
X 收稿日期: 2001-06-20